К дерматомикозам относятся трихофития, микроспория, парта (фавус), эпидермофития. Возбудителями являются дерматомицеты, относящиеся к несовершенным грибам.
Трихофития. Возбудители относятся к роду Trychophyton. В зависимости от вида возбудителя развивается поверхностная трихофития (стригущий лишай) или глубокая (инфильтративнонагноительная). При стригущем лишае волосы надламываются у самой поверхности кожи, отсюда название болезни. Болеют преимущественно дети.
Микроспория. Возбудителем являются грибы рода Microsnoron. Вокруг пораженных волос образуется как бы чехол из мелких спор, отчего волосы кажутся присыпанными мукой. Поражает только детей.
Парша (фавус). Возбудителем являются грибы рода Aehorion. Поражает кожу, волосы, ногти. Возможно поражение лимфатических узлов и внутренних органов. Заболевают преимущественно дети.
Эпидермофнтия. Возбудители из рода Bpidermophyton поражают роговый слон эпидермиса, реже ногти, не поражают волосы. Различают паховую эпидермофитию и эпидермофитию стоп. Болеют, в основном, взрослые, иногда подростки.
Источником инфекции при дерматомикозах являются больные люди или животные. Заражение происходит при непосредственном контакте и через предметы.
Лабораторную диагностику проводят путем микроскопии пораженных волос, чешуек кожи и ногтей. В препарате "раздавленной" капли микроскопируют волосы, обработанные горячим 15%-ным раствором щелочи для растворения рогового вещества. Обнаруживают под микроскопом отрезки гиф гриба (рис. 48).
В тех случаях, когда микроскопическое исследование не дает результатов, производят посев на среду Сабуро. Рост характерных колоний появляется через 6-8 дней.
Применяются также аллергические внутрикожные пробы.
Кандидозы
Возбудителями являются дрожжеподобные грибы рода Candida, чаще всего Candida albicans.
Дрожжеподобные грибы сходны с дрожжами по морфологии круглых и овальных клеток - бластоспор. Отличаются от истинных дрожжей способностью образовывать псевдомицелий и отсутствием полового способа размножения (Рис. 49).
На плотной среде Сабуро образуют белые сметанообразные колонии, которые при старении врастают в толщу агара.
Кандидоз может возникнуть в результате экзогенного заражения при контакте с больным, через инфицированные предметы, или от носителей, например, при контакте новорожденного и грудного ребенка со взрослым, но часто наблюдается эндогенная инфекция, поскольку Candida albicans является представителем нормальной микрофлоры организма. Эндогенный кандидоз развивается при дисбактериозе или как сопутствующее заболевание при другом хроническом и тяжелом процессе. В возникновении кандидоза большую роль играет длительное применение антибиотиков широкого спектра действия, которые подавляют нормальную микрофлору организма, что приводит к дисбактериозу и усиленному размножению грибов Candida, обладающих природной устойчивостью к антибиотикам.
Кандидозы - профессиональные заболевания лиц, чья работа связана с овощами, фруктами, кондитерскими изделиями из фруктов, а также судомоек и работников бань.
При поверхностных кандидозах на слизистых оболочках полости рта, языка, в углах рта, на слизистой влагалища появляются белые налеты (молочница). На коже появляются мелкие красные пятна, пузырьки, которые превращаются в эрозии.
При глубоких кандидозах поражаются легкие, кишечник, почечные лоханки и мочевой пузырь, возможно развитие сепсиса.
Лабораторная диагностика. Наибольшее значение придают микроскопическому, серологическому и несколько меньшее - культуральному методу.
Микроскопируют нативные неокрашенные препараты или окрашенные обычными способами. Единичные дрожжевые клетки можно встретить в мокроте, кале, моче здоровых лиц. Патолошческой картине соответствует наличие большого числа почкующихся клеток и особенно нитей мицелия.
Серологические исследования имеют большое значение при поражении внутренних органов. Ставят РСК и другие реакции.
Выращивание культуры из исследуемого материала имеет ограниченное значение, так как у здоровых лиц при посеве мокроты, мочи, соскобов со слизистых оболочек можно получить рост Candida. Получение культуры безусловно доказательно при посеве крови, спинномозговой жидкости, пункчата лимфатических узлов, закрытых абсцессов. Посев материала производят на среду Сабуро и выращивают при 30°С. Через 2-3 суток отмечают рост белых сметано образных колоний, при микроскопии - почкующиеся клетки, нити мицелия, наличие которых обязательно для отличия от истинных дрожжей. Для лечения применяют декампн, нистатин, лево-рин, клотримазол, флуконазол.
Глубокие микозы
Глубокие микозы: кокцидиоидоз, гистоплазмоз, криптококкоз, бла-стомикозы. Заболевание характеризуется поражением внутренних органов, часто с диссеминацией процесса.
Пневмоцистоз относится к оппортунистическим микозам. Оппортунистическими называют инфекции, возбудителями которых являются условно-патогенные микробы.
Возбудителями пневмоцистоза или пневмоцистной пневмонии является Pneumocystis carinii, который относится к бластомицетам (дрожжевым микроорганизмам). Обнаруживается в легочной ткани, в чистой культуре на питательных средах не получен.
У людей с нормальной иммунной системой P. carinii не вызывает заболевания. Пневмоцистоз развивается при иммунодефицитах. Среди лиц, страдающих СПИДом, пневмоцистная пневмония развивается в 80% случаев. Заболевание наблюдается также у пациентов, получающих иммунодепрессанты с лечебной целью.
Лабораторная диагностика проводится путем микроскопии патологического материала. Для окраски применяют метод Романовского-Гимза. Серологическая диагностика - с помощью РИФ и ИФА.
Для лечения применяются триметоприм в сочетании с сульфаме-токсазолом или с диаминодифенилсульфоном.
Цель занятия. Ознакомить студентов со свойствами возбудителей, методами микологического исследования и этапами лабораторной диагностики трихофитии, микроспории, аспергиллеза, пенициллиоза, мукоромикоза, кандидамикоза, эпизоотического лимфангита, кокцидиоидомикоза.
Оборудование и материалы. Материал от животных, пораженных трихофитией и микроспорией, культуры грибов рода Мисог, Aspergillus, Candida на плотной питательной среде Сабуро или др., препаровальные иглы, микологические крючки, предметные и покровные стекла, смесь воды, спирта, глицерина (поровну), 20%-й раствор гидроксида натрия или гидроксида калия, 50%-й водный раствор глицерина, плакаты, таблицы, биопрепараты.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Микозы - группа болезней животных и человека, вызываемых патогенными микроскопическими грибами. Основные методы лабораторной диагностики этих болезней: микроскопия, выделение и идентификация грибов-возбудителей.
Дерматомикозы. Заболевания кожи и ее производных. Восприимчивы сельскохозяйственные животные всех видов (преимущественно молодняк), пушные и хищные звери. У людей инфицированию более подвержены дети. Важным фактором заражения служит мацерация кожи.
Трихофития. Инфекционное заболевание. Характеризуется появлением на коже округлых или овальных облысевших очагов с мягкими, иногда сухими корочками в области головы. Поражения могут распространяться по поверхности тела животного (рис. 117, 118).
При поверхностной форме размер повреждений 1...5см в диаметре, иногда развиваются более обширные очаги. Корки легко отделяются вместе со склеенными волосами, под ними на слегка влажной поверхности кожи торчат обломавшиеся волосы, кое-где встречаются папулы и пузырьки.
При глубокой форме болезни наблюдают несколько очагов поражения с ярко выраженными экссудативными и воспалительными процессами, инфильтрацию, большое количество фолликулярных пустул. Встречаются множественные экссудативные поражения. Все очаги покрыты засохшим серозно-гнойным экссудатом. При удалении корок обнаруживают эрозии. Часто отмечают осложнения секундарной инфекцией.
Основные возбудители трихофитии: у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, оленей - Т. verrucosum (син. Т. faviforme ), реже Т. mentagrophytes ; у лошадей - Т. equinum и Т. mentagrophytes; у овец и коз - Т. verrucosum, Т. mentagrophytes ; у свиней - Т. mentagrophytes ; у верблюдов - Т. verrucosum , Т. sarkisovi ; у собак и кошек - Т. mentagrophytes (кошки редко болеют трихофитией); у пушных зверей и кроликов - Т. mentagrophytes , редко Т. verrucosum ; у лабораторных животных (мыши, крысы, хомяки, морские свинки) - Т. mentagrophytes ; у птиц - Т. gallinae . Этот возбудитель известен давно как возбудитель парши (фавуса) преимущественно у рода куриных. Раньше болезнь называли «белый гребень».
Микроспория. Инфекционное заболевание кожи и ее производных. Появление очагов поражения сопровождается воспалительным процессом, обламыванием и выпадением волос, иногда наблюдают поражение когтей.
Основные возбудители микроспории: у кошек и собак - М. canis (син. М. lanosum ); у лошадей - М. equinum , редко М. distorum и М. gypseum ; у свиней - М. canis ; у пушных зверей, кроликов - М. canis; у лабораторных животных - М. canis ; у крупного рогатого скота и овец - М. canis и М. gypseum . Микроспорией болеют дикие звери, а также животные зоопарков и цирков.
Лабораторная диагностика трихофитии и микроспории основана на результатах микологического исследования.
Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии и люминесцентного анализа, выделение чистой культуры посевом на специальные питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим свойствам.
Материал для исследования . В лабораторию направляют соскобы с пораженных частей тела животного вместе с корочками и чешуйками, пораженные волосы с участков, граничащих со здоровой кожей.
Чаще готовят неокрашенные (нативные) препараты. Исследуемый материал помещают в чашки Петри, измельчают ножницами и расщепляют с помощью скальпеля. Затем кусочки волос, чешуек, корочек переносят на предметное стекло, наносят каплю 20%-го раствора гидроксида натрия или гидроксида калия и слегка подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. После этого добавляют каплю 50%-го водного раствора глицерина. На приготовленный препарат накладывают покровное стекло и просматривают сначала под малым увеличением сухого объектива (х 8), затем с объективом х 40 или с помощью иммерсионной системы.
С целью дифференциации грибов рода Trichophyton и Microsporum учитывают характер расположения спор в пораженном волосе (рис. 119, 120) (цепочками или мозаичное), пользуясь следующими критериями:
Люминесцентный анализ заключается в следующем. Исследуемый материал помещают в чашки Петри на расстоянии 20 см от ртутно-кварцевой лампы ПРК-2 или ПРК-4 с фильтром Вуда и просматривают под ультрафиолетовыми лучами в затемненном помещении. Пораженные возбудителем микроспории волосы дают яркое зеленоватое свечение. Корочки, чешуйки не светятся. Кроме того, с помощью люминесцентного анализа проводят раннюю диагностику атипичных и скрытых форм микроспории.
Обнаружение мицелия гриба и различных спор в материале - достаточное основание для постановки диагноза на дерматомикозы.
Выделение и идентификация культур возбудителей трихофитии и микроспории. Культуры выделяют в сомнительных случаях для подтверждения диагноза. Для получения чистой культуры грибов отдельные волосы или фрагменты кожи, корочки высевают на специальные питательные среды - агар Сабуро, сусло-агар, МПА, содержащий 2 % глюкозы, агар Чапека и некоторые другие. Чтобы освободить исследуемый материал от сопутствующей микрофлоры, перед посевом на питательные среды его обрабатывают 60%-м этанолом в течение 5...7 мин, а затем дважды отмывают дистиллированной водой и подсушивают в термостате при 37 °С, или же в питательные среды добавляют антибиотики (пенициллин, стрептомицин и др.) из расчета 100...200 ЕД/мл. Посевы инкубируют при температуре 26...28 °С 20...30сут и более. У выросших культур грибов изучают культуральные и морфологические свойства. Готовят препараты «раздавленная капля» (см. тему 5) и микроскопируют. При идентификации видов грибов руководствуются признаками, изложенными в таблице 35.
Биопрепараты . Препарат ТФ-130 (ВИЭВ) и сухая вакцина ЛТФ-130 (ВИЭВ) против трихофитии крупного рогатого скота содержат аттенуированный штамм Trichophyton verrucosum (faviforme).
Вакцина СП-I против трихофитии лошадей из штамма Trichophyton equinum.
Вакцина Триховис (ВИЭВ) сухая против трихофитии овец из штамма Trichophyton verrucosum (вариант автотрофикум).
Вакцину МЕНТАВАК против трихофитии пушных зверей и кроликов готовят из культуры Trichophyton mentagrophytes .
Вакцина Камелвак-ТС против трихофитии верблюдов содержит аттенуированный штамм гриба Trichophyton sarkisovi .
Вакцина МИКОЛАМ против трихофитии и микроспории плотоядных животных, нутрий и кроликов.
Поливак-ТМ - инактивированная вакцина против дермато-фитозов собак, включая 8 видов и разновидностей грибов рода Trichophyton и Microsporum .
Вакцина ВАКДЕРМ против дерматофитозов животных предназначена для борьбы с микроспорией и трихофитией собак, кошек, пушных зверей и кроликов. Готовят из высокоиммуногенных штаммов Microsporum canis , Microsporum gypseum и Trichophyton mentagrophytes.
Аспергиллез. Заболевание домашних и диких птиц, пчел, редко млекопитающих (крупный рогатый скот, овцы, козы, свиньи, лошади); восприимчив человек. Характеризуется гранулематозным поражением органов дыхания, в основном легких, нередко абортами. В легких при размножении возбудителя формируется аспергиллома. Аспергиллома (аспергиллезная мицетома) - шарообразная масса мицелия диаметром до 2 см (обычно Aspergillus fumigatus ) и клеточного детрита, заполняющая полости легкого, образовавшиеся вследствие разрушения ткани. В отечественной практике этим термином обозначают любую инфекционную гранулему, вызванную видами Aspergillus.
Возбудители аспергиллеза принадлежат к высшим несовершенным грибам класса Deuteromycetes , рода Aspergillus, группе головчатых плесеней. Основные возбудители аспергиллеза животных - A. fumigatus, A.flavus, A. niger.
Лабораторная диагностика аспергиллеза основана на результатах микологического исследования.
Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культу-рально-морфологическим и патогенным свойствам.
Материал для исследования . В лабораторию направляют свежие трупы мелких животных, наложения, узелки, пораженные органы или их кусочки, мокроту, яйца.
. Непосредственное обнаружение гриба в неокрашенном или окрашенном препарате имеет значение лишь для предварительного диагноза. При этом выявление характерных для аспергиллов органов плодоношения особенно ценно и значительно ускоряет лабораторную диагностику. Исследуемый материал помещают в смесь этанола с глицерином и водой поровну или в физиологический раствор. Препараты микроскопируют, как описано в теме 5, ориентируясь на обнаружение органов плодоношения (рис. 121) - головка, стеригмы со спорами (см. тему 5).
Для посева используют агар Чапека, Сабуро, кровяной, мозговой, кукурузный агары, МПА (рН 5,5...6,5). Гранулематозную ткань обжигают над пламенем, вырезают стерильно кусочки из середины и раскладывают их на плотную среду в чашки Петри, а экссудат засевают в пробирки со средой, инкубируют при 25 и 37 °С. На 3...5-е сутки на плотных средах образуются характерные для аспергилл колонии (рис. 122... 124).
A.fumigatus на агаре Чапека образует разрастающиеся колонии - ровные или шероховатые. Развитый воздушный мицелий придает им войлочный вид белого цвета или, позднее, зеленого. Зрелые культуры в стадии спороношения черного цвета. С обратной стороны колонии бесцветны или желтовато-коричневого цвета. Межвидовая дифференциальная диагностика основана на различиях в строении стеригм и конидий.
В препаратах из культуры можно обнаружить гладкие, короткие, зеленого цвета конидиеносцы. Воздушные гифы бывают септированы и без перегородок. Колбообразные вздутия, содержащие споры, находятся только в верхней части гифов. У стеригм одноярусное строение. Конидии темно-зеленого цвета, округлые, шиповатые или полушаровидной формы.
A.flavus, A. niger на агаре Чапека формируют широко разрастающиеся колонии с обильным спороношением. Цвет колонии зависит от массы конидий, развивающихся на конидиеносцах. При микроскопии культур обнаруживают бесцветный или светлоокрашенный септированный мицелий. Часто образуются склероции шаровидной формы, представленные толстостенными клетками.
Биопроба. Метод применяют для подтверждения патогенности выделенных культур аспергилл. Кроликам, морским свинкам или белым мышам вводят внутривенно суспензию спор грибов (0,5... 1) 10 6 , что вызывает развитие генерализованного процесса с типичным поражением органов дыхания, почек, сердца. При вскрытии в этих органах обнаруживают множество мелких узелков с интенсивным развитием гриба.
Птице скармливают корм, зараженный спорами аспергилла, или проводят ингаляцию спор в дыхательный аппарат.
С помощью микологических исследований дифференцируют аспергиллез от микозов, Вызванных другими плесневыми грибами.
Пенициллиомикоз. Заболевание многих видов животных, возникающее на фоне снижения общей резистентности организма и характеризующееся поражением кожи, слизистых оболочек.
Основные возбудители пенициллиомикоза - грибы рода Penicillium: P. crustosum, P. glaucum, P. mycetomagenum.
Лабораторная диагностика пенициллиомикоза основана на результатах микологического исследования. Диагностика данного микоза затруднена в связи с тем, что грибы рода Penicillium часто выделяют из легких и других тканей при туберкулезе и других инфекциях. Важным признаком для подтверждения диагноза служит обнаружение в очаге поражения элементов гриба, фагоцитированных макрофагами.
Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и патогенным свойствам.
Материал для исследования. В лабораторию направляют пораженные участки кожи, слизистых оболочек, пораженные органы и ткани от трупов.
Микроскопия препаратов из исходного материала. Препараты «раздавленная капля» исследуют под микроскопом в окрашенном (по методам Грама, Циля-Нильсена и др.) и неокрашенном виде.
Важным диагностическим признаком служит обнаружение в нативных препаратах септированного мицелия и конидиеносцев, ветвящихся на вершине один или несколько раз в виде кисточки.
Выделение и идентификация культуры возбудителя. Материал высевают на сусло-агар, агары Чапека, Сабуро и др. и культивируют так же, как и возбудителей аспергиллеза и мукоромикоза. У выделенных культур грибов изучают морфологию колоний и внутреннюю структуру (табл. 36).
Биопроба. Заражают кроликов, морских свинок, крыс, белых мышей подкожно. На месте введения культуры грибов-возбудителей развивается абсцесс и формируется грануляционная ткань. При внутрибрюшинном и внутривенном введении развивается генерализованный процесс.
Мукоромикозы (мукорозы). Хронические заболевания, вызываемые плесневыми грибами. Характеризуются развитием гранулематозного процесса, сходного с туберкулезом, в лимфатических узлах и в легких, реже в других органах и тканях (кожа, ногти, слизистые покровы, пищеварительный тракт, центральная нервная система, мозг). К возбудителю мукороза восприимчивы свиньи, лошади, крупный рогатый скот, овцы, пушные звери; из лабораторных животных - морские свинки, мыши; болеют обезьяны, тюлени. Мукорозы людей встречаются в виде спорадических случаев.
Основные возбудители мукоромикоза - грибы видов Мисог mucedo, М. racemosus, Rhisopus nigricans и др.
Лабораторная диагностика мукоромикоза
Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и патогенным свойствам.
Материал для исследования . Объектом исследования служат некротизированные ткани, гной, экссудат, гранулематозные ткани и др.
Микроскопия препаратов из исходного материала. В препаратах из исследуемого материала в положительных случаях обнаруживают несептированный мицелий. В круглых спорангиях на спорангиеносце видны эндоспоры (рис. 125). Для старого мицелия характерно присутствие хламидоспор.
Рис. 125. Четырехдневная культура Мисог racemosus на агаре Чапека:
1 - мицелий;
2- спорангия;
3- спорангиоспоры внутри спорангии и вне ее;
4- спорангиеносец
Выделение и идентификация культуры возбудителя. Гранулематозную ткань обжигают над пламенем горелки и стерильно вырезают из середины кусочки, которые раскладывают на поверхности среды Чапека (в чашках Петри) или других сред. Посевы инкубируют при 25...30ºС. Культуры грибов довольно крупные, активно развиваются на искусственных питательных средах. На третьи сутки приобретают вид войлочных клочковатых серовато-белых колоний (рис. 126), в последующем цвет может изменяться до коричневого или бурого.
Рис. 126. Войлочно-клочковатая серовато-белая колония двухдневной культуры М. racemosus на агаре Чапека
Биопроба. Метод применяют для изучения патогенности выделенных из исходного материала культур гриба. Кроликам, морским свинкам и белым мышам вводят внутривенно, внутримышечно или внутрибрюшинно смыв спор и мицелия чистых культур. Гриб развивается во всех внутренних органах и тканях. Кролики погибают через 15...20 дней после внутривенного заражения, мыши - через 5... 15 дней. Чаще поражаются почки, реже печень, сердце, селезенка (абсцессы, некроз эпителия канальцев, разрастание грануляционной ткани).
Кандидамикоз (кандидоз, молочница и др.). Заболевание животных и человека. Характеризуется поверхностным поражением кожи, слизистых оболочек ротовой полости, наружных мочеполовых органов. Возбудитель также вызывает висцеральный микоз с поражением дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, молочной железы, мышечной, костной и сердечно-сосудистой систем, органов зрения. При генерализации кандидамикозного процесса могут поражаться многие органы одновременно (рис. 127). Следствием кандидамикоза у коров могут быть маститы, эндометриты и аборты.
Рис. 127. Серовато-белые мелкие узелки на слизистой зоба цесаренка, павшего от кандидамикоза
Основные возбудители кандидамикоза - С. albicans и С. tropicalis , реже С. krusei , род Candida , класс Deuteromycetes. Они широко распространены в природе. Наиболее часто их выделяют с поверхности различных фруктов, ягод, овощей. Candida albicans и др. входят в состав нормальной микрофлоры организма человека и животных. Любые нарушения функций иммунокомпетентных клеток или нормального микробного ценоза приводят к возникновению заболевания. С. albicans в основном поражает птиц, кур, гусей, уток, цесарок, индеек, голубей, фазанов и др. Более тяжело болеют поросята, телята, ягнята, щенки.
Лабораторная диагностика кандидамикоза основана на результатах микологического исследования.
Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культу-рально-морфологическим и ферментативным свойствам.
Материал для исследования . Объектом исследования служат пленки, наложения, соскобы со слизистой оболочки, содержимое язв и эрозий, кусочки внутренних органов.
Микроскопия препаратов из исходного материала. В тканях животных С. albicans может образовывать дрожжевые клетки и гифы, обнаружение которых имеет диагностическое значение (рис. 128). Клеточная стенка мицелия в этом случае состоит из трех слоев и значительно уступает по толщине пяти-семислойной структуре дрожжевых клеток.
Выделение и идентификация культуры возбудителя. Материал (кроме внутренних органов) берут стерильной бактериологической петлей и тщательно растирают петлей или стеклянным шпателем по поверхности среды. Кусочки печени, селезенки или почек погружают в спирт, обжигают над пламенем спиртовки, а затем из глубины органов вырезают кусочек ткани и проводят им по поверхности плотной среды. Кровь из сердца, содержимое желудка и кишечника, почечной лоханки высевают на агар Сабуро в чашки Петри. Посевы инкубируют при 37° С 24...48 ч до появления на питательной среде колоний (рис. 129, 130).
Идентификацию культур грибов проводят в два этапа.
На первом этапе изучают культурально-морфологические признаки выделенной культуры в первичном посеве на плотной питательной среде (агар Сабуро, МПА с глюкозой) (табл. 37).
На втором этапе для окончательной идентификации грибов рода Candida выделенную культуру высевают на жидкие питательные среды (бульон Сабуро, картофельный, кукурузный агары или на аналогичные жидкие среды - кукурузный или картофельный отвар) и определяют культуральные признаки и цитоморфологические особенности. Посев на картофельный и кукурузный агары делают штрихом в толщу среды, разрезая петлей поверхность агара. При микроскопии учитывают наличие псевдомицелия, тип роста на этих средах; присутствие хламидоспор на кукурузном агаре в чашках Петри исследуют при малом увеличении (рис. 131).
Рис. 131. Пятидневная культура С. albicans на кукурузном агаре:
1 - шаровидные хламидоспоры; 2- контурная оболочка хламидоспоры
На жидких питательных средах грибы С. albicans через 24...48 ч вызывают помутнение среды и образование рыхлого осадка на дне пробирки. Для грибов С. tropicalis и С. krusei характерны глубинный рост и образование пленки и пристеночного кольца.
Для дифференциации видов грибов рода Candida определяют ферментативную активность на жидких средах Гисса, содержащих 3 % различных углеводов и индикатор Андреде. Посевы наблюдают в течение 10... 15 дней, учитывают кислото- и газообразование. Ферментативные свойства приведены в таблице 38.
Эпизоотический лимфангит (бластомикоз, африканский сап). Хроническое заболевание животных. Характеризуется поражением лимфатических узлов, лимфатических сосудов и подкожной клетчатки с образованием язв, абсцессов и узелков. В отличие от дерматомикозов поражены более глубокие слои кожи. Болеют однокопытные животные: лошади, мулы, ослы, зарегистрированы случаи заболевания этим микозом парнокопытных - верблюдов и КРС (рис. 132).
Возбудитель эпизоотического лимфангита - Histoplasma farciminosus (син. Criptococcus farciminosus ). Классификация криптококка неясна: одни исследователи причисляют его к бластомицетам, другие на основании некоторых биологических данных - к несовершенным грибам.
Лабораторная диагностика эпизоотического лимфангита основана на результатах микологического и серологического исследований.
Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя при микроскопии препаратов-отпечатков из исходного материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и серологическим свойствам.
Материал для исследования . В лабораторию направляют содержимое абсцессов, гнойный экссудат язв.
Микроскопия препаратов из исходного материала . Готовят препарат «раздавленная капля». Чаще микроскопируют неокрашенный препарат или красят по Граму или Романовскому-Гимзе. Благодаря окраске гранулы в цитоплазме хорошо различимы. Возбудителя эпизоотического лимфангита относят к дрожжеподобным грибам. В исследуемом материале обнаруживают криптококки - клетки яйцевидной или ли монообразной формы с четко выраженной двухконтурной оболочкой, клетки заострены на одном или обоих концах. Размеры криптококков З...5мкм в длину и 2...3,5 мкм в ширину. В гное находят по 2...3 криптококка, соединенных своими полюсами и иногда образующих цепочки (рис. 133). Часть криптококков можно найти в лейкоцитах (нейтрофилах и макрофагах). Центральная часть криптококков представляет собой гомогенное, полужидкое вещество, содержащее одно или несколько (2...4) блестящих зернышек, которые находятся в беспрерывном и оживленном движении.
Необходимо учитывать, что для Н. farciminosus характерен диморфизм, т. е. морфология гриба в патологическом материале и в культуре различна.
Выделение и идентификация культуры возбудителя. В сомнительных случаях микроскопии материал высевают на питательные среды. Первичное выделение гриба затруднительно, но выделенную культуру удается поддерживать сравнительно легко. Гриб выращивают на МППА, глюкозно-глицериновом МПА (содержание углеводов 2...2,5 %), агаре Сабуро при температуре 25...30°С.
Через 10... 12 дней на плотных питательных средах образуются колонии, сначала мелкие, в последующем более крупные, возвышающиеся над поверхностью среды. Колонии складчатые, сухие, кремового, а позднее коричневого цвета. В мазках из культуры дрожжевые клетки не обнаруживают. Вне живого организма гриб развивается в мицелиальной форме. Мицелий септированный, ветвящийся, многоклеточный.
Серологическая диагностика основана на результатах РСК с сапным антигеном.
Аллергическая диагностика. Для аллергической диагностики лимфангита используют гистоплазмин (Королевой) - фильтрат 3...4-месячной культуры криптококка. При сомнительном результате лабораторного исследования применяют дифференциальную диагностику лимфангита и сапа, используя глазную пробу с маллеином и подкожную пробу с гистоплазмином.
Кокцидиоидомикоз (ревматизм пустыни, долинная лихорадка и др.). Хроническое заболевание животных и человека, характеризуется гранулематозным поражением лимфатических узлов, иногда легких у крупного рогатого скота и диссеминированной формой процесса со злокачественным течением у собак.
К заболеванию восприимчивы крупный рогатый скот, лошади, ослы, овцы, свиньи, грызуны (мыши, крысы и др.). Описаны заболевания койотов, лам, кенгуру, обезьян, тигров и других животных. Птицы не болеют. Кокцидиоидомикоз человека относят к группе особо опасных микозов.
Возбудитель кокцидиоидомикоза - дрожжевидный почвенный гриб Coccidioides immitis .
Лабораторная диагностика кокцидиоидомикоза основана на результатах микологического и серологического исследований.
Микологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методами световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим и патогенным свойствам.
Материал для исследования . Объектом исследования служат гной, кровь, содержимое очагов поражения и кусочки пораженных органов.
Микроскопия препаратов из исходного материала. Из материала готовят препараты «раздавленная капля». При работе с такими препаратами нужно соблюдать предельную осторожность, так как грибы остаются живыми. Можно микроскопировать препараты в 10%-м растворе щелочи при подогревании: в этом случае гриб погибает быстро, но происходит деформация сферул. Чтобы избежать заражения исследователя грибом С. immitis , перед микроскопией патологический материал рекомендуют залить 10%-м раствором формалина на 10...15 мин. Такая обработка убивает гриб, но не влияет на его морфологические признаки. Положительным результатом считают обнаружение сферул (например, в гное и мокроте) мицелия (рис. 134, 135). Сферулы - образования правильной круглой формы с двухконтурной оболочкой и с многочисленными эндоспорами. Протоплазма зернистая. Диаметр сферулы от 20 до 120 мкм. Эндоспоры мелкие. Иногда обнаруживают сферулы с разорванной оболочкой и освобождающимися эндоспорами. Прорастание сферул в мицелий можно наблюдать непосредственно в патологическом материале. Для этого на предметное стекло наносят несколько капель в смеси с физиологическим раствором, покрывают покровным стеклом и для предохранения от высыхания заклеивают парафином по краям. Отсутствие сферул в препаратах при микроскопическом исследовании не дает оснований отрицать кокцидиоидомикоз.
Выделение и идентификация культуры возбудителя. Для посева исследуемый материал предварительно обрабатывают антибиотиками в течение 30...60 мин для подавления бактериального роста. Пенициллин добавляют из расчета 20 ЕД/мл среды, стрептомицин - 40 ЕД/мл. Для получения мицелиальной формы гриба в качестве питательной среды используют агар Литмана, агар Сабуро, сусло-агар; для получения дрожжевидной формы - кровяной агар, печеночный агар с глюкозой, мартеновский бульон (табл. 39). Культивируют при 25...27 и 35...37 °С.
Биопроба. Заражают нативным материалом и солевой суспензией из чистой культуры гриба. К кокцидиоидомикозу восприимчивы мыши, морские свинки, кролики, собаки, куриные эмбрионы. При развитии патологического процесса в зависимости от метода введения исследуемого материала отмечают различные поражения.
При внутривенном введении культуры гриба развиваются абсцессы во внутренних органах, гибель животных наступает через 20...30 дней.
При интратрахеальном заражении обнаруживают поражение легких и трахеобронхиальных лимфатических узлов.
При внутрибрюшинном заражении через 7... 10 дней процесс распространяется по брюшине с поражением внутренних органов.
При подкожном и интрацеребральном методах заражения возникает местный процесс с поражением лимфатических узлов.
При интратестикулярном - развивается гнойный орхит. В гное обнаруживают сферулы различных размеров и на разных этапах созревания, реже мицелий.
Двух-трехдневные куриные эмбрионы погибают через 3...6 дней после заражения. Использованные в работе материалы и инструменты подлежат немедленной стерилизации в автоклаве.
Серологическая диагностика основана на результатах следующих реакций: РА с антигеном из убитой культуры, РСК с кокцидиоидином, РП с полисахаридным антигеном.
При работе с С. immitis необходимо соблюдать правила техники безопасности, в частности надевать марлевые маски. Посевы проводить лучше в пробирки со средой Литмана, мясо-пептонный бульон или другие жидкие среды, так как их удобнее использовать для микроскопических работ и заражения животных. На этих средах гриб образует более компактные, непылящие колонии. Пересев с твердых сред рекомендуют делать до начала спороношения.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
1. Приготовить и промикроскопировать препараты из материала от животных, больных дерматомикозом.
2. Изучить культуральные свойства возбудителей трихофитии и микроспории.
3. Изучить культурально-морфологические характеристики грибов родов Mucor, Aspergillus, Candida.
4. Ознакомиться с биопрепаратами.
Контрольные вопросы
1. Какие микроорганизмы вызывают дерматомикозы?
2. Какова схема лабораторного исследования на дерматомикозы?
3. По каким критериям дифференцируют грибы родов Microsporum
и
Trichophyton?
4. Какие плесневые и дрожжеподобные грибы вызывают микозы?
5. Какие вакцины применяют против дерматомикозов сельскохозяйственных
животных?
Патогенные микроскопические грибки способны поражать кожные покровы, вызывая заболевания, объединенные общим названием дерматомикозы. Это название происходит от греч. Dermatomycosis — дерматомикоз, где derma – кожа, а mykes – гриб.
Возбудители дерматомикозов относятся преимущественно к дерматофитам – грибкам Microsporum, Epidermophyton, Trichophyton, способным усваивать керотин.
Патогены вызывают дерматофитии – обширную группу кожных заболеваний, к которым относятся паховая эпидермофития, эпидермофития стоп, фавус, трихофития, микроспория (смотрите на фото).
Грибковые заболевания провоцируют грибки из рода Malassezia, вызывающие разноцветный лишай, отрубевидный лишай, себорейный дерматит. Заболевания, вызванные Malassezia, относятся к кератомикозам, они затрагивают лишь самый поверхностный роговой слой кожи (как на фото).
Поверхностные дерматомикозы провоцируют также дрожжеподобные грибки из рода Candida. Эти микроорганизмы служат причиной кандидозов ротовой полости, половых органов, кожных покровов.
По локализации очага заражения различают дерматомикозы стоп, лица, кистей, туловища, волосистой части кожи головы. По принятой классификации различают:
- дерматофитии;
- кератомикозы;
- кандидозы;
- глубокие микозы.
Дерматофитии, кератомикозы и кандидозы относятся к поверхностным микозам. Они затрагивают лишь поверхностные кожные слои, не проникают в подкожные ткани, не затрагивают внутренние органы.
Глубокие микозы отличаются тяжелым продолжительным течением. Инфицируют внутренние органы плесневые грибки, вызывая аспергиллез, мукороз, фузариотоксикоз, поражая дыхательные пути, печень, кроветворные органы, лимфатическую систему.
К глубоким микозам относятся такие тяжелые системные заболевания, как гистоплазмоз, бластомикоз, кокцидиодомикоз. Болезни сопровождаются поражением надпочечников, пищеварительной системы, костного мозга, слизистой десен, гортани, языка.
Особенности распространения грибковой инфекции
Основной источник распространения дерматомикозов – зараженный человек. В этом случае возбудителями болезни являются антропофильные, предпочитающие людей, грибки.
Особенно легко происходит заражение в детском возрасте, а также у лиц со сниженным иммунитетом.
Заразиться дерматомикозом можно от животных, в этом случае заболевание переносится зоофильными грибками. Грибки-дерматофиты, представляющие опасность для людей, обитают и в почве – геофильные дерматофиты.
Инфицирование дерматомикозами происходит при тесном контакте, а также через зараженные личные вещи. Для передачи болезни требуются гифы – длинные нити, из которых состоит тело гриба, или конидии – споры, образующиеся из гифов.
Попадая на роговой слой кожи, волосяной фолликул, ноготь, гриб начинает активно размножаться, разрушая и усваивая кератин. Способствуют инфицированию сниженный иммунитет, заболевания, связанные с нарушением обмена веществ, сахарный диабет.
Причины заражения грибками
Оптимальными условиями для активного размножения грибов является повышенная влажность, температура в диапазоне +25 о С…+30 о С, кислотно-щелочной баланс кожных покровов.
Кислотность пота изменяется с возрастом. Высокая кислотность наблюдается у детей до 2 лет и снижается к 12 годам. Этот возраст соответствует пику заболеваемости трихомикозами.
Вновь возрастает кислотность пота и сальных желез к моменту полового созревания. В этом возрасте сопротивляемость к грибковой инфекции высокая. Кроме того, в волосах у взрослых обнаруживаются жирные кислоты, проявляющие противогрибковую активность.
С возрастом, при ослаблении иммунитета, нарушениях обмена веществ, гормональном дисбалансе изменяются и барьерные свойства кожного покрова.
Наиболее благоприятные условия для существования грибков создаются в межпальцевых складках стоп. Нейтральная или щелочная среда пота, влага и тепло идеально подходят для активизации дерматофитов.
Закрытая синтетическая обувь, одежда, не пропускающая пот, в летнее время становятся основными причинами вспышки грибковых инфекций.
Предрасполагающими факторами заражения грибками служат микротравмы кожных покровов. На месте микротравмы выделяется серозная жидкость, смещающая кислотно-щелочной баланс кожи в слабощелочную сторону. Это способствует внедрению и активизации грибка в коже.
Симптомы дерматомикозов
Для всех видов дерматомикозов характерны некоторые общие симптомы:
- красные округлые пятна на коже;
- опрелости кожи, шелушение;
- деформация, изменение структуры ногтя;
- изменения в области межпальцевых складок;
- зуд в пораженной области.
Для разных участков кожи характерны специфические особенности течения инфекции. При дерматомикозе волосистой части головы образуются очаги облысения – алопеции (фото). Возбудители микроспории и трихофитии развиваются в волосе и волосяном фолликуле, вызывая полную или частичную потерю волос на пораженном участке.
При микроспории волосы обламываются в нескольких миллиметрах над кожей, при трихофитии – выпадают, оставляя черную точку.
Очаги грибкового заболевания кожи могут локализоваться на лице (см. фото). Грибок поражает чаще шею, подбородок, нижнюю губу. Гриб Trichophyton verrucosum вызывает дерматомикоз бороды, при котором отмечается повреждение волосяных фолликул, отек пораженной области, появление в очаге инфекции кровянистых корок.
Микоз кожи кистей (показано на фото) сопровождается шелушением, трещинами в межпальцевых складках.
Грибок часто селится на коже стоп, поражая в первую очередь межпальцевые складки, подошвы. Симптомами грибковой инфекции стоп служат покраснение кожи, появление трещин, пузырьков между пальцами – обычно между 5 и 4, 4 и 3.
На коже подошвы заражение проявляется утолщением рогового слоя, появлением трещин. На боковой поверхности стопы образуются пузырьки, постепенно сливающиеся в несколько крупных пузырей. После их самостоятельного вскрытия остаются очаги изъязвления с неровно очерченным краем.
Вызывают дерматомикоз стоп в основном Trichophyton rubrum, Tr. mentagrophytes, Epidermophyton floccosum.
Дерматомикоз гладкой кожи туловища проявляется четко очерченными округлыми пятнами с приподнятым по границе валиком (см. фото). Располагаются пятна на плече, спине, предплечье, шее, груди.
Грибок на гладкой коже сопровождается шелушениями, эритемами, высыпаниями на пораженных участках (как показано на фото), вызывается в основном Tr. rubrum, Tr. mentagrophytes, Microsporum canis.
Паховый дерматомикоз вызывают трихофиты, эпидерматофиты и грибы из рода кандида. Очаги поражения отмечаются на внутренней поверхности бедра, в промежности, на гениталиях, в паху.
Паховый грибок или «жокейский зуд» отмечается и у женщин, и у мужчин. Передается при непосредственном контакте, страдают паховым грибком (см. фото) чаще взрослые мужчины.
Паховая дерматофития характеризуется шелушащимися высыпаниями красновато-коричневого цвета с четко очерченной границей (как на фото). На инфицированных участках могут появиться трещинки, водянистые пузырьки.
Здоровая кожа, граничащая с высыпанием, краснеет, и также начинает шелушиться.
Лечение
Цель лечения при дерматофитии заключается в устранении грибка из пораженных кожных покровов. При поражении только кожи, без распространения процесса на ногти и волосы, можно добиться излечении я с помощью наружных лекарственных средств.
Препаратом выбора при лечении дерматомикозов является ламизил из группы тербненофинов. Ламизил проявляет активность в отношении грибов-дерматофитов, плесневых и диморфных грибков.
Под действием ламизила клетки гриба гибнут, размножение их прекращается. Препарат предотвращает рецидивы, используется и как профилактика, и как средство лечения.
Для лечения дерматомикоза гладкой кожи назначают синтетические антимикотики для местного и внутреннего применения. Микоз кожи лечат клотримазолом, кетоконазолом, эконазолом, нафтифином, накладывая мази на пораженные участки 2-4 раза в день в течение 2 недель, согласно инструкции.
Против паховой дерматофитии помогают мази с кетоконазолом, миконазолом, клотримазолом. Лечение пахового дерматомикоза у женщин имеет свои особенности. Для исключения возможности перехода пахового дерматомикоза (показано на фото) в вагинальный микоз женщинам необходима консультация гинеколога.
От грибка в паху лечатся по назначению врача мазями микозолон, тридерм. Результат лечения для предотвращения рецидива болезни, повторного появления симптомов дерматомикоза (как на фото) контролирует врач, самолечение только оттягивает выздоровление.
По показаниям назначают противогистаминные препараты – димедрол, супрастин, пипольфен. Используются компрессы Бурова, примочки 10% хлорида кальция, 0, 25% нитрата серебра с 1% резорцином, обрабатывают спиртовым раствором йода.
Против потливости прибегают к промыванию пораженных участков отварами коры дуба, ромашки, лопуха.
Грибок волосистой части головы лечат гризеофульвином, кетоконазолом, тербинафином, назначая по состоянию соответственно инструкции. Местно пораженную область обрабатывают серной мазью с салициловой кислотой, 5% раствором йода.
Дерматомикозы стоп (показано на фото) часто вызваны смешанной инфекцией и требуют комплексного лечения. Такими системными антимикотиками являются споронокс, орунгал, ламизил, дифлюкан, форкан.
Микозы стоп лечат коллодиевыми отслойками, мазью Аравийского, Ариевича, салициловой мазью (10%). Кандидоз стоп лечат нистатиновой, амфотерициновой мазью.
Для уменьшения отечности кожи, аллергических проявлений используют примочки с танином, этакридином. Острые воспалительные явления устраняют комбинированными средствами тридерм, травокорт.
Эффективны при лечении дерматомикозов лекарства в виде спреев. При острых микозах быстро снимает симптомы спрей ламизил. Препарат наносится на очаг воспаления тонкой пленкой, изолируя его, ограничивая распространение инфекции.
Воспаленные участки после обработки спреем бледнеют, подсыхают. В очаге поражения исчезают зуд, болезненность. Ламизил в виде крема, геля помогает при кандидозе, микроспории, кандидозе складок кожи.
В настоящее время в распоряжении врачей имеются более 100 наименований противогрибковых препаратов, что позволяет эффективно провести комплексное лечение дерматомикоза любой локализации.
Прогноз дерматомикозов
В случае поверхностных дерматомикозов, при условии соблюдения правил личной гигиены, полноценного питания, выполнения рекомендаций врача, прогноз благоприятный.
К дерматомикозам относятся трихофития, микроспория, парта (фавус), эпидермофития. Возбудителями являются дерматомицеты, относящиеся к несовершенным грибам.
Трихофития. Возбудители относятся к роду Trychophyton. В зависимости от вида возбудителя развивается поверхностная трихофития (стригущий лишай) или глубокая (инфильтративнонагноительная). При стригущем лишае волосы надламываются у самой поверхности кожи, отсюда название болезни. Болеют преимущественно дети.
Микроспория. Возбудителем являются грибы рода Microsnoron. Вокруг пораженных волос образуется как бы чехол из мелких спор, отчего волосы кажутся присыпанными мукой. Поражает только детей.
Парша (фавус). Возбудителем являются грибы рода Aehorion. Поражает кожу, волосы, ногти. Возможно поражение лимфатических узлов и внутренних органов. Заболевают преимущественно дети.
Эпидермофнтия. Возбудители из рода Bpidermophyton поражают роговый слон эпидермиса, реже ногти, не поражают волосы. Различают паховую эпидермофитию и эпидермофитию стоп. Болеют, в основном, взрослые, иногда подростки.
Источником инфекции при дерматомикозах являются больные люди или животные. Заражение происходит при непосредственном контакте и через предметы.
Лабораторную диагностику проводят путем микроскопии пораженных волос, чешуек кожи и ногтей. В препарате "раздавленной" капли микроскопируют волосы, обработанные горячим 15%-ным раствором щелочи для растворения рогового вещества. Обнаруживают под микроскопом отрезки гиф гриба (рис. 48).
В тех случаях, когда микроскопическое исследование не дает результатов, производят посев на среду Сабуро. Рост характерных колоний появляется через 6-8 дней.
Применяются также аллергические внутрикожные пробы.
Кандидозы
Возбудителями являются дрожжеподобные грибы рода Candida, чаще всего Candida albicans.
Дрожжеподобные грибы сходны с дрожжами по морфологии круглых и овальных клеток - бластоспор. Отличаются от истинных дрожжей способностью образовывать псевдомицелий и отсутствием полового способа размножения (Рис. 49).
На плотной среде Сабуро образуют белые сметанообразные колонии, которые при старении врастают в толщу агара.
Кандидоз может возникнуть в результате экзогенного заражения при контакте с больным, через инфицированные предметы, или от носителей, например, при контакте новорожденного и грудного ребенка со взрослым, но часто наблюдается эндогенная инфекция, поскольку Candida albicans является представителем нормальной микрофлоры организма. Эндогенный кандидоз развивается при дисбактериозе или как сопутствующее заболевание при другом хроническом и тяжелом процессе. В возникновении кандидоза большую роль играет длительное применение антибиотиков широкого спектра действия, которые подавляют нормальную микрофлору организма, что приводит к дисбактериозу и усиленному размножению грибов Candida, обладающих природной устойчивостью к антибиотикам.
Кандидозы - профессиональные заболевания лиц, чья работа связана с овощами, фруктами, кондитерскими изделиями из фруктов, а также судомоек и работников бань.
При поверхностных кандидозах на слизистых оболочках полости рта, языка, в углах рта, на слизистой влагалища появляются белые налеты (молочница). На коже появляются мелкие красные пятна, пузырьки, которые превращаются в эрозии.
При глубоких кандидозах поражаются легкие, кишечник, почечные лоханки и мочевой пузырь, возможно развитие сепсиса.
Лабораторная диагностика. Наибольшее значение придают микроскопическому, серологическому и несколько меньшее - культуральному методу.
Микроскопируют нативные неокрашенные препараты или окрашенные обычными способами. Единичные дрожжевые клетки можно встретить в мокроте, кале, моче здоровых лиц. Патолошческой картине соответствует наличие большого числа почкующихся клеток и особенно нитей мицелия.
Серологические исследования имеют большое значение при поражении внутренних органов. Ставят РСК и другие реакции.
Выращивание культуры из исследуемого материала имеет ограниченное значение, так как у здоровых лиц при посеве мокроты, мочи, соскобов со слизистых оболочек можно получить рост Candida. Получение культуры безусловно доказательно при посеве крови, спинномозговой жидкости, пункчата лимфатических узлов, закрытых абсцессов. Посев материала производят на среду Сабуро и выращивают при 30°С. Через 2-3 суток отмечают рост белых сметано образных колоний, при микроскопии - почкующиеся клетки, нити мицелия, наличие которых обязательно для отличия от истинных дрожжей. Для лечения применяют декампн, нистатин, лево-рин, клотримазол, флуконазол.
Глубокие микозы
Глубокие микозы: кокцидиоидоз, гистоплазмоз, криптококкоз, бла-стомикозы. Заболевание характеризуется поражением внутренних органов, часто с диссеминацией процесса.
Пневмоцистоз относится к оппортунистическим микозам. Оппортунистическими называют инфекции, возбудителями которых являются условно-патогенные микробы.
Возбудителями пневмоцистоза или пневмоцистной пневмонии является Pneumocystis carinii, который относится к бластомицетам (дрожжевым микроорганизмам). Обнаруживается в легочной ткани, в чистой культуре на питательных средах не получен.
У людей с нормальной иммунной системой P. carinii не вызывает заболевания. Пневмоцистоз развивается при иммунодефицитах. Среди лиц, страдающих СПИДом, пневмоцистная пневмония развивается в 80% случаев. Заболевание наблюдается также у пациентов, получающих иммунодепрессанты с лечебной целью.
Лабораторная диагностика проводится путем микроскопии патологического материала. Для окраски применяют метод Романовского-Гимза. Серологическая диагностика - с помощью РИФ и ИФА.
Для лечения применяются триметоприм в сочетании с сульфаме-токсазолом или с диаминодифенилсульфоном.
ПАТОГЕННЫЕ ПРОСТЕЙШИЕ
Простейшие микроорганизмы широко распространены в природе, среди них имеются сапрофиты и патогенные виды, вызывающие заболевания у человека и животных. К ним относятся дизентерийная амеба, лямблии, трихомонады, лейшмании, плазмодии малярии, ток-соплазмы и другие.
Дизентерийная амеба
Дизентерийная амеба (Entamoeba histolytica) открыта русским врачом Ф.А. Лешем в 1875 г. у больного хроническим колитом.
В цикле развития дизентерийной амебы различают две стадии: 1) вегетативную стадию, к которой относятся большая вегетативная, проев етная и предцистная формы; 2) стадия покоя -циста.
Амебная дизентерия -антропоноз. Источником инвазии является человек, больной хронической формой болезни, или носитель. Основной механизм передачи инвазии -фекально-оральный. Основная роль в заражениии человека принадлежит цистам, которые длительно сохраняются во внешней среде.
При попадании в тонкую кишку оболочка цисты разрушается, из нее выходят амебы, которые
размножаются в толстой кишке, внедряются в ее стенку. В кишке образуются язвы. Амебы могут с током крови заноситься в печень, лепсие, головной мозг.
Лабораторная диагностика проводится путем микроскопического исследования препаратов из испражнений (рис. 50).
Для лечения применяют метронидазол и фура-мид.
Лямблии
Возбудитель лямблиоза Lamblia intestinalis был открыт русским ученым Д.Ф. Лямблем в 1859 г. Относится к жгутиковым простейшим. Обитает в верхних отделах кишечника, в нижних отделах образует цисты. Источником инвазии являются больные люди и носители. Заражение происходит фекально-оральным путем. Заражение лямблиями не всегда приводит к заболеванию. При большом скоплении лямблии они могут явиться причиной хронического холецистита.
Лабораторная диагностика проводится путем микроскопического исследования нативных и окрашенных раствором Люголя препаратов, приготовленных из дуоденального содержимого (рис. 51). Лямблии культивируются на питательных средах с экстрактом дрожжеподобных грибов.
Для лечения применяют акрихин и аминохолин.
Трихомонады
Возбудитель трихомоноза мочеполовой системы - Trichomonas vaginalis. Относится к жгутиковым простейшим. Цист не образует. В окружающей среде быстро погибает. Трихомонады хорошо растут на питательных средах в присутствии бактерий, которые служат для их питания.
Для лечения применяют осарсол, аминарсон, фуразолидон и др.
Лейшмании
Возбудители лейшманиозов Leishraania tropica, L. donovani, L. braziliensis относятся к жгутиковым простейшим.
В лабораторных условиях лейшмании культивируются на специальных питательных средах.
Основным резервуаром и источником кожного лейшманиоза являются суслики, песчанки и другие грызуны, висцерального лейшманиоза - собаки. Инфекция передается при укусе москитов.
Кожный лейшманиоз вызывают два вида лейшмании.
L. tropica minor - возбудитель кожного лейшманиоза городского типа, при котором источником инфекции являются больные люди и собаки. Инкубационный период длительный - 3-6 месяцев. На месте укуса москита появляется бугорок, который медленно увеличивается и изъязвляется. Заболевание длится 1-2 года.
L. tropica major - возбудитель кожного лейшманиоза сельского типа, при котором источником инфекции являются суслики, песчанки и другие грызуны. Инкубационный период короткий, 2-4 недели, формирование бугорка на месте внедрения, изъязвление и рубцевание происходят быстрее.
Висцеральный лейшманиоз вызывается L. donovani, встречается в странах с тропическим климатом.
L. braziliensis вызывает лейшманиоз с поражением кожи носа и слизистых оболочек полости рта и гортани.
После перенесения лейшманиоза остается стойкий иммунитет.
Для лечения висцерального лейшманиоза применяют солюсурмин, неостибозан. При кожном лейшманиозе применяют акрихин, амфотери-цин В.
Для профилактики практикуются прививки живой культурой L. tropica major.
Плазмодии малярии
Возбудители относятся к классу споровиков. Малярию у человека вызывают 4 вида малярийных плазмодиев: Plasmodium vivax - возбудитель трехдневной малярии, Plasmodium malariae - возбудитель четырехдневной малярии, Plasmodium falciparum - возбудитель тропической малярии, Plasmodium ovale вызывает трехдневную малярию (цветная вклейка рис. 53).
В организме человека (промежуточного хозяина малярийных плазмодиев) происходит бесполая фаза жизненного цикла (шизогония) паразитов. Половая фаза их жизненного цикла (спорогония) проходит в организме окончательного хозяина - кровососущего комара рода Anopheles. В результате в теле комара образуются длинные тонкие клетки - спорозоиты. Они скапливаются в большом количестве в слюнных железах комара. При укусе комара спорозоиты вместе со слюной комара попадают в кровь человека, затем проникают в печень.
Развитие плазмодиев в организме человека проходит в два цикла: тканевая или внеэритроцитарная шизогония происходит в клетках печени; эритроцитарная шизогония - в эритроцитах.
Тканевый цикл шизогонии происходит в клетках печени и заканчивается образованием тканевых мерозоитов, которые разрушают клетки печени, поступают в кровь и поражают эритроциты.
Эритроцитарный цикл шизогонии. Тканевый мерозоит, проникнув в эритроцит, принимает форму кольца, так как в центре его имеется вакуоль. Цитоплазма его окрашена по Романовскому-Гимза в голубой цвет, ядро - в красный. Мерозоит растет, превращается в шизонт. Шизонт делится, в результате образуются мерозоиты. Эритроциты разрушаются, мерозоиты попадают в кровь и поражают другие эритроциты. Некоторые мерозоиты, проникая в эритроцит, превращаются в половые формы, которые с кровью попадают в желудок самки комара при укусе ею больного человека.
Продолжительность эритроцитарного цикла развития у P. vivax, P. falciparum и P. ovale - 48 часов, P. malariae - 72 часа. Соответственно этому повторяются лихорадочные приступы: при трехдневной и тропической малярии - через сутки, при четырехдневной - через двое суток.
Лабораторная диагностика проводится путем микроскопического исследования толстой капли и мазка крови, окрашенных по Романовскому-Гимза. Применяется серологическая диагностика.
Для лечения применяют препараты, которые действуют на бесполые формы плазмодиев (хлорохин, амодахин) и на половые формы (пириметамин, прогуанил, хиноцид, примахин).
Для специфической профилактики малярии разрабатывается вакцина, содержащая антигены, полученные методом генетической инженерии.
Токсоплазма.
Возбудитель токсоплазмоза, Toxoplasma gondii, относится к классу споровиков. Впервые обнаружен Николем и Мансо в 1908 г. у грызунов гонди в Северной Африке.
Промежуточными хозяевами являются, кроме человека, многие виды животных и птиц. В организме промежуточных хозяев токсоплазмы проходят бесполый цикл развития.
Клинические проявления токсоплазмоза разнообразны. Приобретенный токсоплазмоз выражается в поражении лимфатическх узлов, глаз, сердца, легких, кишечника, нервной системы. Часто токсоплазмоз протекает в бессимптомной форме, при которой, однако, образуются антитела. В клетках ретику-ло-макрофагальной и центральной нервной системы образуются цисты, сохраняющиеся в течение длительного времени без клинических проявлений. Человек, инфицированный токсоплазмами, не выделяет их во внешнюю среду.
Врожденный токсоплазмоз - заболевание тяжелое. У ребенка наблюдаются поражения центральной нервной системы, глаз, дефекты развития.
Инфицирование плода в ранние сроки беременности приводит к его гибели.
Лабораторная диагностика проводится путем микроскопии мазка из патологического материала, окрашенного по Романовскому-Гимза. Возможно получение культуры токсоплазм путем внутрибрюшинного заражения мышей, с последующим исследованием перитонеального экссудата. В лабораторной практике обычно применяют серологические методы: РСК, РИФ, РИГА, а также реакцию Себина-Фельдмана, принцип которой состоит в том, что живые токсоплазмы в присутствии антител сыворотки крови больного теряют способность окрашиваться метиленовым синим. Ставится аллергическая проба с токсоплазмином.
Для лечения применяются хлоридин (цараприм), сульфаниламидные препараты
Введение 5
Краткий очерк истории развития микробиологии 5
Часть первая
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Глава 1 Место микроорганизмов среди других живых существ 13
Классификация и систематика 13
Глава 2 Морфология микроорганизмов 15
Бактерии 15
Микоплазмы 21
Риккетсии 21
Хламидии 22
Актин о мид еты 22
Спирохеты 23
Простейшие 25
Глава 3 Методы микроскопического исследования микробов 26
Микроскопия в световом оптическом микроскопе 26
Микроскопия в темном поле 28
Фазовоконтрасшая микроскопия 29
Люминесцентная микроскопия 29
Электронная микроскопия 30
Глава 4 Физиология микроорганизмов 30
Химический cociaB микроорганизмов 30
Метаболизм (обмен вещесгв) микроорганизмов 32
Питание микробов (конструктивный метаболизм) 32
Ферменты 33
Биологическое окисление (энергетический штабо чизм) 34
Рост и размножение микроорганизмов 36
Образование микробами пигментов, ароматических веществ
Светящиеся микроорганизмы 37
Глава 5 Методы культивирования микроорганизмов
Изучение культуральных и биохимических свойств 38
Питательные среды 38
Культивирование и выделение чистых культур аэробных бактерий 39 Культивирование и выделение чистых культур анаэробных бактерий 41 Ку 1ьтивирование других микроорганизмов микоплазм, риккетсий, хламидий, спирохет, грибов, простейших 42 Методы изучения ферментативной активности (биохимических свойств) микроорганизмов 42 Глава 6 Общая вирусология 44 Общая характеристика вирусов,
морфология и структура вирионов 44 Репродукция виру сов 46 Методы культивирования вирусов 48 Глава? Бактериофаги и бактериофагия 49 Структура бактериофагов 50 Взаимодействие бактериофага с бактериальной клеткой 50 Практическое значение бактериофагов 52 Глава 8 Экологическая микробиология (микроэколо! ия) 53 Микрофлора почвы 54 Микроф юраводы 55 Микрофлор а в оз дух а 55 Микроорганизмы пищевых продуктов 56 Микрофлора различных объектов 56 Роль микроорганизмов в круговороте веществ в природе, в возникновении и существовании биосферы 57 Глава 9 Влияние факторов внешней среды на микроорганизмы 60 Влияние физических факторов 61 Влияние химических факторов 62 Влияние биологических факторов 64 Асептика антисептика, дезинфекция, стерилизация 64 Глава 10 Гене гика микроорганизмов 68 Организация генетического материала у бактерий Генотип и фенотип 68 Изменчивость микроорганизмов 69 Генетические рекомбинации 70 Практическое значение учения о генетике микроорганизмов 73 Генетическая инженерия 73 Глава 11 Антибиотики 74 Природные и полусинтетические антибиотики 75 Химиотерапевшческие средства (синтетические антибиотики) 76
Побочные явления при антибиотикотерапии............................................79
Лекарственная устойчивость микробов........".................................:...........80
Глава 12. Микрофлора организма человека..................................................................83
Взаимоотношения микробов и макроорганизма......................................83
Характеристика микрофлоры организма человека..................................84
Значение микрофлоры организма человека. Дисбактериоз...................86
Глава 13. Инфекция..........................................................................................................88
Свойства патогенного микроорганизма.....................................................88
Значение состояния макроорганизма и условий внешней
среды в инфекционном процессе..................................................................91
f Характерные черты инфекционного заболевания...................................92
Формы проявления инфекционного процесса.........................................92
Особенности вирусных инфекций................................................................94
Врожденные инфекции.................................................................................94
Условно-патогенные микроорганизмы.......................................................95
Внутрибольничные инфекции......................................................................95
Главен. Иммунитет.......................................................................................................96
Виды иммунитета. Неспецифические факторы защиты..........................97
Приобретенный иммунитет........................................................................102
Виды и формы приобретенного иммунитета .........................................102
Антигены ...................................................................................................104
Иммунная система организма. .................................................................106
Иммунный ответ (иммуногенез) ............................................................108
Антитела (иммуноглобулины)......... .........................................................110
Аллергия.......... ............................................................................................................... 115
Особенности противовирусного иммунитета.............................................. 118
Иммунодефицитные состояния.....................................................................119
Оценка иммунного статуса организма.........................................................120
Иммунофармакологическме средства.......................................................120
Становление и развитие иммунной системы в онтогенезе.......................121
Реакции иммунитета.....................................................................................123
Реакция нейтрализации токсина антитоксином.... ..............................123
Реакция агглютинации .............................................................................124
Реакция непрямой или пассивной гемагглютинации ..............................125
РеакцияКумбса (антиглобулиновыйтест).................... ..........................125
Реакция преципитации...................................... ..................................... „125
Реакция иммунного лизиса... ..................................................................... 126
Реакция связывания комплемента ............................................................127
Реакции с участием меченых антигенов или антипел... .......................127
Медицинские биологические препараты для диагностики, .
профилактики и терапии инфекционных болезней.....................................130
, Диагностические препараты... .......................................................... 130
Лечебные и профилактические препараты. Вакцины. .....................133
Иммунные сыворотки и иммуноглобулины.. ......................................Л 36
гиь У Часть вторая.
ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
- f J t У
Методы лабораторной диагностики ч >. инфекционных заболеваний.........................................................................139
ПАТОГЕННЫЕ КОККИ......................................................................................141
Стафилококки........................................................................................................141 ,
Стрептококки.........................................................................................................146
Менингококки........................................................................................................150
Гонококки..........................................................................................................152
СЕМЕЙСТВО КИШЕЧНЫХ БАКТЕРИЙ..........................................................153 1
Эшерихии...........................................................................................................155
Сальмонеллы....................................................................................................158
Сальмонеллы -возбудителибрюшного тифа ипаратифов.. ...........158
Сальмонеллы - возбудители острых гастроэнтероколитов ...........161
" Шигеллы........................................................................................................163
Клебсиеллы........................................................................................................165
J Протеи.................................................................................................................166
Иерсинии........................................................................................................... 167
ХОЛЕРНЫЙ ВИБРИОН......................................................................................... |?2
КАМПИЛОБАКТЕРЫ...........................^
ГЕМОФИЛЬНЫЕБАКТЕРИИ............................................................................175
СИНЕГНОЙНАЯ ПАЛОЧКА.................................................................................178
ЛЕгаОНЕЛЛЫ.;.............................................................................,.................................179
БРУЦЕЛЛЫ..................,.............................................................................................,..181
БАКТЕРИИ ТУЛЯРЕМИИ......................................................................................^!
БАЦИЛЛЫ СИБИРСКОЙЯЗВЫ.........................................................................Л83
КОРИНЕБАКТЕРИИДИФТЕРИИ.............................................................185
МИКОБАКТЕРИИ...................................................................................................188
Микобактерии туберкулеза.............................................................................188
f Микобактерии лепры.......................................................................................191
" АКТИНОМИЦЕТЫ.......................................................................................192
ПАТОГЕННЫЕ АНАЭРОБЫ РОДА CLOSTRIDIUM................................193
Клостридии столбняка 193
Клостридии анаэробной газовой инфекции 195
Клостридии бот\лизма 197
НЬСПОРООЪРАЗУЮЩИЬ АНАЭРОЬЫ 199
ПАТОГЕННЫЕ СПИРОХЕТЫ 200
Трепонемы Возбудше ть сифилиса 200
Боррелии 203
Леигоспиры 205
МИКОПЛАЗМЫ 206
РИККЕГСИИ 208
Возбудитель эпидемического сыпного тифа 208
Возбудитель К> ашхорадки 209
ХЛАМИДИИ 210 ВОЗБУДИТЕЛИ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 212
Вирус гриппа 214
Вирус кори 217
Виру с эпидемического паротита 218
Виру с иммунодефицита человека (ВИЧ) 219
Вирус бешенства 222
Вирус полиомиелита 224 Вирусы Коксаки ECHO и другие энтероеирусы 225
Ротавирусы 226
Виру с краснухи 228
Арбовирусы 229
Вирус натуральной оспы 231
Герпесвирусы 232
Вирусы гепатитов 235
Возбудители медленных вирусных инфекций 239
Онкогенные вирусы 240
ПАТОГЕННЫ!? ГРИБЫ 24 2
ПАТОГЕННЫЕ ПРОСТЕЙШИЕ 246
Возбудители эпидермомикозов являются анаморфы (структуры бесполого размножения) 40 близкородственных видов из трех родов: Epidermophyton (2 вида), Microsporum (16 видов), Trichophyton (24 вида); их телеоморфы (структуры полового размножения) включены в один род Arthroderma. В 1839 г. Ю. Шенляйн впервые описал фавус (паршу) как грибковое заболевание. В 1845 г. Р. Ремак назвал этот гриб Achorion schoenleinii. Позже были открыты другие возбудители эпидермомикозов. Дерматомицеты не относятся к диморфным грибам. Их дифференциация основывается преимущественно на морфологических и культуральных признаках.
Trichophyton |
Морфологические и культуральные свойства
Дерматомицеты образуют септированный мицелий со спиралями, ракетовидными вздутиями, артроспорами, хламидоспорами, макро- и микроконидиями. Они подвергаются плеоморфным изменениям в лабораторных условиях, когда теряют способность к пигментообразованию и формированию конидий. Виды различают по пигментации и форме колоний. Дерматомицеты хорошо растут на глюкозном агаре Сабуро.
Для трихофитонов характерны зернистые или мучнистые колонии с обильными микроконидиями, располагающимися гроздьями на терминальных гифах.
Микроспорумы образуют толстостенные или тонкостенные макроконидии, состоящие из 8-15 (М. canis) или 4-6 (М. gypseum) клеток. Их колонии окрашены в желто-оранжевый цвет. При ультрафиолетовом облучении пораженных микроспорумами волос наблюдается флюоресценция светло-зеленым цветом.
Эпидермофитонам присущи 1-5-клеточные булавовидные конидии.
Антигены
Все дерматомицеты - слабые антигены. Гликопротеины клеточных стенок этих грибов являются аллергенами, причем углеводная часть аллергена обусловливает развитие ГНТ, а белковая часть - ГЗТ.
Патогенез и иммунитет
Возбудители эпидермомикозов поражают эпидермис, волосы, ногти вследствие прямого контакта здорового человека с зараженными чешуйками или волосами больного. Гифы грибов затем прорастают в роговой слой, вызывая разнообразные по клиническому проявлению и локализации заболевания. Отдельные случаи заболеваний связаны с контактом людей (особенно детей) с больными собаками и кошками. В редких случаях могут развиваться генерализованные формы эпидермомикозов с поражением обширных областей кожи туловища и головы, с вовлечением лимфатических узлов.
При эпидермомикозах наблюдается развитие гиперчувствительности немедленного (ГНТ) и замедленного типов (ГЗТ). Экология и эпидемиология. Большинство дерматомицетов широко распространено в природе. Одни виды обнаруживаются в почве и никогда не вызывают заболеваний у человека, другие патогенны для людей. Более десятка видов антропофильных дерматомицетов (Т. rubrum, Т. tonsurans и др.) передаются от человека к человеку; другие - зоофильные дерматомицеты (М. canis, Т. verrucocum), патогенные для домашних и диких животных, передаются человеку; третьи - геофильные дерматомицеты (М. gypseum, M. fulvum), обитают в почве, но также способны поражать человека.
Дерматомицеты достаточно устойчивы к воздействию факторов окружающей среды. Некоторые виды встречаются главным образом в определенных географических регионах.
Лабораторная диагностика
Патологический материал (чешуйки кожи, ногтей, волосы, извлеченные из пораженных мест) микроскопируют, предварительно размягчив их в 10-20% растворе КОН. Microsporum образует тесные пласты спор в мозаичном порядке вокруг волос, тогда как Trichophyton - параллельные ряды спор, снаружи (эктотрикс) и внутри (эндотрикс) пораженных волос.
К дерматомицетам группы эктотрикс относят Microsporum audouinii, M.canis, M.gypseum и др.; к группе эндотрикс - Т. gourvilii, Т. tonsurans и др. Одни из них не образуют конидий в волосе, другие редко проникают в волосы, третьи волосы не инвазируют. Волосы, инфицированные Microsporum, флюоресцируют при ультрафиолетовом облучении. Окончательная идентификация дерматомицетов проводится на основании изучения культур, выращенных в течение 1-3 недель на среде Сабуро при 20°С, по морфологическим особенностям мицелия и спор. Для идентификации дерматомицетов с освобождением их от контаминирующих грибов и бактерий используют специальную питательную среду - DTM, которая нашла широкое применение в клинических лабораториях.
Специфическая профилактика отсутствует