Les méthodes de diagnostic en laboratoire des infections virales sont divisées en plusieurs grands groupes.

- Méthodes directes, consistant à identifier le virus lui-même ou les anticorps dirigés contre celui-ci directement dans le matériel biologique.

- Les méthodes indirectes impliquent la production artificielle du virus en quantités importantes et son analyse plus approfondie.

Les méthodes de diagnostic les plus pertinentes dans la pratique quotidienne comprennent :

Méthodes de diagnostic sérologique - détection de certains anticorps ou antigènes dans le sérum sanguin du patient suite à la réaction antigène-anticorps (AG-AT). Autrement dit, lors de la recherche d'un antigène spécifique chez un patient, l'anticorps synthétisé artificiellement correspondant est utilisé et, par conséquent, vice versa, lors de l'identification des anticorps, des antigènes synthétisés sont utilisés.

Réaction d'immunofluorescence (RIF)

Basé sur l’utilisation d’anticorps marqués par un colorant. Si un antigène viral est présent, il se lie aux anticorps marqués et une couleur spécifique est observée au microscope, ce qui indique un résultat positif. Avec cette méthode, malheureusement, une interprétation quantitative du résultat est impossible, mais seulement qualitative.

La possibilité d'une détermination quantitative est assurée par un test immuno-enzymatique (ELISA). Il est similaire au RIF, cependant, ce ne sont pas des colorants qui sont utilisés comme marqueurs, mais des enzymes qui convertissent les substrats incolores en produits colorés, ce qui permet de quantifier la teneur en antigènes et en anticorps.

- Les anticorps et antigènes non liés sont éliminés.

- Un substrat incolore est ajouté, et dans les puits contenant l'antigène que nous détectons, une coloration se produira, car il y aura une enzyme associée à l'antigène, après quoi l'intensité de la luminescence du produit coloré sera évaluée à l'aide d'un appareil spécial.

Les anticorps sont détectés de la même manière.

Réaction d'hémagglutination indirecte (passive) (IPHA).

La méthode est basée sur la capacité des virus à se lier aux globules rouges. Normalement, les globules rouges tombent au fond de la plaque, formant ce qu'on appelle un bouton. Cependant, s’il y a un virus dans le matériel biologique étudié, il liera les globules rouges dans un soi-disant parapluie qui ne tombera pas au fond du puits.

Si la tâche consiste à identifier des anticorps, cela peut être fait en utilisant réaction d’inhibition de l’hémagglutination (HAI). Divers échantillons sont instillés dans le puits avec le virus et les globules rouges. Si des anticorps sont présents, ils se lieront au virus et les globules rouges tomberont au fond pour former un « bouton ».

Arrêtons-nous maintenant sur les méthodes permettant de diagnostiquer directement les acides nucléiques des virus étudiés, etTout d’abord, à propos de la PCR (Polymerase Chain Reaction) .

L’essence de cette méthode est de détecter un fragment spécifique d’ADN ou d’ARN d’un virus en le copiant plusieurs fois dans des conditions artificielles. La PCR ne peut être réalisée qu'avec de l'ADN, c'est-à-dire que pour les virus à ARN, il faut d'abord effectuer une réaction de transcription inverse.

La PCR est réalisée directement dans un appareil spécial appelé thermocycleur, ou thermocycleur, qui maintient la température requise. Le mélange PCR est constitué d'ADN ajouté, qui contient le fragment qui nous intéresse, d'amorces (un court fragment d'acide nucléique, complémentaire de l'ADN cible, sert d'amorce pour la synthèse de la chaîne complémentaire), d'ADN polymérase et de nucléotides.

Étapes du cycle PCR :

- La dénaturation est la première étape. La température monte jusqu'à 95 degrés, les chaînes d'ADN s'écartent les unes des autres.

- Recuit des amorces. La température est réduite à 50-60 degrés. Les amorces trouvent une région complémentaire de la chaîne et s'y lient.

- La synthèse. La température est à nouveau portée à 72, c'est la température de travail de l'ADN polymérase qui, à partir des amorces, construit des chaînes filles.

Le cycle est répété plusieurs fois. Après 40 cycles, une molécule d'ADN produit 10*12 degrés de copies du fragment souhaité.

Lors de la réalisation d'une PCR en temps réel, les copies synthétisées d'un fragment d'ADN sont marquées avec un colorant. L'appareil enregistre l'intensité de la lueur et crée des graphiques de l'accumulation du fragment souhaité au fur et à mesure de la progression de la réaction.

Les méthodes modernes de diagnostic de laboratoire d'une grande fiabilité permettent de détecter la présence d'un virus pathogène dans l'organisme, souvent bien avant l'apparition des premiers symptômes de la maladie.

Avec une majorité infections virales des réactions immunitaires se développent et sont utilisées pour Diagnostique. Les réponses cellulaires sont généralement évaluées dans des tests de cytotoxicité des lymphocytes contre des agents infectieux ou des cellules cibles infectées par ceux-ci, ou la capacité des lymphocytes à répondre à divers Ag et mitogènes est déterminée. Dans les laboratoires pratiques, la gravité des réactions cellulaires est rarement déterminée. Les méthodes d’identification des AT antiviraux sont devenues plus répandues.

Le PH est basé sur suppression de l'effet cytopathogène après avoir mélangé le virus avec de l'AT spécifique. Le virus inconnu est mélangé à des antisérums commerciaux connus et, après une incubation appropriée, ajouté à la monocouche cellulaire. L'absence de mort cellulaire indique une divergence entre l'agent infectieux et les AT connus.

Inhibition de l'hémagglutination

RTGA est utilisé pour identifier les virus, capable d'agglutiner divers globules rouges. Pour ce faire, mélangez le milieu de culture contenant le pathogène avec un antisérum commercial connu et ajoutez-le à la culture cellulaire. Après incubation, la capacité de la culture à l'hémagglutination est déterminée et, en son absence, on conclut que le virus ne correspond pas à l'antisérum.

Inhibition de l'effet cytopathique par interférence virale

La réaction d'inhibition de l'effet cytopathique due à l'interférence de virus utilisé pour identifier un agent pathogène qui interfère avec un virus cytopathogène connu dans une culture de cellules sensibles. Pour ce faire, du sérum commercial est ajouté au milieu de culture contenant le virus étudié (par exemple au virus de la rubéole s'il est suspecté), incubé et une seconde culture est infectée ; après 1 à 2 jours, un virus cytopathogène connu (par exemple, n'importe quel virus ECHO) y est introduit. Si un effet cytopathogène est présent, on conclut que la première culture a été infectée par un virus correspondant à l'AT utilisé.

Immunofluorescence directe

Parmi les autres tests, le plus largement utilisé est réaction d'immunofluorescence directe(le plus rapide, le plus sensible et le plus reproductible). Par exemple, l'identification du CMV par son effet cytopathogène nécessite au moins 2 à 3 semaines, et lors de l'utilisation d'AT monoclonale marquée, l'identification est possible dans les 24 heures. Disposant d'un ensemble de tels réactifs, ils peuvent être ajoutés aux cultures infectées par le virus, incubé, lavé le réactif non lié et examiné par microscopie à fluorescence (vous permet de détecter la présence de fluorescence des cellules infectées).

Microscopie immunoélectronique

Microscopie immunoélectronique(analogue à la méthode précédente) permet d'identifier différents types de virus identifiés par microscopie électronique (par exemple, différents types de virus de l'herpès), ce qui ne peut être fait sur la base de caractéristiques morphologiques. Au lieu d'antisérums, des AT marqués de différentes manières sont utilisés pour l'identification, mais la complexité et le coût élevé de la méthode limitent son utilisation.

119. Tests sérologiques utilisés pour diagnostiquer les infections virales.

Détection dans le sérum La présence d'anticorps contre des antigènes pathogènes permet de poser un diagnostic de la maladie. Les études sérologiques sont également utilisées pour identifier les antigènes microbiens, diverses substances biologiquement actives, les groupes sanguins, les antigènes tissulaires et tumoraux, les complexes immuns, les récepteurs cellulaires, etc.

Quand un microbe est isolé L'agent pathogène est identifié chez le patient par l'étude de ses propriétés antigéniques à l'aide de sérums d'immunodiagnostic, c'est-à-dire de sérums sanguins d'animaux hyperimmunisés contenant des anticorps spécifiques. C'est ce qu'on appelle identification sérologique micro-organismes.

Largement utilisé en microbiologie et en immunologie réactions d'agglutination, précipitation, neutralisation, réactions impliquant le complément, utilisant des anticorps et des antigènes marqués (méthodes radioimmunologiques, immunoenzymatiques, immunofluorescentes). Les réactions répertoriées diffèrent par l'effet enregistré et la technique de production, mais elles sont toutes basées sur la réaction d'interaction d'un antigène avec un anticorps et sont utilisées pour détecter à la fois les anticorps et les antigènes. Les réactions immunitaires se caractérisent par une sensibilité et une spécificité élevées.

Caractéristiques de l'interaction des anticorps avec les antigènes sont à la base des réactions diagnostiques en laboratoire. Réaction in vitro entre l'antigène et l'anticorps consiste en une phase spécifique et non spécifique. DANS phase spécifique une liaison spécifique rapide du centre actif de l'anticorps au déterminant antigène se produit. Puis vient phase non spécifique - plus lente, ce qui se manifeste par des phénomènes physiques visibles, par exemple la formation de flocs (phénomène d'agglutination) ou de précipité sous forme de turbidité. Cette phase nécessite la présence de certaines conditions (électrolytes, pH optimal du milieu).

La liaison du déterminant antigénique (épitope) au centre actif du fragment Fab des anticorps est due aux forces de Van der Waals, aux liaisons hydrogène et à l'interaction hydrophobe. La force et la quantité d'antigène lié aux anticorps dépendent de l'affinité, de l'avidité des anticorps et de leur valence.

A la question sur le diagnostic express :

1. Une culture isolée sous sa forme pure peut être diagnostiquée. 2. Dans des laboratoires spécialement équipés (doit avoir une autorisation) 3. Respect de règles strictes telles que : salle isolée, combinaisons de protection spéciales requises, désinfection complète obligatoire de la pièce après avoir travaillé avec l'agent pathogène, désinfection des chercheurs après la fin des travaux. Méthodes de diagnostic expert. 1. Bactériologie - milieux nutritifs polytropiques combinés pour une étude rapide des formes, colorants, biochimiques. propriétés. Utilisation de ruban indicateur enzymatique, méthode électrophysique, méthode de disques de papier imbibés de diverses substances (glucose, lactose, etc.) 2. Diagnostic des phages. 3. Sérodiagnostic - Méthode Mancini, précipitation en gel selon Ascoli, RA, RPGA. 4. Bactérioscopie - RIF direct et indirect. Méthodes de diagnostic express pour : Choléra - M.Z. Ermolyeva, station d'immobilisation avec sérum de diagnostic du choléra, RIF. Tularémie - PR sur verre, RPGA Chume - typage par phage, méthode du disque papier glucidique, RPGA. Ulcère des sinus - Méthode Ascoli, RIF, RPGA. Mode de croissance : il en existe trois : diffus (anaérobies facultatifs), de fond (anaérobies obligatoires) et de surface (aérobies obligatoires).

Isolement d'une culture pure de bactéries anaérobies

En pratique de laboratoire, vous devrez souvent travailler avec des micro-organismes anaérobies. Ils sont plus exigeants en milieux nutritifs que les aérobies, nécessitent plus souvent des additifs de croissance spéciaux, nécessitent l'arrêt de l'accès à l'oxygène pendant leur culture et leur durée de croissance est plus longue. Par conséquent, travailler avec eux est plus complexe et nécessite une attention particulière de la part des bactériologistes et des techniciens de laboratoire.

Il est important de protéger les matériaux contenant des agents pathogènes anaérobies des effets toxiques de l’oxygène atmosphérique. Il est donc recommandé de prélever le matériel des foyers d'infection purulente lors de la ponction à l'aide d'une seringue ; le temps entre le prélèvement du matériel et son inoculation sur un milieu nutritif doit être le plus court possible.

Étant donné que des milieux nutritifs spéciaux sont utilisés pour cultiver des bactéries anaérobies, qui ne doivent pas contenir d'oxygène et avoir un faible potentiel rédox (-20 -150 mV), des indicateurs sont ajoutés à leur composition - résazurine, bleu de méthylène, etc., qui réagissent à un changement dans ce potentiel. Au fur et à mesure de sa croissance, les formes incolores des indicateurs se rétablissent et changent de couleur : la résazurine vire au rose moyen et le bleu de méthylène vire au bleu moyen. De tels changements indiquent l'impossibilité d'utiliser des milieux pour la culture de microbes anaérobies.

L'introduction d'au moins 0,05 % d'agar dans le milieu permet de réduire le potentiel rédox, ce qui, en augmentant sa viscosité, contribue à réduire l'apport d'oxygène. Ceci, à son tour, est également réalisé en utilisant des milieux nutritifs frais (au plus tard deux heures après la production) et réduits.

Il faut tenir compte du fait qu'en raison des particularités du métabolisme de type fermentatif des bactéries anaérobies, celles-ci nécessitent des environnements plus riches en composants nutritionnels et en vitamines. Les plus couramment utilisés sont les infusions cœur-cerveau et foie, les extraits de soja et de levure, les digestats hydrolytiques de caséine, de peptone, de tryptone. Il est obligatoire d'ajouter des facteurs de croissance tels que le Tween-80, l'hémine, la ménadione, le sang total ou hémolysé.

L'isolement d'une culture pure de micro-organismes aérobies comprend plusieurs étapes. Le premier jour (stade 1 de l'étude), le matériel pathologique est prélevé dans un récipient stérile (éprouvette, flacon, flacon). Il est étudié pour son aspect, sa consistance, sa couleur, son odeur et d'autres caractéristiques, un frottis est préparé, peint et examiné au microscope. Dans certains cas (gonorrhée aiguë, peste), il est possible à ce stade de poser un diagnostic préalable et, en outre, de sélectionner les milieux sur lesquels le matériel sera inoculé. L'occupation s'effectue à l'anse bactériologique (utilisée le plus souvent), à l'aide d'une spatule selon la méthode Drigalsky, et d'un coton-tige. Les tasses sont fermées, retournées, signées au crayon spécial et placées dans un thermostat à la température optimale (37°C) pendant 18-48 ans. Le but de cette étape est d'obtenir des colonies isolées de micro-organismes. Cependant, parfois, afin d'accumuler du matériel, il est semé sur des milieux nutritifs liquides.

Des frottis sont préparés à partir de colonies suspectes, colorées selon la méthode de Gram pour étudier les propriétés morphologiques et tinctoriales des agents pathogènes, et les bactéries mobiles dans une goutte « suspendue » ou « écrasée » sont examinées. Ces signes ont une très grande valeur diagnostique pour caractériser certains types de micro-organismes. Les restes des colonies étudiées sont soigneusement retirés de la surface du milieu sans toucher les autres et inoculés sur des tranches de gélose ou sur des secteurs de boîte de Pétri avec un milieu nutritif pour obtenir une culture pure. Les tubes à essai ou les plats contenant des cultures sont placés dans un thermostat à la température optimale pendant 18 à 24 heures.

Les bactéries peuvent également se développer différemment sur des milieux nutritifs liquides, bien que les caractéristiques des manifestations de croissance soient plus faibles que sur des milieux solides.

Les bactéries sont capables de provoquer une turbidité diffuse du milieu, sa couleur ne peut pas changer ni acquérir la couleur d'un pigment. Ce modèle de croissance est le plus souvent observé chez la plupart des micro-organismes anaérobies facultatifs.

Parfois, un précipité se forme au fond du tube à essai. Il peut être friable, homogène, visqueux, muqueux, etc. Le milieu situé au-dessus peut rester transparent ou devenir trouble. Si les microbes ne forment pas de pigment, le sédiment a une couleur bleu bleuâtre ou jaunâtre. En règle générale, les bactéries anaérobies se développent de la même manière.

La croissance pariétale se manifeste par la formation de flocons et de grains fixés sur les parois internes du tube à essai. Le support reste transparent.

Les bactéries aérobies ont tendance à se développer superficiellement. Un film délicat, incolore ou bleuâtre se forme souvent sous la forme d'une couche à peine perceptible sur la surface, qui disparaît lorsque le support est secoué ou secoué. Le film peut être humide, épais, avoir une consistance filandreuse et visqueuse et coller à la boucle en tirant derrière elle. Mais il existe également un film dense, sec et cassant, dont la couleur dépend du pigment produit par les micro-organismes.

Si nécessaire, un frottis est réalisé, coloré, examiné au microscope et les micro-organismes sont inoculés avec une anse à la surface d'un milieu nutritif solide pour obtenir des colonies isolées.

Le troisième jour (étape 3 de l'étude), le schéma de croissance d'une culture pure de micro-organismes est étudié et son identification est réalisée.

Tout d'abord, ils prêtent attention aux caractéristiques de la croissance des micro-organismes sur le milieu et réalisent un frottis en le colorant selon la méthode Gram, afin de vérifier la pureté de la culture. Si des bactéries de même type de morphologie, de taille et de propriétés tinctoriales (capacité à teindre) sont observées au microscope, on conclut que la culture est pure. Dans certains cas, sur la base de l’apparence et des caractéristiques de leur croissance, on peut tirer une conclusion sur le type d’agents pathogènes isolés. La détermination des espèces de bactéries en fonction de leurs caractéristiques morphologiques est appelée identification morphologique. La détermination du type d’agent pathogène en fonction de ses caractéristiques culturelles est appelée identification culturelle.

Cependant, ces études ne suffisent pas pour tirer une conclusion définitive sur le type de microbes isolés. C’est pourquoi les propriétés biochimiques des bactéries sont étudiées. Ils sont assez divers.

Le plus souvent, les propriétés saccharolytiques, protéolytiques, peptolytiques, hémolytiques, la formation d'enzymes décarboxylases, oxydase, catalase, plasmacoagulase, DNase, fibrinolysine, la réduction des nitrates en nitrites, etc. A cet effet, il existe des milieux nutritifs spéciaux dans lesquels des micro-organismes sont inoculés (série Hiss panachée, MPB, lactosérum caillé, lait, etc.).

La détermination du type d’agent pathogène en fonction de ses propriétés biochimiques est appelée identification biochimique.

MÉTHODES DE CULTURE ET D'ISOLEMENT DE CULTURE PURE DE BACTÉRIES Pour une culture réussie, en plus de milieux correctement sélectionnés et correctement ensemencés, des conditions optimales sont nécessaires : température, humidité, aération (apport d'air). La culture des anaérobies est plus difficile que celle des aérobies ; diverses méthodes sont utilisées pour éliminer l'air du milieu nutritif. L'isolement de types individuels de bactéries (culture pure) à partir du matériel d'essai, qui contient généralement un mélange de divers micro-organismes, est l'une des étapes de toute étude bactériologique. Une culture pure de microbes est obtenue à partir d’une colonie microbienne isolée. Lors de l'isolement d'une culture pure à partir de sang (hémoculture), elle est d'abord « cultivée » dans un milieu liquide : 10 à 15 ml de sang prélevé stérilement sont inoculés dans 100 à 150 ml de milieu liquide. Le rapport sang inoculé/milieu nutritif de 1:10 n'est pas accidentel - c'est ainsi que l'on obtient une dilution du sang (le sang non dilué a un effet néfaste sur les micro-organismes). Étapes d'isolement d'une culture pure de bactéries Étape I (matériel natif) Microscopie (idée approximative de la microflore). Semis sur milieu nutritif solide (obtention de colonies). Stade II (colonies isolées) Etude des colonies (propriétés culturelles des bactéries). Etude microscopique des microbes dans un frottis coloré (propriétés morphologiques des bactéries). Semis sur gélose nutritive inclinée pour isoler une culture pure. Stade III (culture pure) Détermination des propriétés culturelles, morphologiques, biochimiques et autres pour identifier une culture bactérienne IDENTIFICATION DES BACTÉRIES L'identification des cultures bactériennes isolées est réalisée en étudiant la morphologie des bactéries, leurs caractéristiques culturelles, biochimiques et autres inhérentes à chaque espèce .

2. Tests sérologiques utilisés pour diagnostiquer les infections virales.

Méthodes sérologiques, c'est-à-dire méthodes d'étude des anticorps et des antigènes utilisant des réactions antigène-anticorps déterminées dans le sérum sanguin et d'autres liquides, ainsi que dans les tissus corporels. La détection d’anticorps contre des antigènes pathogènes dans le sérum sanguin du patient permet de poser un diagnostic de la maladie. Les études sérologiques sont également utilisées pour identifier des antigènes microbiens, diverses substances biologiquement actives, des groupes sanguins, des antigènes tissulaires et tumoraux, des complexes immuns, des récepteurs cellulaires, etc. Lorsqu'un microbe est isolé chez un patient, l'agent pathogène est identifié en étudiant ses propriétés antigéniques à l'aide de les sérums de diagnostic immunitaire, c'est-à-dire le sérum sanguin d'animaux hyperimmunisés contenant des anticorps spécifiques. C'est ce qu'on appelle l'identification sérologique des micro-organismes. Les caractéristiques de l'interaction des anticorps avec les antigènes sont à la base des réactions diagnostiques en laboratoire. La réaction in vitro entre l'antigène et l'anticorps comprend une phase spécifique et non spécifique. Dans la phase spécifique, une liaison spécifique rapide du centre actif de l'anticorps au déterminant antigénique se produit. Vient ensuite une phase non spécifique, plus lente, qui se manifeste par des phénomènes physiques visibles, par exemple la formation de flocons (phénomène d'agglutination) ou de précipité sous forme de turbidité. Cette phase nécessite la présence de certaines conditions (électrolytes, pH optimal du milieu). La liaison du déterminant antigénique (épitope) au centre actif du fragment Fab des anticorps est due aux forces de Van der Waals, aux liaisons hydrogène et à l'interaction hydrophobe. La force et la quantité d'antigène lié aux anticorps dépendent de l'affinité, de l'avidité des anticorps et de leur valence.

3. Agents pathogènes du paludisme. Paludisme – une maladie infectieuse anthroponotique causée par plusieurs espèces de protozoaires du genre Plasmodium, transmise par des moustiques (Anopheles), accompagnée de fièvre, d'anémie, d'hypertrophie du foie et de la rate. Les agents responsables du paludisme appartiennent aux protozoaires, au phylum Apicomplexa, à la classe Sporozoa et aux espèces Pl. vivax, Pl.malariae, Pl.falciparum, Pl.ovale.

Épidémiologie. La source de l’infection est une personne infectée ; Le porteur est une femelle moustique du genre Anopheles. Le principal mécanisme de transmission est transmissible, par la piqûre d’un moustique femelle infesté.

Traitement et prévention. Les médicaments antipaludiques ont des effets différents sur les stades asexués et sexuels du plasmodium. Les principaux médicaments antipaludiques comprennent la quinine, la chloroquine, la quinine, la primaquine, le quinocide, le bigumal, la chloridine, etc. Actions préventives visent la source de l'agent pathogène (traitement des patients et des porteurs du paludisme) et la destruction des porteurs de l'agent pathogène - les moustiques. Des méthodes de vaccination sont développées sur la base d'antigènes obtenus par génie génétique.

1. Classification des antibiotiques selon leur structure chimique, leur mécanisme, leur spectre et leur type d'action.Selon la chimie rue. 1ère classe - B-lactame - pénicilline, céphalosporine. Classe 2 - macrolides - érythromycine, azithromycine. Classe 3 - aminosides - streptomycine, kanamycine. Classe 4 - tétracyclines - oxytétracycline, doxycycline. 5 cellules - polypeptides - polymyxine. 6 cellules - polyène-nystatine 7cl - ansamycine - rifampicine .

2. Selon le mécanisme d'action, il existe cinq groupes d'antibiotiques : 1.gr antibiotiques qui perturbent la synthèse de la paroi cellulaire - β-lactamines. 2.gr antibiotiques qui perturbent l'organisation moléculaire et la synthèse des membranes cellulaires - polymyxines, polyènes ; 3.gr antibiotiques qui perturbent la synthèse des protéines - aminoglycosides, tétracyclines, macrolides, chloramphénicol. 4.gr antibiotiques - inhibiteurs de la synthèse des acides nucléiques - les quinolones perturbent l'ADN synthèse , rifampicine - synthèse d'ARN; 5.gr d'antibiotiques qui suppriment la synthèse des purines et des acides aminés - sulfamides. Selon le spectre d'action, les antibiotiques sont divisés en cinq groupes en fonction des micro-organismes qu'ils affectent. Chacun de ces groupes comprend deux sous-groupes : les antibiotiques à large spectre et les antibiotiques à spectre étroit. Les antibiotiques antibactériens constituent le groupe de médicaments le plus important.

a) Les antibiotiques à large spectre affectent les représentants des trois départements des bactéries - aminosides, tétracyclines, etc.

b) Les antibiotiques à spectre étroit sont efficaces contre un petit nombre de bactéries - la myxine agit sur les Gracilicutae, la vancomycine affecte les bactéries à Gram positif.

2g - médicaments antituberculeux, anti-lèpre, antisyphilitiques.

3. Antibiotiques antifongiques.

a) L'amphotéricine B a un large spectre d'action, efficace contre la candidose, la blastomycose et l'aspergillose ; dans le même temps

b) un antibiotique à spectre étroit. - la nystatine, agissant sur les champignons du genre Candida, est

4. Les antibiotiques antiprotozoaires et antiviraux comprennent un petit nombre de médicaments.

5. Les antibiotiques antitumoraux sont des médicaments qui ont un effet cytotoxique. La plupart d'entre eux sont utilisés pour de nombreux types de tumeurs - la mitomycine C. L'effet des antibiotiques sur les micro-organismes est associé à leur capacité à supprimer certaines réactions biochimiques se produisant dans la cellule microbienne.

2. Théories de l'immunité.1.Théorie de l'immunité Mechnikov – la phagocytose joue un rôle décisif dans l'immunité antibactérienne. I.I. Mechnikov a été le premier à considérer l'inflammation comme un phénomène protecteur plutôt que destructeur. Le scientifique a qualifié les cellules protectrices qui agissent de cette manière de « cellules dévorantes ». Ses jeunes collègues français ont suggéré d'utiliser des racines grecques de même sens. I.I. Mechnikov a accepté cette option et le terme « phagocyte » est apparu. 2.Théorie de l'immunité Ehrlich est l'une des premières théories sur la formation d'anticorps, selon laquelle les cellules possèdent des récepteurs spécifiques à l'antigène qui sont libérés sous forme d'anticorps sous l'influence d'un antigène. Ehrlich a appelé les substances antimicrobiennes présentes dans le sang « anticorps ». P. Ehrlich s'est rendu compte qu'avant même le contact avec un microbe spécifique, le corps possède déjà des anticorps sous la forme qu'il a appelé « chaînes latérales » - ce sont des récepteurs lymphocytaires pour les antigènes. Ehrlich l’a ensuite « appliqué » à la pharmacologie : dans sa théorie de la chimiothérapie, il supposait la préexistence de récepteurs de substances médicinales dans l’organisme. En 1908, P. Ehrlich reçut le prix Nobel pour la théorie humorale de l'immunité. 3.La théorie de l’immunité de Bezredki- une théorie qui explique la défense de l’organisme contre un certain nombre de maladies infectieuses par l’émergence d’une immunité cellulaire locale spécifique contre les agents pathogènes. 4. Théories pédagogiques l'immunité est le nom général des théories de la formation d'anticorps, selon lesquelles le rôle principal dans la réponse immunitaire est attribué à un antigène qui participe directement en tant que matrice à la formation d'une configuration spécifique d'un antidéterminant ou agit comme un facteur qui change de direction la biosynthèse des immunoglobulines par les plasmocytes.

3. L'agent causal du botulisme. genre Clostridium espèce Clostridium botulinum provoque le botulisme - une intoxication alimentaire caractérisée par des lésions du système nerveux central. La maladie survient à la suite de la consommation d'aliments contenant des toxines C. Botulinum - des bâtonnets Gram positifs aux extrémités arrondies. Il a la forme d'une raquette de tennis. Ne forme pas de capsule. Mobile. Anaérobies obligatoires. En fonction de leurs propriétés antigéniques, ils sont divisés en 7 sérotypes. L'exotoxine botulique est le plus puissant de tous les poisons biologiques, ayant un effet neurotoxique (la dose mortelle pour l'homme est d'environ 0,3 mcg). Diagnostic microbiologique. Détection et identification de la toxine botulique dans le matériel de test à l'aide de la réaction d'hémagglutination indirecte inverse (RONGA), la réaction de neutralisation de la toxine avec l'antitoxine (sérum antitoxique) sur des animaux de laboratoire. Méthode bactériologique de détection d'agents pathogènes dans le matériel étudié. Prévention spécifique. Les anatoxines botuliques A, B, E font partie de la sextanatoxine, utilisée selon les indications. Pour la prophylaxie passive d'urgence, il est possible d'utiliser des sérums antitoxiques anti-botuliques Traitement. Des sérums hétérologues antibotuliques antitoxiques et des immunoglobulines homologues sont utilisés.

Cultivation. Sur gélose au sang, il forme de petites colonies transparentes entourées d'une zone d'hémolyse. Résistance. Les spores de C. botulinum ont une très haute résistance aux températures élevées.

Épidémiologie. Depuis le sol, le bacille botulique pénètre dans les produits alimentaires, où il se multiplie et libère de l'exotoxine. La voie de transmission de l’infection est la nourriture. Le facteur de transmission de l'infection le plus courant est la nourriture en conserve (champignons, légumes, viande, poisson). La maladie ne se transmet pas de personne à personne. Pathogénèse. La toxine botulique pénètre dans le tube digestif avec les aliments. Résistante à l’action des enzymes digestives, la toxine est absorbée par la paroi intestinale dans le sang et provoque une toxinémie à long terme. La toxine se lie aux cellules nerveuses et bloque la transmission des impulsions via les synapses neuromusculaires. En conséquence, une paralysie des muscles du larynx, du pharynx et des muscles respiratoires se développe, ce qui entraîne des troubles de la déglutition et de la respiration, et des modifications des organes de la vision sont observées. Image clinique. La période d'incubation dure de 6 à 24 heures à 2 à 6 jours. Plus la période d'incubation est courte, plus la maladie est grave. Habituellement, la maladie débute de manière aiguë, mais la température corporelle reste normale. Diverses variantes du botulisme sont possibles - avec une prédominance de symptômes de lésions du tube digestif, de déficience visuelle ou de fonction respiratoire. Dans le premier cas, la maladie débute par l'apparition d'une bouche sèche, de nausées, de vomissements et de diarrhée. Dans le second, les premières manifestations de la maladie sont associées à une déficience visuelle (le patient se plaint de « brouillard » devant les yeux et d'une vision double). À la suite d'une paralysie des muscles laryngés, un enrouement apparaît, puis la voix disparaît. Les patients peuvent mourir d'une paralysie respiratoire. La maladie peut se compliquer d'une pneumonie aiguë, d'une myocardite toxique et d'une septicémie. Le taux de mortalité par botulisme est de 15 à 30 %. Immunité. pas formé. Les anticorps produits au cours de la maladie sont dirigés contre un sérotype spécifique.

1.Méthodes de détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques. 1) Méthode de diffusion sur gélose. Le microbe étudié est inoculé sur un milieu nutritif gélose, puis des antibiotiques sont ajoutés. Les médicaments sont ajoutés soit dans des puits spéciaux dans de la gélose, soit des disques contenant des antibiotiques sont placés sur la surface de l'inoculation (« méthode du disque »). Les résultats sont enregistrés tous les deux jours en fonction de la présence ou de l'absence de croissance microbienne autour des trous (disques). 2) Méthodes de détermination. niveau minimum d'antibiotiques, ce qui permet in vitro d'empêcher la croissance visible de microbes dans le milieu nutritif ou de le stériliser complètement. A) Détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques par la méthode du disque. La culture bactérienne étudiée est ensemencée sur gélose nutritive ou milieu AGV en boîte de Petri. B) Milieu AGV : bouillon de poisson nutritif sec, agar-agar, phosphate de sodium disubstitué. C) Des disques de papier contenant certaines doses de différents antibiotiques sont placés sur la surface inoculée avec une pince à épiler à égale distance les uns des autres. Les cultures sont incubées à 37 °C jusqu'au lendemain. Le diamètre des zones d'inhibition de croissance de la culture bactérienne étudiée permet de juger de sa sensibilité aux antibiotiques.

D) Détermination de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques par la méthode des dilutions en série. déterminer la concentration minimale de l’antibiotique qui inhibe la croissance de la culture bactérienne testée.

E) L'évaluation des résultats de la détermination de la sensibilité des micro-organismes aux antibiotiques est effectuée à l'aide d'un tableau spécial prêt à l'emploi, qui contient les valeurs limites des diamètres des zones d'inhibition de la croissance pour les souches résistantes, moyennement résistantes et sensibles, ainsi que les valeurs CMI des antibiotiques pour les souches résistantes et sensibles. 3) Détermination des antibiotiques dans le sang, l'urine et d'autres fluides du corps humain. Deux rangées de tubes à essai sont placées dans un portoir. Dans l'un d'eux, des dilutions de l'antibiotique standard sont préparées, dans l'autre, des dilutions du liquide à tester sont préparées. Ensuite, une suspension de bactéries à tester préparées dans du milieu Hiss avec du glucose est ajoutée dans chaque tube à essai. Lors de la détermination de la pénicilline, des tétracyclines et de l'érythromycine dans le liquide d'essai, la souche standard de S. aureus est utilisée comme bactérie d'essai, et lors de la détermination de la streptomycine, E. coli est utilisée. Après incubation des cultures à 37 °C pendant 18 à 20 heures, les résultats de l'expérience sont notés par la turbidité du milieu et sa coloration avec un indicateur dû à la dégradation du glucose par les bactéries testées. La concentration de l'antibiotique est déterminée en multipliant la dilution la plus élevée du liquide d'essai, qui inhibe la croissance des bactéries d'essai, par la concentration minimale de l'antibiotique de référence, qui inhibe la croissance des mêmes bactéries d'essai. Par exemple, si la dilution maximale du liquide d'essai qui inhibe la croissance des bactéries d'essai est de 1 : 1024 et que la concentration minimale de l'antibiotique de référence qui inhibe la croissance des mêmes bactéries d'essai est de 0,313 μg/ml, alors le produit 1024 - 0,313 = 320 µg/ml est la concentration d'antibiotique dans 1 ml.

4) Détermination de la capacité de S. aureus à produire de la bêta-lactamase. Dans un flacon contenant 0,5 ml d'un bouillon de culture quotidien d'une souche standard de staphylocoque sensible à la pénicilline, ajouter 20 ml de gélose nutritive fondue et refroidie à 45°C, mélanger et verser dans une boîte de Pétri. Après solidification de la gélose, un disque contenant de la pénicilline est placé au centre de la plaque à la surface du milieu. Les cultures étudiées sont semées en boucle le long des rayons du disque. Les cultures sont incubées à 37 °C jusqu'au lendemain, après quoi les résultats de l'expérience sont notés. La capacité des bactéries étudiées à produire de la bêta-lactamase est jugée par la présence de croissance d'une souche standard de staphylocoque autour de l'une ou l'autre culture test (autour du disque).

2. Troubles du système immunitaire : déficits immunitaires primaires et secondaires.Immunodéficiences - il s'agit de troubles de l'état immunitaire normal provoqués par un défaut d'un ou plusieurs mécanismes de la réponse immunitaire. Immunodéficiences primaires, ou congénitales. Les troubles du système immunitaire peuvent affecter à la fois les principaux maillons spécifiques du fonctionnement du système immunitaire et des facteurs qui déterminent la résistance non spécifique. Des variantes combinées et sélectives de troubles immunitaires sont possibles. Selon le niveau et la nature des troubles, on distingue les déficits immunitaires humoraux, cellulaires et combinés.

Causes: duplication chromosomique, mutations ponctuelles, défauts des enzymes du métabolisme des acides nucléiques, troubles membranaires génétiquement déterminés, lésions du génome au cours de la période embryonnaire, etc. Les déficits immunitaires primaires apparaissent dès les premiers stades de la période postnatale et sont hérités de manière autosomique récessive. Manifestations– insuffisance de phagocytose, système du complément, immunité humorale (système B), immunité cellulaire (système T). Déficits immunitaires secondaires ou acquis Les déficits immunitaires secondaires, contrairement aux déficits primaires, se développent chez les individus dont le système immunitaire fonctionne normalement dès la naissance. Ils se forment sous l'influence de l'environnement au niveau phénotypique et sont causés par un dysfonctionnement du système immunitaire résultant de diverses maladies ou d'effets néfastes sur l'organisme. Les systèmes immunitaires T et B ainsi que les facteurs de résistance non spécifiques sont affectés ; leurs combinaisons sont également possibles. Les déficits immunitaires secondaires sont beaucoup plus fréquents que les déficits primaires. Les déficits immunitaires secondaires se prêtent à une immunocorrection,

Les déficits immunitaires secondaires peuvent être :

après des infections (surtout virales) et des invasions (protozoaires et helminthiases) ;

pour les brûlures;

avec urémie; pour les tumeurs ;

avec troubles métaboliques et épuisement;

avec dysbiose;

pour les blessures graves, les interventions chirurgicales importantes, notamment celles réalisées sous anesthésie générale ; sous irradiation, exposition à des produits chimiques ;

en vieillissant,

médicinal lié à la prise de médicaments.

Selon la clinique on distingue : 1) compensé, - sensibilité accrue de l'organisme aux agents infectieux. 2) sous-compensé - chronicité des processus infectieux.

3) décompensées - infections généralisées causées par des microbes opportunistes (OPM) et des néoplasmes malins.

3. L'agent causal de l'amibiase. Taxonomie. Caractéristique. Diagnostic microbiologique. Traitement spécifique. L'amibiase est une maladie infectieuse provoquée par Entamoeba histolytica, accompagnée de lésions ulcéreuses du côlon ; formation possible d'abcès dans divers organes; se produit de manière chronique. Protozoaires, phylum Sarcomastidophora, sous-embranchement Sarcodina.

Morphologie et culture. L'agent pathogène existe à deux stades de développement : végétatif et kystique. Le stade végétatif présente plusieurs formes (tissus, gros végétatif, luminal et prékystique). Le kyste (stade de repos) a une forme ovale et est formé à partir de formes végétatives présentes dans l'intestin. L'infection se produit lorsque des kystes pathogènes pénètrent dans l'intestin, où se forment des formes végétatives intestinales.

Résistance. En dehors du corps, les formes tissulaires et luminales de l'agent pathogène meurent rapidement (en 30 minutes). Les kystes sont stables dans l'environnement et restent dans les selles et l'eau à une température de 20 ºC pendant un mois. Dans les aliments, les légumes et les fruits, les kystes persistent plusieurs jours.

Mécanisme de transmission – fécal-non-oral. L'infection se produit lorsque les kystes sont introduits avec de la nourriture, en particulier des légumes et des fruits, et moins souvent avec de l'eau, via des articles ménagers. La propagation des kystes est facilitée par les mouches et les cafards.

Pathogenèse et tableau clinique. Les kystes qui pénètrent dans l’intestin et les formes d’amibes formées par la lumière peuvent y vivre sans provoquer de maladie. Lorsque la résistance de l’organisme diminue, les amibes pénètrent dans la paroi intestinale et se multiplient. Une amibiase intestinale se développe. Ce processus est facilité par certains représentants de la microflore intestinale. La partie supérieure du côlon et parfois le rectum sont touchés avec formation d’ulcères. Des selles molles fréquentes sont notées. Des éléments purulents et du mucus se retrouvent dans les selles. Une perforation de la paroi intestinale peut survenir avec le développement d'une péritonite purulente. Les amibes avec la circulation sanguine peuvent pénétrer dans le foie, les poumons et le cerveau - une amibiase extra-intestinale se développe. Une amibiase cutanée peut survenir, se développant à la suite d’un processus secondaire. Des érosions et des ulcères légèrement douloureux se forment sur la peau de la zone périanale, du périnée et des fesses. Immunité. Avec l'amibiase, l'immunité est instable. Traitement et prévention. Les médicaments suivants sont utilisés en traitement : agissant sur les amibes situées dans la lumière intestinale (dérivés de l'hydroxyquinoléine - quiniophone, entéroseptol, mexaform, intestopan, ainsi que composés de l'arsenic - aminarsone, osarsol, etc.) ; agissant sur les formes tissulaires des amibes (préparations d'émétine) ; agissant sur les formes luminales des amibes et des amibes situées dans la paroi intestinale (tétracyclines) ; agissant sur les amibes à n'importe quelle localisation (dérivés de l'imidazole - métronidazole). La prévention l'amibiase est associée à l'identification et au traitement des excréteurs de kystes et des porteurs d'amibes.

Diagnostic microbiologique. La méthode principale est un examen microscopique des selles du patient, ainsi que du contenu des abcès des organes internes. Les frottis sont colorés avec une solution de Lugolv ou de l'hématoxyline pour identifier les kystes et les trophozoïtes. Méthode sérologique : RIGA, ELISA, RSK, etc. Le titre d'anticorps le plus élevé est détecté avec l'amibiase extra-intestinale.

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Les réactions sérologiques sont désignées en fonction des phénomènes accompagnant la formation du complexe antigène-anticorps lors de l'interaction de composants aux propriétés différentes. Il existe des réactions d'agglutination, de précipitation et de lyse.

Réaction d'agglutination (RA)

La réaction d'agglutination (RA) repose sur l'utilisation d'un antigène corpusculaire (suspension de bactéries, d'érythrocytes sensibilisés, de particules de latex, etc.) interagissant avec des anticorps spécifiques, ce qui entraîne la précipitation du complexe antigène-anticorps résultant. Cette réaction est largement utilisée en laboratoire pour le diagnostic sérologique des infections bactériennes et pour l'identification de micro-organismes isolés.

La PR est utilisée pour diagnostiquer de nombreuses maladies infectieuses : brucellose (réaction de Wright, Heddleson), tularémie, leptospirose (RAL - réaction d'agglutination et de lyse de Leptospira), listériose, typhus (RAR - réaction d'agglutination de Rickettsia), shigellose, yersiniose, pseudotuberculose, etc.

Réaction d'agglutination indirecte ou passive (RIGA ou RPGA).

Pour mettre en scène cette réaction, on utilise des globules rouges d'animaux (mouton, singe, cobayes, certains oiseaux) sensibilisés par des anticorps ou un antigène, ce qui est obtenu en incubant une suspension de globules rouges et une solution d'antigène ou d'immunsérum.

Les diagnosticums obtenus à partir d'érythrocytes sensibilisés aux antigènes sont appelés diagnostics antigènes érythrocytaires. Ils sont destinés à la détermination des anticorps dans des dilutions en série de sérums sanguins, par exemple les érythrocytes shigella diagnosticums, les érythrocytes salmonella O-diagnosticums.

En conséquence, les diagnostics basés sur les érythrocytes sensibilisés par des immunoglobulines spécifiques sont appelés anticorps(immunoglobuline) diagnostics et ils servent à détecter des antigènes dans divers matériaux, par exemple, l'immunoglobuline érythrocytaire diphtheria diagnosticum pour RIGA, utilisée pour détecter l'exotoxine diphtérique des corynébactéries dans un milieu nutritif liquide lorsque du matériel provenant du nez et de l'oropharynx y est inoculé.

La réaction d'hémagglutination permet de diagnostiquer aussi bien les infections bactériennes (fièvre typhoïde, fièvre paratyphoïde, dysenterie, brucellose, peste, choléra, etc.) que virales (grippe, infections adénovirales, rougeole, etc.). En termes de sensibilité et de spécificité, RIGA est supérieur à la PR.

Réaction d'inhibition de l'hémagglutination (HAI)

La réaction d'inhibition de l'hémagglutination (HAI) est utilisée pour titrer les anticorps antiviraux dans le sérum sanguin, ainsi que pour établir le type de cultures virales isolées. RTGA peut être utilisé pour diagnostiquer les infections virales dont les agents pathogènes ont des propriétés hémagglutinantes.

Le principe de la méthode est que le sérum contenant des anticorps contre un type spécifique de virus supprime son activité hémagglutinante et que les globules rouges restent non agglutinés.

Réaction passive d’inhibition (retard) de l’hémagglutination (RPHA).

Trois composants sont impliqués dans le RTPGA : le sérum immunitaire, l'antigène (matériau de test) et les érythrocytes sensibilisés.

Si le matériel de test contient un antigène qui réagit spécifiquement avec les anticorps du sérum immunitaire standard, il les lie et, avec l'ajout ultérieur d'érythrocytes sensibilisés par un antigène homologue au sérum, l'hémagglutination ne se produit pas.

Le RTPHA est utilisé pour détecter les antigènes microbiens, pour leur détermination quantitative, mais également pour contrôler la spécificité du RTPGA.

Réaction d'agglutination au latex (RLA)

Les particules de latex sont utilisées comme support d'anticorps (immunoglobulines). RLA est une méthode expresse de diagnostic des maladies infectieuses, prenant en compte le temps requis (jusqu'à 10 minutes) et la capacité de détecter l'antigène dans un petit volume de matériel de test.

RLA est utilisé pour indiquer les antigènes de Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae type b, Neisseria meningitidis dans le liquide céphalo-rachidien, pour détecter les streptocoques du groupe A dans les prélèvements de gorge, pour diagnostiquer la salmonellose, la yersiniose et d'autres maladies. La sensibilité de la méthode est de 1 à 10 ng/ml, soit 10³ -10⁶ cellules bactériennes dans 1 µl.

Réaction de coagglutination (CoA)

La réaction de coagglutination (CoA) repose sur la capacité de la protéine A des staphylocoques à fixer des immunoglobulines spécifiques. RCA - méthode de diagnostic express - sert à identifier les antigènes thermostables solubles dans les sécrétions humaines et dans la composition des complexes immuns circulants (CIC). La détection d'antigènes spécifiques dans la composition du CEC nécessite leur précipitation préalable à partir du sérum sanguin.

Réaction de précipitation

Dans la réaction de précipitation (RP), à la suite de l'interaction d'anticorps avec des antigènes solubles hautement dispersés (protéines, polysaccharides), des complexes se forment avec la participation de compléments - précipités. Il s’agit d’un test sensible utilisé pour détecter et caractériser une variété d’antigènes et d’anticorps. L'exemple le plus simple de RP de haute qualité est la formation d'une bande de précipitation opaque dans un tube à essai à la limite de la couche d'antigène sur l'immunsérum - la réaction de précipitation en anneau. Différents types de RP en gels d'agar semi-liquide ou d'agarose sont largement utilisés (méthode de double immunodiffusion, méthode d'immunodiffusion radiale, immunoélectrophorèse).

Réaction de fixation du complément (CFR)

La réaction de fixation du complément (CFR) est basée sur le phénomène d'hémolyse avec la participation du complément, c'est-à-dire capable de détecter uniquement les anticorps fixateurs du complément.

La RSC est largement utilisée pour le diagnostic de nombreuses infections bactériennes et virales, des infections à rickettsies, des chlamydia, des mononucléoses infectieuses, des infections à protozoaires et des helminthiases. La RSC est une réaction sérologique complexe dans laquelle interviennent deux systèmes : le test (sérum sanguin), représenté par le système antigène-anticorps et complément, et l'hémolytique (globules rouges de mouton + sérum hémolytique). Le sérum hémolytique est du sérum sanguin de lapin inactivé par la chaleur et immunisé avec des érythrocytes de mouton. Il contient des anticorps contre les globules rouges de mouton.

Un résultat RSC positif - absence d'hémolyse - est observé si le sérum testé contient des anticorps homologues à l'antigène. Dans ce cas, le complexe antigène-anticorps résultant se lie au complément, et en l'absence de complément libre, l'ajout du système hémolytique ne s'accompagne pas d'hémolyse. S'il n'y a pas d'anticorps correspondant à l'antigène dans le sérum, la formation d'un complexe antigène-anticorps ne se produit pas, le complément reste libre et le sérum provoque une hémolyse des globules rouges, c'est-à-dire une hémolyse des globules rouges. la présence d'hémolyse est un résultat négatif de la réaction.

Iouchtchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.