Антитела строение классификация функции. Антитела в крови: что это такое и какова их норма? Выделение и очистка антител

Антитела (иммуноглобулины) - белки плазмы крови, которые об­разуются в организме под влиянием антигенов. Основным свойством антител является специфичность, то есть способность соединяться с тем

антигеном, который вызвал их образование. Специфичность антител обусловлена активными центрами, то есть участками молекулы иммуноглобулина, которые соединяются с детерминантными группами (эпитопами) антигена. Число активных центров называют валентностью антител.

Химическая природа антител. Это гликопротеиды. Состоят из двух тяжелых полипептидных цепей - Н-цепей (англ, heavy - тяжелый) и двух легких цепей - L-цепей (англ, light - легкий). Цепи связаны дисульфидными мостиками. Как в легких, так и в тяжелых цепях имеется вариабельная V-обдасть с непостоянной последовательностью амино­кислот, и константная С-область. Аминокислоты в полипептидных це­пях направлены таким образом, что их NН2-концевые группы распо­ложены в вариабельной части, а СООН-концевые группы - в констант­ной.

При обработке протеолитическим ферментом папаином молекула иммуноглобулина распадается на Fab-фрагменты (англ, fragment an­tigen binding - фрагмент, связывающий антиген) и Fc-фрагмент (англ. fragment cristalline - кристаллизующийся фрагмент). В состав Fab-фрагмента входит целиком легкая цепь и часть тяжелой цепи, концевые их части составляют активный центр. В состав Fc-фрагмента входят остатки двух тяжелых цепей.

Активный центр молекулы иммуноглобулина по конфигурации со­ответствует конфигурации детерминантной группе антигена. Он очень мал, занимает лишь 2% поверхности антитела. Описанная мономерная молекула иммуноглобулина имеет два активных центра, то есть может связать две молекулы антигена.

Будучи белками, антитела (иммуноглобулины) обладают анти­генной, видовой специфичностью. Детерминантная группа, определя­ющая специфичность, расположена в области Fc-фрагмента. Наличие антигенной специфичности иммуноглобулинов имеет практическое зна­чение, так как позволяет обнаружить их с помощью антиглобулиновых сывороток.

Различают пять классов иммуноглобулинов, которые обозначаются IgG, IgM, IgA, IgD, IgE и отличаются между собой по физико-химичес­ким свойствам и биологическим функциям (рис. 17).

Иммуноглобулины класса G (Ig G) являются мономерами, то есть состоят из двух легких и двух тяжелых цепей, молекулярная масса 160 кД, константа седиментации (скорость осаждения в центрифу­ге) 7S. Составляют основную массу сывороточных иммуноглобули­нов (70-80%). Единственные из всех классов проникают через пла­центу и играют важную роль в защите новорожденного от инфек­ции.

Иммуноглобу­лины класса М (Ig М) первыми появ­ляются после введе­ния антигена. Мо­лекула IgM состоит из 5 субъединиц, то есть является пентамером. Молеку­лярная масса 300 кД, константа се­диментации 19S. Содержание в сыворотке крови 5-10%.

Иммуноглобулины класса A (Ig А) синтезируются в селезенке, лимфоузлах и подслизистом слое дыхательных путей и кишечного тракта. По физико-химическим свойствам неодинаковы и могут иметь константы седиментации 7,9,11 и 18S. Часть IgA попадает в кровь - это сывороточные IgA. Большая же часть IgA - это секреторные SIgA, у которых два или три мономера соединены между собой сек­реторным фрагментом, защищающим иммуноглобулин от разруше­ния ферментами. Секреторные SIgA проникают на поверхность сли­зистых оболочек, содержатся в секретах и играют важную роль в защите организма от проникновения возбудителей, например, ви­русов гриппа, полиомиелита.

Иммуноглобулины класса D (Ig D) - молекулярная масса 180 кД, константа седиментации 7S. Содержание в сыворотке крови около 0,2%. Роль IgD пока неизвестна

Иммуноглобулины класса Е (Ig E) - молекулярная масса 200 кД, кон­станта седиментации 8S, содержатся в нормальной сыворотке крови в небольших количествах (0,002%). Их называют также реагинами, по­скольку они способны присоединяться к клеткам (цитофильны) и при­нимают участие в реакции анафилаксии

Форма и размеры иммуноглобулинов G и Мбыли изучены в элект­ронном микроскопе. IgG имеют форму вытянутых эллипсов с тупыми концами, a IgM - форму паучка с пятью ножками.

67. Местный иммунитет: определение понятия, основные механизмы; особенности структуры секреторных иммуноглобулинов, месте их образования и функции.

Местный иммунитет - это особый вид защиты против внедрения в организм возбудителей инфекций, главным образом кишечных и воз­душно-капельных. Большую роль здесь играют неспецифические фак­торы и антитела, так называемые секреторные иммуноглобулины клас­са A (SIgA). Иммуноглобулины IgA - белки, представляющие класс антител А, обеспечивающих местный иммунитет. Иммуноглобулины класса A (Ig А) синтезируются в селезенке, лимфоузлах и подслизистом слое дыхательных путей и кишечного тракта. По физико-химическим свойствам неодинаковы и могут иметь константы седиментации 7,9,11 и 18S. Часть IgA попадает в кровь - это сывороточные IgA. Большая же часть IgA - это секреторные SIgA, у которых два или три мономера соединены между собой сек­реторным фрагментом, защищающим иммуноглобулин от разруше­ния ферментами. Секреторные S IgA проникают на поверхность сли­зистых оболочек, содержатся в секретах и играют важную роль в защите организма от проникновения возбудителей, например, ви­русов гриппа, полиомиелита.

Инфекционная иммунология, определение понятия. Особенности антибактериального, противовирусного иммунитета. Роль системы главного комплекса гистосовместимости (HLA) в формировании инфекционного иммунитета.

Впервые Эдуард Дженнер провел вакцинацию против оспы путем заражения человека оспой коров. Пастер создал вакцины против бе­шенства и сибирской язвы и научно обосновал принципы получения живых вакцин. Мечников построил фагоцитарную теорию иммуните­та. Бухнер обнаружил бактерицидные свойства сыворотки крови. Эрлихом была предложена гуморальная теория иммунитета. Беринг и Ру создали лечебные антитоксические сыворотки против дифтерии и столбняка. Это направление иммунологии ("инфекционная иммуно­логия") развивалась в дальнейшем и продолжает развиваться. Достиг­нуты значительные успехи в профилактике, лечении и диагностике инфекционных заболеваний.

HLA-система представляет собой комплекс генов, выполняющих различные биологические функции, и в первую очередь обеспечивающих генетический контроль иммунного ответа и взаимодействие между собой клеток, которые реализуют этот ответ.

Антибактериальный иммунитет , который может быть стерильным и нестерильным. При стерильном иммунитете микроорганизмы из организма удаляются, а иммунитет сохраняется. При нестерильном иммунитете для поддержания иммунитета необходимо присутствие в организме небольшого количества микроорганизмов (иммунитет к туберкулезу);

Противовирусный иммунитет обеспечивает нейтрализа­цию вирионов или подавление их образования.

Неспецифическая противовирусная резистентность обусловлена

такими механизмами, как:

Фагоцитоз в отношении вирусов имеет меньшее значение, чем в отношении бактерий и часто бывает незавершенным.

Специфические противовирусные антитела могут нейтрализо­вать внеклеточные формы - вирионы, препятствуя их проникнове­нию в клетки организма. Против внутриклеточных форм вирусов антитела неэффективны. Существенную роль играют секреторные SIgA, создающие местный иммунитет в воротах инфекции, напри­мер, при гриппе. Сывороточные антитела, циркулирующие в кровя­ном русле, играют защитную роль при вирусемии.

Роль системы главного комплекса гистосовместимости (HLA) в формировании инфекционного иммунитета:

В плазматических мембранах клеток разных тканей содер­жатся антигены главного комплекса гистосовместимости, которые играют важнейшую роль в иммунном ответе, иммунорегуляции, реакции отторжения трансплантата и других процессах. Их часто бозначают НLА (англ. Human leucocyte antigenes) в связи тем, что для клинических и экспериментальных целей в качестве антигенов главного комплекса гистосовместимости определяют лейкоцитарные антигены.

По своей химической природе эти антигены относятся к гликопротеинам клеточных мембран. По химической структуре и функциональному назначению НLА подразделяют на два класса. НLА класса I состоят из двух полипептидных цепей с разной молекулярной массой: тяжелая α-цепь (молекулярная масса 44 000) нековалентно связана с легкой β-цепъю (молекулярная масса 11600). Данные антигены содержатся в мембране почти всех ядросодержащих клеток. Они играют роль трансплантационных анти­генов, варьирующих от человека к человеку и обеспечивающих реакцию отторжения трансплантата. Основная биологическая роль их состоит в том, что НLА-антигены класса I являются маркерами «своего», не подлежащего «атаке» Т-киллеров. При заражении клеток вирусами НLА-антигены класса I в комплексе с вирусными антигенами становятся своеобраз­ными ориентирами для избирательного уничтожения заражен­ных клеток Т-киллерами.

НLА-антигены, принадлежащие к классу II, состоят из двух микроглобулиновых цепей примерно одной и той же молекуляр­ной массы (34 000 и 28000 соответственно), прикрепленных к поверхностной мембране макрофагов, Т- и В-лимфоцитов. Эти антигены участвуют в иммунорегуляции, служат для распозна­вания антигенных эпитопов Т-хелперами на мембране макрофагов и других клеток.

Генетический контроль НЬА осуществляется генами, располо­женными на хромосоме 6 в трех сублокусах: НЬА-А, НЬА-В, НЬА-С.

Один человек не может иметь более 2 разных трансплантационных антигенов в одном сублокусе, т. е. не более 6 антигенов в трех сублокусах. НLА-сублокус находится в I-области хромо­сомы и содержит Ir-гены (англ. immune-иммунный ответ), контролирующие образование 1а- или НLА-DR-антигенов, принадлежащих к классу П.

69. Противовирусный иммунитет: неспецифические факторы защиты, роль фагоцитоза и антител. Интерферон: условия образования, виды, механизмы противовирусного действия; индукторы интерферона, практическое применение.

Неспецифическая противовирусная резистентность обусловлена такими механизмами, как:

1) отсутствие в организме чувствительных клеток к данному вирусу;

2) наличие неспецифических вирусных ингибиторов;

3) повышенная температура тела;

4) интерферон - один из основных противовирусных факторов за­щиты.

Фагоцитоз в отношении вирусов имеет меньшее значение, чем в отношении бактерий и часто бывает незавершенным.

Специфические противовирусные антитела могут нейтрализо­вать внеклеточные формы - вирионы, препятствуя их проникнове­нию в клетки организма. Против внутриклеточных форм вирусов антитела неэффективны. Существенную роль играют секреторные SIgA, создающие местный иммунитет в воротах инфекции, напри­мер, при гриппе. Сывороточные антитела, циркулирующие в кровя­ном русле, играют защитную роль при вирусемии.

В противовирусном иммунитете действует особый механизм. Клет­ки, зараженные вирусом, имеют на своей поверхности антигенные де­терминанты. Поэтому они становятся мишенями для цитотоксических лимфоцитов - Т-киллеров. При этом зараженные клетки погибают вме­сте с вирусом. Например, при вирусном гепатите В происходит гибель гепатоцитов, зараженных вирусом.

Противовирусный природный антибиотик животного происхожде­ния - интерферон . Это низкомолекулярный белок, образуется в клет­ках организма или в культуре клеток под действием индукторов инерферона и является одним из факторов неспецифнческой противо­вирусной защиты. Индукторами могут быть не только вирусы, но и бактерии, ЛПС бактерий, некоторые лекарственные средства. В нача­ле изучения интерферона было открыто его противовирусное действие , в дальнейшем было обнаружено несколько типов интерферонов и мно­гообразное их действие: противовирусное, противоопухолевое, иммуномодулирующее, радиопротекторное. Интерферон неспецифичен в от­ношении вида вируса, но обладает видовой специфичностью. Поэто­му для лечения человека эффективен интерферон, выделяемый культурой человеческих клеток. Интерферон не оказывает непосредственно­го действия на вирус, но подавляет синтез вирусных белков в клетке и таким образом препятствует образованию вирионов. Известно несколь­ко типов интерферона, из которых в качестве противовирусного сред­ства применяется лейкоцитарный а-интерферон.

С помощью методов генетической инженерии получен рекомбинантный интерферон - реаферон.

70. Механизмы соединения антитела с антигеном и реакции иммунитета. Виды антител. Моноклональные антитела: принципиальная схема получения, преимущество и практическое применение.

Динамика образования антител . Синтез антител протекает в две фазы. Первая - индуктивная, которая длится 3-5 суток от момен­та введения антигена до появления антител в крови. Вторая - продук­тивная, когда антитела появляются в крови, количество их нарастает к 15-30 суткам и затем снижается. Иммунный ответ после первого вве­дения антигена называют первичным. Особенностью его является то, что первоначально синтезируются IgM, затем IgG.

Вторичный иммунный ответ развивается при повторном введе­нии того же антигена и отличается от первичного следующими особенностями, индуктивная фаза короче (1-2 суток), уровень анти­тел нарастает быстрее, достигает более высоких значений и сохраняется дольше, медленно снижаясь в течение нескольких лет При вторичном иммунном ответе с самого начала образуются IgG. Более быстрая и сильная выработка антител при вторичном иммун­ном ответе объясняется тем, что после первичного введения в орга­низме остаются "клетки памяти", которые при вторичном введении того же антигена быстро размножаются и интенсивно включают про­цесс образования антител.

В практической медицине учитываются особенности динамики антителообразования:

1) при составлении рациональных графиков вакцинации с опреде­ленными интервалами;

2) при экстренной профилактике столбняка людям, получившим травму, если они были ранее привиты столбнячным анатоксином, вво­дят не антитоксическую сыворотку, которая может дать нежелатель­ные аллергические реакции, а анатоксин, - в расчете на быстрый и сильный иммунный ответ;

3) при серологической диагностике дифференцируют первичное заболевание сыпным тифом от рецидива (болезни Брилля) по наличию в крови больного IgM.

Виды антител . Принято различать полные и неполные антитела. Полные антитела имеют не менее двух активных центров, поэтому при постановке реакции агглютинации, преципитации и других реакций иммунитета они обусловливают видимый эффект. Неполные антитела способны соединяться с антигеном, но видимой реакции агглютина­ции или преципитации не наблюдается. Причина в том, что неполные антитела имеют только один активный центр, способный соединяться с антигеном (второй блокирован). Неполными являются антитела к резус-антигену эритроцитов. При многих инфекциях они появляются

наряду с полными антителами. Для выявления неполных антител ис­пользуют реакцию Кумбса.

По характеру действия антитела разделяют на антимикробные, антитоксические, вируснейтрализующие, гемолизины, аутоантитела и др. Антимикробные антитела вызывают агглютинацию бактерий или преципитацию антигенов, извлеченных из них, лизис бактерий при уча­стии комплемента, усиление фагоцитоза - опсонизацию; антитоксины нейтрализуют токсины; вируснейтрализующие антитела оказывают противовирусное действие. Аутоантитела вырабатываются орга­низмом против собственных белков и клеток при изменении их хими­ческой структуры или при освобождении антигенов из разрушивших­ся органов и тканей, или при утрате естественной нммунологической толерантности к каким-то собственным антигенам.

Моноклональные антитела . При введении антигена в иммунный от­вет вовлекается множество лимфоцитов. Они могут различаться между собой по специфичности, различия эти могут быть совсем незначитель­ными. Однако при иммунизации даже таким антигеном, который со­держит одну детерминантную группу, образуются антитела, различа­ющиеся по своей специфичности.

Для получения антител одной специфичности необходимо полу­чить потомство-клон (греч. klon - отпрыск, ветвь) из одного лимфоцита. Но культуру лимфоцитов в искусственной питательной среде получить трудно (вследствие ограниченного числа делений и времени жизни клетки). Только опухолевые клетки могут культивироваться in vitro без ограничения при условии поступления питательных веществ.

Задачу получения культуры клеток, полученных из одного лимфоцита и способных длительно размножаться в питательной сре­де, решили Г.Келер и К. Мильштейн (1975 г., Нобелевская премия, 1984 г.). Авторы разработали методику получения гибридом (гиб­ридных клеток) от слияния лимфоцитов иммунизированных живот­ных с миеломными (опухолевыми) клетками. Слияние осуществляет­ся с помощью полиэтиленгликоля или электрического разряда. По­лученные гибридомы наследуют от лимфоцита способность синте­зировать специфическое антитело, а от миеломной клетки спо­собность бесконечно размножаться в питательной среде in vitro. Син­тезируемые гибридомами антитела могут быть получены в неогра­ниченном количестве. Антитела идентичны и по специфичности, и по классу иммуноглобулинов. Таким образом, полученный in vitro препарат может служить идеальным по специфичности средством для диагностики и лечения (рис. 19).

Основные группы серологических реакций. Характеристика реакций для прямого определения антител и антигенов, реакции пассивной агглютинации, методов с применением меченых антител и антигенов.

Реакция непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА) более чувствительна и специфична, чем реакция агглютинации. Эту реакцию также используют в двух направлениях.

1) Для обнаружения антител в сыворотке крови больного приме­няются эритроцитарные диагностикумы, в которых антиген адсорби­рован на поверхности обработанных танином эритроцитов. В отноше­нии этой реакции чаще употребляют термин РПГА.

Исследуемую сыворотку разводят в лунках пластмассовых план­шетов и добавляют эритроцитарный диагностикум. При положитель­ной реакции появляется тонкая пленка по стенкам лунки в виде "кру­жевного зонтика», при отрицательной реакции - плотный осадок эрит­роцитов в виде "пуговки".

2) Для обнаружения токсинов и бактериальных антигенов в исс­ледуемом материале применяют антительные эритроцитарные диагнос­тикумы, полученные путем адсорбции антител на эритроцитах. В от­ношении этой реакции чаще употребляется термин РНГА. Например, с помощью антительных диагностикумов обнаруживают антиген па­лочки чумы, дифтерийный экзотоксин, ботулинический экзотоксин.

Реакции с участием меченых антигенов или антител основаны на использовании меченых иммунореагентов. Помечены могут быть антигены, антитела или антиглобулиновая сы­воротка. В качестве метки используют флюоресцентные красители (РИФ), ферменты (ИФА), радиоизотопы (РИА), электронноплотные со­единения (ИЭМ).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакция Кунса. Это метод экспресс-диагностики. Для постановки РИФ применяются иммунные сыворотки, меченные флюорохромными красителями, например, изоти-оцианатом флюоресцеина. Флюорохромы вступают в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их специфичности.

Прямой метод РИФ. Из исследуемого материала, в котором предполагается наличие антигена (например, холерного вибриона), гото­вят препарат-мазок и обрабатывают его флюоресцирующей сыворот­кой, содержащей антитела к данному антигену (в нашем случае - про­тивохолерной сывороткой). При микроскопии в люминесцентном мик­роскопе наблюдают светящиеся микробы.

Недостатком прямого метода РИФ является необходимость иметь боль­шой набор флюоресцирующих сывороток против каждого антигена.

Непрямой метод РИФ. Препарат-мазок обрабатывают иммунной кроличьей антисывороткой к антигену (противохолерной кроличьей сывороткой), а затем - флюоресцирующей антиглобулиновой сыворот­кой, содержащей антитела против глобулинов кролика. Затем наблю­дают в люминесцентном микроскопе светящиеся микробы.

При использовании этого метода можно иметь одну флюоресци­рующую сыворотку против глобулинов кролика.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Как и другие реакции иммуни­тета, ИФА используется 1) для определения неизвестного антигена с помощью известных антител или 2) для выявления антител в сыворот­ке крови больного с помощью известного антигена. Особенность реак­ции в том, что известный ингредиент реакции соединен с ферментом, и его присутствие определяется с помощью субстрата, который при дей­ствии фермента окрашивается.

Наиболее широко применяется твердофазный ИФА.

1) Обнаружение ан­тигена (рис. 20). Первый этап - адсорбция специ­фических антител на твердой фазе, в качестве которой используют по­листироловые или поливинилхлоридные поверхности лунок пла­стиковых панелей.

Второй этап - добав­ление исследуемого ма­териала, в котором пред­полагается наличие ан­тигена. Антиген связы­вается с антителами. После этого луночки промывают.

Третий этап - добав­ление специфической сы­воротки, содержащей антитела против данно­го антигена, меченые ферментом. В качестве

фермента используют пероксидазу или щелочную фосфатазу. Мече­ные антитела присоединяются к антигенам, а их избыток удаляется промыванием. Таким образом, в случае присутствия в исследуемом ма­териале антигена на поверхности твердой фазы образуется комплекс антитело-антнген-антитела, меченные ферментом. Для обнаружения фермента добавляют субстрат. Для пероксидазы субстратом служит ортофенилдиамин в смеси с Н2О2 в буферном растворе. При действии фермента образуются продукты, имеющие коричневую окраску, ин­тенсивность которой позволяет количественно определить результаты опыта фотометрированием.

2) Обнаружение антител. Первый этап - адсорбция специ­фических антигенов на стенках лунки. Обычно в коммерческих систе­мах антигены уже адсорбированы на поверхности твердой фазы - в лунках или на пластиковых шариках.

Второй этап - добавление исследуемой сыворотки. При наличии антител образуется комплекс антиген-антитела.

Третий этап - после отмывания лунок добавляют антиглобулиновые антитела (антитела против глобулинов человека), меченные ферментом.

Результаты реакции учитывают, как указано выше.

В качестве контролей используют образцы заведомо положи­тельные и заведомо отрицательные.

Разрабатываются "безреагентные" системы для ИФА, в которых все компоненты реакции со­единены с поверхностью полимера. Для проведе­ния анализа необходимо внести исследуемый мате­риал и наблюдать измене­ние окраски.

ИФА применяется при многих инфекционных заболеваниях, в час­тности, при ВИЧ-инфекции, при вирусных гепати­тах.

Иммуноблоттинг - это вариант ИФА, сочетание электрофореза и ИФА.

Реакция нейтрализации токсина антитоксином; механизмы и ингредиенты (получение токсина и антитоксической сыворотки, единицы измерения). Применение для определения уровня антитоксического иммунитета (название реакции, постановка), применение с диагностической целью (на примере диагностики ботулизма или столбняка).

В этой реакции антигеном является экзотоксин, антителами - анти­токсины. При их взаимодействии происходит нейтрализация токсина. Реакцию ставят в пробирках для определения силы антитоксической сыворотки. Внешнее проявление реакции - флоккуляция (помутнение). Для обнаружения токсина с диагностической целью при ботулизме, столбняке, газовой анаэробной инфекции ставят реакцию нейтрали­зации токсина антитоксином в биологическом опыте на животных.

Реакции нейтрализации (РН) основаны на способности AT связывать различные возбудители и их метаболиты, лишая тем самым их возможности реализовать свои биологические свойства (ины­ми словами, AT нейтрализуют возбудителей). На практике РН применяют для выявления вирусов и различных токсинов. В определённой степени к ним же относят реакции торможения вирусиндуцированной гемагглютинации и иммобилизации.

РН вирусов . В сыворотке крови переболевших лиц циркулируют AT, нейтрализующие вирусы. Их наличие выявляют смешиванием культуры возбудителя с сывороткой с последующим введением лабораторному животному или заражением культуры клеток. На эффективность нейтрализации указывает выживание животного либо отсутствие гибели клеток в культурах.

РН токсинов применяется для идентификации бактериальных экзотоксинов по видовой и типовой их принадлежности, а также для определения содержания антитоксинов в исследуемой сыворотке. Принцип основан на способности антитоксинов связывать токсин и блокировать его действие. Для идентификации токсина и определения титра антитоксических АТ их смесь вводят лабораторным животным. При соответствии типа токсина и антисывороткии гибели животных не наблюдают. Нейтрализацию токсинов in vitro определяют в реакции флоккуляции. Для определения антитоксического иммунитета у человека часто применяют кожные пробы (например, пробу Шика).

Антитела (АТ) обычно разделяют в соответствии с типом их реакций с Аг.

Антитоксические антитела (АТ) к токсинам и анатоксинам нейтрализуют или флоккулируют Аг.
Агглютинирующие антитела (АТ) агрегируют Аг. Их выявляют в реакциях с корпускулярными Аг и растворимыми Аг, сорбированными на поверхности видимых частиц (эритроциты, частицы латекса).
Преципитирующие антитела (АТ) образуют комплекс Аг-АТ с растворимыми Аг только в растворах или гелях.
Лизирующие антитела (АТ) вызывают разрушение клеток-мишеней (обычно взаимодействуя с комплементом).
Опсонизирующие антитела (АТ) взаимодействуют с поверхностными структурами клеток микробов или заражённых клеток организма, способствуя поглощению их фагоцитами.
Нейтрализующие антитела (АТ) инактивируют Аг (токсины, микроорганизмы), лишая их возможности проявлять патогенное действие.

Основные функции антител (АТ)

Антитела (АТ) через Ar-связываюшие центры взаимодействуют с различными Аг. Тем самым AT предотвращают инфицирование или элиминируют возбудитель либо блокируют развитие патологических реакций, активируя при этом все системы специфической защиты.

Опсонизация (иммунный фагоцитоз) . Антитела (АТ) (через Fab-фрагменты) связываются с меточной стенкой микроорганизма: Fc-фрагментом AT взаимодействует с соответствующим рецептором фагоцита. Это опосредует последующее эффективное поглощение фагоцитом образовавшегося комплекса.

Антитоксический эффект . Антитела (АТ) могут связывать и, тем самым, инактивировать бактериальные токсины.

Активация комплемента . Антитела (АТ) (IgM и IgG) после связывания с Аг (микроорганизм, опухолевая клетка и др.) активируют систему комплемента, что приводит к уничтожению этой клетки путём перфорации её клеточной стенки, усиления хемотаксиса, хемокинеза и иммунного фагоцитоза.

Нейтрализация . Взаимодействуя с рецепторами клетки, связывающими бактерии или вирусы, AT могут препятствовать адгезии и проникновению микроорганизмов в клетки организма-хозяина.

Циркулирующие иммунные комплексы . Антитела (АТ) связывают растворимые Аг и образуют циркулирующие комплексы, с помощью которых Аг выводится из организма, преимущественно с мочой и жёлчью.

Антителозависимая цитотоксичность . Опсонизируя Аг, антитела (АТ) стимулируют их разрушение цитотоксическими клетками. Аппарат, обеспечивающий распознавание мишеней, - рецепторы к Fc-фрагментам AT. Разрушать опсонизированные мишени способны макрофаги и гранулоциты (например, нейтрофилы).

Содержание

Лабораторные тесты необходимы для постановки правильного диагноза, помогают врачам определить тяжесть заболевания, степень поражения внутренних органов, выбрать лучшую схему лечения. Анализ крови на антитела в обязательном порядке проводят беременным женщинам и тем пациентам, у которых есть нарушения в работе иммунной, репродуктивной или мочеполовой системы, щитовидной железы.

Разновидности антител

За разные периоды жизни человеческий организм «знакомится» с различными возбудителями заболеваний, химическими веществами (бытовой химией, лекарственными препаратами), продуктами распада собственных клеток (например, при ранениях, воспалении, гнойных поражениях кожи). В ответ на это он начинает продуцировать собственные иммуноглобулины или антитела в крови – это особые белковые соединения, сформированные из лимфоцитов и выступающие в качестве стимуляторов иммунитета.

Все они могут как свободно находится в плазме крови, так и прикрепляться к поверхности инфицированных клеток. Распознав антиген, специфические белки соединяются с ним при помощи хвоста. Он служит своеобразным сигналом для специализированных иммунных клеток, которые отвечают за нейтрализацию чужеродных объектов. В зависимости от того, как взаимодействуют белки с антигенами, их подразделяют на несколько видов:

Анализ крови на антитела

Современной методикой лабораторной диагностики разных заболеваний считается исследование крови ИФА (иммунофлюоресцентный анализ) . Данный тест на антитела помогает определить титр (активность) иммуноглобулинов, их класс и установить, на какой стадии развития находится патологический процесс. Метод проведения исследования состоит из нескольких этапов:

1. Для начала лаборант получает у пациента образец биологической жидкости – сыворотку крови.
2. Полученный образец помещают на специальную пластиковую планшетку с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены искомого возбудителя или белка (в случае, если антиген необходимо определить).
3. В лунки добавляют специальное красящее вещество, которое в случае положительной ферментной реакции окрашивает иммунные комплексы.
4. По плотности окрашивания лаборант делает вывод о результатах анализа.

Для проведения теста исследователям понадобится от одного до трех дней. Само исследование бывает двух типов: качественное и количественное. В первом случае подразумевается, что в образце крови будет найден или, напротив, отсутствовать искомый антиген. Количественный тест имеет более сложную цепную реакцию и помогает сделать выводы о концентрации антител в крови пациента, установить их класс, оценить как быстро развивается инфекционный процесс.

Зачем сдавать анализ на антитела

Тест ИФА проводится в самых разных ситуациях. К примеру, в последние годы данная методика активно используется в экспериментальной медицине для разработки новых лекарственных препаратов и при проведении клинических исследования. Анализ на наличие антител в крови обязательно назначается до или во время беременности для выявления белковых соединений, активных по отношению к TORCH-инфекциям (заболеваний, которые передаются внутриутробно от матери к ребенку):

• токсоплазмозу;
• краснухе;
• цитомегаловирусной инфекции;
• вирусу герпеса.

Результаты теста помогают определить эффективность выбранной методики лечения, установить тип вируса, его активность. В клинической практике тест ИФА назначается по следующим показаниям:

• Диагностика заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП). К ним относятся: хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, трихомониаз, сифилис.
• Определение патологий щитовидной железы или других желез внутренней секреции.
• Диагностика вирусных гепатитов С, В, D, А, Е, СПИДа или ВИЧ-инфекции.
• Определение аллергена или соединений, ставших причиной интоксикации организма при отравлении, укусах змей или насекомых.
• Определение типа сахарного диабета, резистентности тканей к инсулину.
• Лечение бесплодия. Наличие в крови антиспермальных или антиовариальных антител становится причиной невозможности продуктивного зачатия.
• Диагностика инфекционных заболеваний, передающихся контактно-бытовым, воздушно-капельным или фекально-оральным путем – глистных инвазий, дифтерии, столбняка, лептоспироза (болезнь, характеризующаяся поражением капилляров почек и печени), кори, ветрянки.
• Диагностика или лечение онкологических заболеваний, болезней костного мозга.

Как сдать

В зависимости от образа жизни, типа питания, психоэмоционального состояния, состав крови любого человека постоянно меняется, поэтому перед началом исследования необходимо соблюдать определенный режим. Подготовка занимает 2-3 дня и предполагает соблюдение следующих правил:

• Сдавать кровь на антитела необходимо из вены, утром и обязательно натощак. Забор проводит специалист при помощи стерильных инструментов в условиях стационара.
• Для получения максимально точных результатов необходимо за 2 дня до сдачи биологического материала исключить из ежедневного рациона копченую, острую, соленую и жареную пищу. На этот же срок желательно полностью отказаться от курения, употребления алкогольных напитков или спиртосодержащих лекарств, фруктовых соков.
• Если анализ назначен врачом для определения типа венерического заболевания, диагностики глистной инвазии, гепатита или краснухи, за несколько дней стоит перейти на молочную диету.
• Нельзя сдавать материал на исследование после недавно перенесенного эмоционального потрясения, прохождения флюорографии, ультразвукового исследования, компьютерной или магнитно-резонансной томографии, физиопроцедур.

Расшифровка анализа крови на антитела

В диагностическом плане значимость представляют всего три типа иммуноглобулинов: IgM, IgG, IgA. По их отклонению от нормы можно судить о наличии или отсутствии инфекции. Отрицательный результат анализа не является стопроцентным показателем того, что инфекционный процесс отсутствует. Это связано с тем, что после инфицирования на образование цепной реакции иммунитета требуется некоторое время – от 2-3 дней до 2-3 недель. Для подтверждения отрицательного результата тест ИФА необходимо повторить через некоторое время.

IgA

Иммуноглобулин класса А является одним из важных для дифференциальной диагностики. Он присутствует в организме постоянно и составляет примерно 10-25% всех фракций иммуноглобулинов. Референсные значения IgA могут различаться в зависимости от возраста и пола:

Отклонение IgA от нормы, говорит о наличии патологических процессов. Повышенные значения могут свидетельствовать о следующих состояниях или заболеваниях:

• миелома, лимфома, болезнь Ходжкина – злокачественные заболевания тканей или костного мозга;
• болезни печени – цирроз, токсическое повреждение клеток вследствие алкоголизма;
• нефропатия – двухстороннее поражение почек, почечная недостаточность;
• поражение слизистых оболочек влагалища, пищеварительного тракта, глаз, носа;
• аутоиммунные заболевания – сахарный диабет, рассеянный склероз, красная волчанка, васкулит;
• хронические или острые инфекционные заболевания легких, кожи, печени, лимфатических узлов – туберкулез, мононуклеоз, актиномикоз;
• ревматоидный артрит – системное заболевание соединительной ткани.

Понижение синтеза белка может произойти при приеме некоторых лекарственных препаратов, а также в результате следующих заболеваний:

• хронические заболевания органов дыхания или обоняния - бронхиальная астма, респираторная аллергия, гайморит, синусит, пневмония;
• хронический лимфоцитарный лейкоз – рак крови в стадии ремиссии;
• мальабсорбция – расстройство пищеварения, всасывания и расщепления питательных веществ;
• врожденное расширение мелких кровеносных сосудов – телеангиоэктазия;
• атопический дерматит.

IgM

Концентрация иммуноглобулина типа М стремительно растет на начальных этапах инфицирования, по истечении инкубационного или острого периода его уровень постепенно снижается. IgM являются незаменимыми участниками процесса формирования первичного иммунитета. Норма белка для людей разных возрастов:

• болезни Брутона (иммунодефицит, развивается из-за мутации генов);
• лечения цитостатиками (препаратами, подавляющими рост злокачественных клеток);
• проведения радиотерапии;
• обострения желудочно-кишечных заболеваний, характеризующихся массовой потерей белков;
• лимфомы (опухоль, рак лимфатической системы);
• приема препаратов с золотом или полисахаридами.

IgG

Главная функция класса G – обеспечить вторичный иммунный ответ организма на возбудителя инфекции. Период полураспада данной группы иммуноглобулинов составляет 23-25 дней, на протяжении которых организм активно борется с заболеванием, после ему необходима дополнительная медикаментозная поддержка. Норма антител в крови для людей разных полов и возрастных групп:

Высокая концентрация IgG наблюдается при острых или рецидивирующих хронических заболеваниях. Способствовать повышению уровня антител могут и следующие типы патологий:

• заболевания печени – аутоиммунный или вирусный гепатит, цирроз;
• аутоиммунные болезни – красная волчанка, ревматоидный артрит, ревматизм, склероз;
• саркоидоз (образование в мягких тканях гранулем);
• онкология;
• муковисцидоз (поражение органов, ответственных за образование слизи);
• мононуклеоз;
• нейросифилис (поражение нервной системы, из-за проникновения в кровь возбудителя сифилиса);
• СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита).

Недостаток IgG может говорить о наличии вирусных заболеваний, перешедших в хроническую форму. Привести к нехватке данного белка могут и такие патологии:

• атопический дерматит;
• дефицит витамина В12;
• лейкоз (рак крови);
• ВИЧ-инфекция;
• нефротический синдром (поражение почечных телец (клубочков));
• болезнь Брутона;
• гипогаммаглобулинемия (дефицит плазменных клеток – В-лимфоцитов);
• синдром Луи-Бар (недостаток Т-клеток иммунитета);
• генетическая мышечная дистрофия.

Аутоантитела

Антинуклеарные белки представляют собой группу аутоантител, которые вырабатываются организмом для борьбы с собственными клетками: фосфолипидами, фрагментами ДНК, рецепторами, гормонами . Анализ на такие иммуноглобулины считается самым чувствительным способом диагностики аутоиммунных нарушений, большая часть из которых характеризуется поражением соединительной или хрящевой ткани. Специфичные антитела обнаруживаются при наличии следующих патологий:

• системная красная волчанка – заболевание соединительной ткани и кожных покровов;
• узелковый периартрит – воспаление сосудистых стенок артерий;
• дерматомиозит – поражение скелетной ткани, кожи и мышц;
• ревматоидный артрит – заболевание суставов;
• склеродермия – состояние, при котором уплотняется или затвердевает соединительная ткань;
• панкреатит – воспаление поджелудочной железы;
• аутоиммунный гепатит – заболевание печени;
• болезнь Шегрена – снижение продукции сальных, слезных и слюнных желез.

Одновременно с определением аутоантител проводят исследование на наличие фракций класса A, M, G. Обнаружение данных компонентов может с высокой вероятностью свидетельствовать о начале развития аутоиммунных болезней. При проведении количественного теста нормой аутоантител считается титр менее 1:160. Качественный анализ может иметь несколько вариантов расшифровки:

• показатель меньше 0,9 – отрицательно;
• 0,9-1,1 – сомнительный итог, необходимо повторить тест через 7-10 дней;
• больше 1,1 – положительно.

Антитела при беременности

Провести диагностические тесты на наличие иммуноглобулинов всех типов желательно до зачатия. Если же этого сделано не было, врач назначит диагностику крови во время беременности. Особое значение для женщин «в положении» имеют анализы к TORCH-инфекциям: краснухе, герпесу, цитомегаловирусу, токсоплазмозу . Они могут не только плохо сказаться на состоянии здоровья матери, но и привести к самопроизвольному выкидышу, мертворождению, аномалиям в развитии плода.

Значимыми для диагностов являются классы IgM и IgG. Они соответствуют разным стадиям иммунного ответа, а их титр указывает на наличие и давность заражения. Всего может быть четыре варианта результатов анализов:

• IgM и IgG не обнаружены – говорит о том, что организм матери не встречался с TORCH-инфекциями.
• IgM и IgG положительны – инфицирование произошло во время или перед беременностью.
• IgM отрицательный IgG положительный – свидетельствует о недавно перенесенной инфекции и отсутствии угрозы для жизни ребенка.
• IgM положительный IgG не обнаружен – заражение произошло на одном из этапов беременности, состояние опасно для плода.

Иногда при беременности в крови могут обнаруживаться аллогенные антитела. Это свидетельствует о резус-конфликте матери и плода. Происходит подобное, если резус-фактор крови женщины отрицательный, а у отца ребенка положительный (малыш наследует резус-фактор отца). Чаще резус-антитела возникают при повторных беременностях. Конфликт становится причиной развития гемолитической болезни, которая опасна следующими осложнениями:

• задержкой внутриутробного развития ребенка;
• мертворождением;
• преждевременным родоразрешением;
• выкидышем;
• печеночной недостаточностью;
• увеличением в размерах печени и селезенки;
• развитием анемии или желтухи у новорожденного.

Возможные патологии при отклонении показателей от нормы

Любые отклонения от референсных значений, пониженные или повышенные антитела в крови, говорят о начале развития или обострении хронической болезни. В зависимости от того, какие классы белков были обнаружены, возможны следующие патологии:

• IgG – недостаток говорит о начале аллергических реакций, наличии новообразований, мышечной дистрофии. Превышение нормы характерно для саркоидоза, туберкулеза, красной волчанки, артрита, ВИЧ .
• IgM – дефицит возникает при сильных ожогах, гастроэнтеропатии (инфекционных заболеваниях кишечника или желудка), лимфоме. Чрезмерная выработка означает, что присутствует расстройство пищеварения, нарушения в работе дыхательной системы.
• IgA – снижение антител характерно после облучения радиацией, при кожных заболеваниях, лучевой болезни. Увеличение числа белка А свидетельствует о гнойных инфекциях, гепатите, аутоиммунных нарушениях, анемии.

Как избавиться от антител в крови

Разные классы специфических белковых соединений формируются в несколько этапов иммунного ответа. Они не пребывают в крови человека сверх или ниже нормы постоянно, а только во время обострения болезней. Наличие антител в пределах нормы не требует принятия каких-либо мер. Отклонения от референсных значений можно устранить при лечении основного заболевания, для борьбы с которым они были выработаны. Занятие самолечением и очищением крови чревато серьезными осложнениями и в ряде случаев может привести к летальному исходу.

Видео

Нашли в тексте ошибку?
Выделите её, нажмите Ctrl + Enter и мы всё исправим!

Антитела присутствуют в каждом организме как иммунный ответ на различные воздействия. Они вырабатываются в случае необходимости, и по их количеству и классу можно судить о наличии того или иного заболевания.

Однако антитела важны не только в диагностических целях, они отвечают за работу иммунитета. Именно эта их функция используется во время вакцинации. С течением жизни человек накапливает в крови те или иные антитела, что и составляет его иммунитет. Для стимуляции выработки определенного вида антител используются вакцины.

Представляют собой белковые соединения, которые являются частью иммунной системы человека. Для самого организма это своего рода защита, а в лабораторном исследовании – маркеры определенных заболеваний. Первые антитела вырабатываются еще в утробе. Они передаются ребенку от матери, но их немного. После рождения ребенок постоянно сталкивается с враждебной средой, вырабатывая все новые антитела. Этот процесс может продолжаться в течение всей жизни.

Действие антител основывается на связывании цепочки «антиген-антитело». Антиген того или иного возбудителя заболевания попадает в кровь, провоцируя выработку антител определенного класса. Для выработки определенных антител в течение жизни человеку делают различные прививки. Суть вакцинации заключается во введении определенного количества антигена, который провоцирует выработку тех или иных антител в количестве, достаточном для формирования иммунитета. Они остаются в организме человека в течение всей жизни, защищая его от заражения.

Выделяют 5 классов антител.

Выработка антител того или иного класса зависит не только от самого заболевания, но и его этапа: одни антитела вырабатываются сразу же после заражения, другие – только после окончания инкубационного периода:

Антитела вырабатываются иммунными клетками под названием В-лимфоциты. Антитела содержатся в мембране этих клеток и в самой сыворотке крови. В случае возникновения инфекции антитела начинают поступать в кровь, познавая те или иные антигены и подавая сигнал иммунной системе.

Анализ крови на антитела назначается с целью выяснения состояния иммунитета человека

Анализ крови на антитела сдается из вены. Эта процедура стандартная, проводится быстро и безболезненно. Небольшая подготовка к сдаче анализа требуется. Например, накануне не рекомендуется употреблять жирную и жареную, острую пищу, алкоголь, так как это может повлиять не только на состав крови, но и . Если кровь быстро свернется или сыворотка окажется мутной, обследование провести будет невозможно.

Перед сдачей анализа нужно отменить все препараты, но с разрешения врача. Если прием некоторых препаратов обязателен, это учитывается при расшифровке анализа.

Некоторые антитела чувствительны к эмоциональным и физическим напряжениям, поэтому перед сдачей крови желательно избегать стрессов и занятий спортом. Утреннюю зарядку также делать нежелательно, а перед входом в лабораторию нужно немного посидеть и отдышаться.

Расшифровкой должен заниматься врач, так как наличие некоторых антител трактуется по-разному, может потребоваться дополнительное обследование.

Основные показатели:

Антигены — это вещества, чужеродные для организма, вызывающие образование антител

Организм начинает вырабатывать антитела на любой антиген, который сочтет враждебным. В зависимости от самого антигена отличаются и иммуноглобулины, атакующие его.

Не все антитела способны атаковать антиген, некоторые служат исключительно для распознавания враждебных клеток и активизации иммунной реакции. Антитело вступает в реакцию с антигеном, что провоцирует выброс определенных веществ, выполняющих защитную функцию в организме.

Если говорить о цепочке «антиген-антитело», то существует другая классификация антител:

1. Антитела к белкам щитовидной железы. В крови обнаруживают антитела к рецепторам и различным белкам, вырабатываемым щитовидной железой. Как правило, это указывает на тиреотоксикоз – синдром, связанный с гиперфункцией щитовидной железы, когда выработка гормонов идет слишком активно.
2. Антиспермальные антитела. Это явление носит также название «иммунологическое бесплодие». Оно может быть выявлено как у мужчин, так и у женщин. Иммунитет распознает сперматозоиды как враждебные клетки и атакует их, что исключает зачатие.
3. Антитела к ядерным антигенам. Это специфические антитела, которые атакуют собственные клетки организма, распознавая их как антигены, что является причиной неизлечимых аутоиммунных заболеваний.
4. Антитела к . Это разновидность аутоантител, которые связываются с инсулином, вызывая реакцию организма на него, что встречается при врожденном .
5. Антитела к . Часто этот анализ проводится во время беременности у женщин с отрицательным резус-фактором. Если количество антител в крови велико, значит организм матери воспринимает клетки ребенка как враждебные и борется с ними.
6. Антитела к двухспиральной ДНК. Встречаются при системной красной волчанке. Это антитела, которые направлены против собственной цепочки ДНК, что приводит к разрушению организма.

Больше информации о том, что такое антитела и антигены можно узнать из видео.

1. Опсонизация (иммунный фагоцитоз).

2. Антитоксический эффект.

3. Активация комплемента.

4. Нейтрализация.

5. Циркулирующие комплексы (связанные растворимые Аг образуют комплесы с Ат, которые выводятся из организма с желчью и мочой).

6. Антителозависимая цитотоксичность.

Динамика антителообразования.

Серологические реакции в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.

В защите организма от чужеродных антигенов решающую роль играют иммунологические механизмы, осуществляющиеся антителами и иммунокомпетентными клетками. Основа иммунологических механизмов – специфическая реакция между антителами или лимфоцитами (образовавшихся под воздействием попавшего в организм антигена) и антигена. Главная функция антител – связывание антигена и его дальнейшее выведение из организма.

Однако такие реакции между антителами и антигенами могут происходить и вне организма (in vitro) в присутствии электролита и возможны лишь при наличии комплементарности (структурного сходства, сродства) антигена и антитела.

Имея специфические антитела против определенного антигена можно распознать и выявить его среди других антигенов, а в сыворотке крови антитела против известного антигена.

Реакция антиген-антитело in vitro сопровождается возникновением определенного феномена – агглютинации, преципитации, лизиса.

Таким образом все серологические реакции используются с двумя целями:

выявление антител в сыворотке больного с помощью стандартных антигенов-диагностикумов (для серологической диагностики инфекционных болезней );

для выявления неизвестных антигенов по известным стандартным сывороткам, содержащим антитела определенной специфичности (для серологической идентификации возбудителей ).

Например, если сыворотка больного реагирует с конкретным микробным антигеном – значит в сыворотке больного есть антитела против данного микроорганизма.

Серологическая диагностика – берут стандартный антиген (диагностикум), представляющий собой инактивированные или живые бактерии, вирусы или же их антигены (компоненты) в изотоническом растворе.

Серологическая идентификация – используют стандартные иммунные сыворотки, которые получают от иммунизированных животных (в крови животных в результате многократной иммунизации возбудителем появляется большое количество антител).

Агглютинация.

Агглютинация – серологическая реакция между антителами (агглютининами) и антигенами (агглютининогенами), размещенными на поверхности бактериальной клетки, а в результате образуется комплекс антиген-антитело (агглютинат).

Механизм агглютинации – под влиянием ионов электролита уменьшается негативный поверхностный заряд бактериальной клетки и следовательно они могут сблизиться на такое расстояние при котором возникает склеивание бактерий.

Макро- и микроскопический вид агглютината :

О-агглютинация (соматическая) – мелкозернистая, при микроскопии – бактерии склеиваются полюсами клеток, образуя сеть.

Vi-агглютинация (капсульная) – мелкозернистая, при микроскопии - склеивание бактерий происходит всей поверхностью клетки.

Н-агглютинация (жгутиковая) – агглютинины взаимодействуют с жгутиками обездвиживая бактерии, при микроскопии – крупнохлопчатая, склеивание бактериальных клеток в области жгутиков.

Реакция агглютинации используется для определения антител в сыворотке крови больных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля) других инфекционных болезнях, а также при определении возбудителя, выделенного от больного. Эту же реакцию применяют для определения групп крови с использованием моноклональных антител против аллоантигенов эритроцитов.

Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировочная, непрямая и др.

Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации : к разведениям сыворотки крови больного добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум) и через несколько часов инкубации при 37°С отмечают наибольше разведение (титр) сыворотки, при котором произошла агглютинация, т.е. образовался осадок.

Характер и скорость агглютинации зависят от вида антигена и антител.

Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентировочную реакцию агглютинации, применяя диагностические антитела, т.е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К 1 капле диагностической иммунной сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больного. Если появляется хлопьевидный осадок, то реакцию проводят в пробирках с увеличивающимися разведениями диагностической сыворотки, добавлял в каждую дозу сыворотки 2-З капли взвеси возбудителя. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. В контролях (сыворотка, разведенная изотоническим раствором хлорида натрия, или взвесь микробов в том же растворе) осадок в виде хлопьев должен отсутствовать.

Разные родственные бактерии могут агглютинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудняет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыворотками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыворотках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии. Получение таким способом монорецепторных диагностических агглютинирующих сывороток было предложено А.Кастелляни (1902). Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на использовании эритроцитов (или латекса) с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам и гормонам и в некоторых других случаях. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных. Реакцию агглютинации для определения групп крови применяют для установления системы АВО с помощью РА эритроцитов, используя антитела к группам крови А(II), В(III). Контролем служит сыворотка, не содержащая антител, т.е. АВ(IV) группы крови, антигены, содержащиеся в эритроцитах групп А(II), В(III); отрицательный контроль не содержит антигенов, т.е. используют эритроциты группы 0 (I). В реакции агглютинации для определения резус-фактора используют антирезусные сыворотки (не менее двух различных серий). При наличии на мембране исследуемых эритроцитов резус-антигена происходит агглютинация этих клеток. Контролем служат стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты всех групп крови.

Реакцию агглютинации для определения антирезусных антител (непрямую реакцию Кумбса) применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких больных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса. Для этого в систему антирезусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобулинов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют: патологические состояния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например гемолитическую болезнь новорожденных: эритроциты резус-положительного плода соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые перешли через плаценту от резус-отрицательной матери.

Реакция коагглютинации - разновидность РА: клетки возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие белокА, имеющий сродство к иммуноглобулинам, неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.

Схема постановки реакции агглютинации.

КС – контроль сыворотки; КД – контроль диагностикума

Титр сыворотки - наибольше разведение сыворотки, при котором произошло образование агглютината, т.е. образовался осадок. Фактически – это разведение сыворотки в последней пробирке, где произошло образование агглютината.