Плазминогенийг идэвхжүүлэх нь нөлөөн дор явагддаг. TPA (эдийн плазминоген идэвхжүүлэгч, III хүчин зүйл, тромбопластин, tPA)

Энэхүү шинэ бүтээл нь бие дэх хагас задралын хугацаа уртассан, дулаан, хүчилд тэсвэртэй, тромбозын эргэн тойрон дахь үрэвслийг дарахад ашиглаж болох шинэ сайжруулсан эдэд идэвхтэй плазминоген (сайжруулсан TPA)-тай холбоотой юм. Шинэ бүтээл нь рекомбинант ДНХ технологийг ашиглан дээрх эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийг үйлдвэрлэх арга, түүнийг хэрэгжүүлэх арга хэрэгсэлтэй холбоотой юм. Хүний эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч (TPA) нь ашигтай фибринолитик үйл ажиллагаатай бөгөөд фибринтэй холбоотой плазминогений эсрэг маш үр дүнтэй байдаг бол энэ нь ердийн тромболитик бодис болох стрептокиназа (SK) шиг бие дэх чөлөөт эргэлтийн үе шатанд плазминогенийг идэвхжүүлдэггүй. ) ба урокиназа (Их Британи). Хүний APT-ийн амин хүчлийн дараалал болон хүний ​​APT-ийг кодлодог cDNA-ийн нуклеотидын дараалал нь мэдэгдэж байна (Pennica. D., et al., Nature, 301, 214-221, 1983). Хүний APT нь венийн болон артерийн цусны өтгөрөлтийг уусгадаг. Цочмог миокардийн шигдээстэй өвчтөнд судсаар тарьсан APT нь битүүмжилсэн титэм артерийг нөхөн сэргээхэд үр дүнтэй болохыг эмнэлзүйн томоохон туршилтууд харуулж байна. Гэсэн хэдий ч энэ эмийг тромбо үүсэхтэй холбоотой өвчний эмчилгээнд хэрэглэх сул тал нь цусан дахь ферментийн үйл ажиллагааны хагас задралын хугацаа маш богино байдаг (Rijken, D.C., et al., Thromb. Heamost. 54 (1), 61, 1985, Hubert, E.F., et al., Blood, 65, 539, 1985). Эмчилгээнд хэрэглэх үед хүний ​​APT-ийг судсаар өндөр тунгаар тасралтгүй тарилга хэлбэрээр хийх ёстой. Байгалийн гаралтай хүний ​​APT нь молекулын N төгсгөлөөс эхлэн хурууны домайн, EGF домэйн (эпидермисийн өсөлтийн хүчин зүйл), "крингл 1" ба "крингл 2" гэсэн хоёр домэйн, серин гэсэн домэйн бүтэцтэй байдаг нь мэдэгдэж байна. протеаз домер. Rijken болон бусад хүмүүсийн бүтээлд (Rijken D.C., et al., Thromb. Heamost., 54 (1), 61, 1985) хүний ​​APT-ийн богино биологийн хагас задралын хугацаа нь бүх домэйнтэй холбоотой байж болохыг тэмдэглэжээ. хүний ​​APT-ийн серины домайн -протеазаас бусад. Зонневелд нарын бүтээл. (Zonneveld, A.J.V., et al, Proc. Natl. Acad. USA., 83, 4670, 1986) мөн хурууны домэйн, EGF домэйн, крингл 2 домэйн нь байгалийн гаралтай хүний ​​фибрин холбох үйл ажиллагаанд чухал ач холбогдолтой болохыг тэмдэглэжээ. APT, мөн түүнчлэн APT-ийн фибринээс хамааралтай идэвхжүүлэлтийг хадгалах. Гэсэн хэдий ч байгалийн гаралтай хүний ​​APT-ийн фибрин холбох үйл ажиллагаа ба фибринээс хамааралтай үйл ажиллагааг хадгалах, мөн биологийн хагас задралын хугацааг уртасгах тусгай арга хэмжээ хараахан боловсруулагдаагүй байна. 48378/1987 дугаарт нийтлэгдсэн Японы патентын мэдүүлэг нь хүний ​​байгалийн гаралтай APT-ийн 87-175 амин хүчлийг устгаснаар олж авсан APT-ийг тайлбарлаж, "крингл 1" устгагдсан. Энэхүү APT нь эпидермисийн өсөлтийн хүчин зүйлийн бүсэд нэмэлт өдөөгдсөн цэгийн мутациар ялгагдана. Японы патентын өргөдөлд өөрчлөгдсөн APT нь фибринтэй холбогдох чадвартай боловч эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч дарангуйлагчтай харилцан үйлчлэл нь сулардаг. Европын патентын №241208 нь байгалийн гаралтай хүний ​​APT-ийн 92-179 амин хүчлийг устгаснаар олж авсан APT-ийг тайлбарласан бөгөөд "крингл 1" мөн устаж байна. Энэхүү ажил нь энэ APT нь фибринолитик үйл ажиллагаатай болохыг дурдсан байдаг. Нэмж дурдахад Европын патент No 231624 нь хагас задралын хугацаа уртассан өөрчлөгдсөн APT-ийг илчилдэг. F-EGFK2-A дараалал бүхий өөрчилсөн APT нь kringle 1 домэйнгүй боловч түүнийг бэлтгэх тусгай аргыг харуулаагүй болно. Дээр дурдсан зүйлсээс харахад шинэ бүтээлийн дагуу өөрчлөгдсөн APT нь дотоод бүс дэх амин хүчлийн дарааллаар байгалийн гаралтай APT-ээс ялгаатай байх ёстой. Өргөн хүрээтэй судалгааны үр дүнд өргөдөл гаргагч нь хурууны домэйн, EFR домэйн, kringle 2 домэйн, серин протеаз домэйн агуулсан сайжруулсан APT-г авсан боловч эхний "kringle 1" домэйн тодорхой сайт дээр устгагдсан. мөн домэйныг холбосон хэсэгт крингл 2 ба серин протеазын мутаци нэвтэрч, дулаан, хүчилд тэсвэртэй, биологийн хагас задралын хугацаа мэдэгдэхүйц уртассан, үрэвслийн эсрэг чухал үйл ажиллагаа бүхий APT-ийг сайжруулж, хүссэн шинж чанарыг нь хадгалсан. байгалийн гаралтай хүний ​​APT. Шинэ бүтээл нь сайжруулсан APT-тай холбоотой. Шинэ бүтээлийн дагуу APT нь химийн бүтцээрээ хүний ​​байгалийн гаралтай APT-ээс эрс ялгаатай бөгөөд дээд зэргийн шинж чанартай байдаг. Шинэ бүтээлийн дагуу сайжруулсан APT нь зурагт үзүүлсэн ерөнхий томьёогоор илэрхийлэгдсэн амин хүчлийн дараалал бүхий полипептид юм. 28-29, R нь шууд холбоос, Y нь A-Ile-B (A нь Arg эсвэл Glu, B нь lys эсвэл Ile), илүү тохиромжтой Glu-Jle-Lys. H 2 N нь амин төгсгөлийг, -COOH нь карбоксины төгсгөлийг илэрхийлнэ). Шинэ бүтээлд "сайжруулсан APT" гэсэн нэр томьёо нь APT-ийн аналогийг илэрхийлэхэд ашиглагдаж байгаа бөгөөд A ба B нь доор тайлбарласан амин хүчлүүдийг төлөөлдөг.

Сайжруулсан APT (II): Arg, Lys;

Нарийвчилсан APT (V): Арг, Иле;

Нарийвчилсан APT (VI): Glu, Lys;

Сайжруулсан APT (VIII): Glu, Ile. Шинэ бүтээл нь рекомбинант ДНХ-ийн техникийг ашиглан санал болгож буй APT-ийн аналогийг илэрхийлэхэд чиглэгддэг. Үүнтэй холбоотой нь сайжруулсан APT болон рекомбинант ДНХ-ийн экспрессийн векторуудыг кодлодог шинэ ДНХ-ууд юм. Зураг 1, 2-т сайжруулсан APT (II) кодчилол бүхий синтетик генийн фрагментийг бүтээхэд ашигласан 16 олигодеоксинуклеотидын дарааллыг харуулав; Зураг 3 - 4 - 1 - 2-т үзүүлсэн 16 олигодеоксинуклеотидыг ашиглан бүтээгдсэн Bge 11 ба Eco R1 хязгаарлах ферментийн төгсгөлийг агуулсан шинэ бүтээлийн сайжруулсан APT (II)-ийг бүтээх синтетик генийн фрагмент. ; 5-р зураг - сайжруулсан APT (II) байгуулах арга (зураг дээрх хар хэсэг, сүүдэртэй хэсэг ба сүүдэргүй хэсэг нь тус тусад нь төлөвшсөн APT уураг, пропропептид кодлогч бүс ба орчуулагдаагүй бүс нутгийг кодлодог; 6 - Дидеокси арга ба 7-DEAZA аргыг ашиглан ДНХ суурийн дарааллыг тодорхойлох замаар синтетик генийн блок IV-ийн фрагментийг турших арга Зураг 7 - амьтны эсэд pVY1 экспрессийн векторыг байгуулах арга, генийн интеграцчлал. Сайжруулсан APT-ийн ДНХ-ийг pVY1 болгон хувиргах Зураг 8 - 13 ДНХ-ийн дараалал нь сайжруулсан APT (II) ба сайжруулсан APT (V) Зураг 14 - 19 - ДНХ-ийн дараалалаас гаргаж авсан амин хүчлийн дараалал нь сайжруулсан APT (II) болон сайжруулсан. APT (V); 20-р зураг - Eco R1 ба Bam H1 хуваагдал дахь pBR322 векторт нэгтгэсэн байгалийн APT генийн Eco R1-Xho хэсэг (1000 суурь хос) бүхий pTPA 2 плазмидын хязгаарлах фермент ба функциональ зураг. сайтууд; 21-р зураг - mp9 (сайжруулсан APT (II), генийн BgL11-Xho 11 фрагмент (1500 орчим суурь хос), сайжруулсан APT (II) нь BamH1 задралын хэсэгт давхар судалтай ДНХ M13 mp9-д нэгтгэгдсэн; Зураг. 22 - фибрин орлуулагч байгаа (+Fb) ба байхгүй (-Fb) үед S-2251 аргыг ашиглан сайжруулсан APT (VI) ба байгалийн гаралтай APT-ийн APT үйл ажиллагааны "тунгийн нөлөө" хамаарал; Зураг. 23 - туулайн цусан дахь сайжруулсан APT (VI) ба уугуул APT-ийн идэвхжил цаг хугацааны явцад өөрчлөгдөх Зураг 24 - дулааны боловсруулалтын дараа сайжирсан APT (VI) -ийн үлдэгдэл идэвхжилийн өөрчлөлт Зураг 25 - дарангуйлах. Сайжруулсан APT (VI) -аар лимфоцит идэвхжүүлэх хүчин зүйл (LAF) - Зураг 26 - APT (VI) -аар сайжруулсан денатуржуулсан уураг ашиглан идэвхжүүлэх. 27 - сайжруулсан APT (VI) нөлөөн дор денатурат уургийн задрал. Рекомбинант ДНХ болон хувирсан эсийг олж авах аргыг доор дэлгэрэнгүй тайлбарласан болно. Сайжруулсан APT авах арга. Энэхүү шинэ бүтээлийн APT-ийг гаргаж авсан байгалийн APT-ийг кодлодог ген нь хүний ​​Боусын меланома эсээс бэлтгэсэн cDNA банкнаас тусгаарлагдсан. Поли А+ РНХ нь хүний ​​Bowes меланома эсээс тусгаарлагдсан бөгөөд сахарозын нягтралын градиент центрифугийн аргаар хуваагдсан. Дараа нь бага хэмжээний фракцлагдсан поли(А) + РНХ-ийг сонгож, APT генийг кодлодог мРНХ фракцыг APT mRNA-ийн тодорхой дарааллыг таних чадвартай олигонуклеотидын датчик ашиглан цэгийн эрлийзжүүлэх замаар тодорхойлно. Энэхүү APT мРНХ-ээр баялаг фракцыг эхлэл материал болгон ашиглан дээр дурдсан APT мРНХ таних датчик ашиглан cDNA банк бэлтгэж, шалгана. APT генийн бүрэн дараалалтай нэг ч клон тусгаарлагдаагүй тул алга болсон үндсэн дарааллыг ДНХ синтезатороор нэгтгэж, хүссэн генийг олж авдаг. Хүссэн генийг тухайн талбайд тусгай мутацийн индукцийн аргаар бүтээдэг. Eco R1-Xho 11 фрагмент нь байгалийн жамаараа APT генд (1000 орчим суурь хос) үүсдэг бөгөөд нэг хэсэг нь N = төгсгөлд устгагдаж, Eco R1 ба BamH1 задралын хэсгүүдэд pBR332 векторт нэвтэрч pTPA2 үүснэ. Энэхүү плазмидтай E. coli-г хувиргаснаар олж авсан омог (E. coli HB 101/pTPA2) P-9649 (FERM BP-2107) регистрийн дугаараар Японы Аж үйлдвэрийн шинжлэх ухаан, технологийн агентлагийн Исгэх судалгааны хүрээлэнд хадгалуулсан. pTPA2 плазмидын хязгаарлалт ба функциональ зураглалыг 20-р зурагт үзүүлэв. Сайжруулсан APT генийг pVY1 плазмид оруулна. Плазмид pVY1 нь BamH1-Kpn1 фрагментийг (2900 орчим суурь хос) pRSV10 (Fine Chemicals үйлдвэрлэсэн) плазмидын pAdD26SV (A) N 3 (N) (N)-аас Dr. Токиогийн Их Сургуулийн Ханда (хоёул мохоо төгсгөлд хүлээн авсны дараа. Үүний дагуу энэ вектор нь гол аденовирүсийн хожуу дэмжигч (Ad2)-ийн транскрипцийн хяналтан дор хулганы дигидрофолат редуктазын генийн cDNA-г агуулж байна), SV 40 эхэн дэмжигчийг оруулах талбайн урд талд байна. Шинэ бүтээлийн сайжруулсан APT ген болон генийн доод урсгалд байрлах интрон ба полиаденилацийн дарааллыг өөр тохиромжтой экспрессийн векторт оруулж болно. Трансформаторыг олж авахын тулд экспрессийн векторыг тохиромжтой хост эсэд оруулдаг. Эзэмшигч эсийн хувьд E. coli, Bacillus subtilis гэх мэт прокариот эсүүд, мөөгөнцөр гэх мэт эукариот бичил биетүүд, өндөр амьтдын эсийг ашиглаж болно. E. coli-ийн төлөөлөгчийн хувьд K12 омгийн JM109 омог, W3110, Q гэх мэт омог, харин Bacillus subtilis-ийн төлөөлөгчөөр BD170 омог, BR151 омог гэх мэтийг ашигладаг. Мөөгөнцөрөөс та RH218 омог, SHY1 омог гэх мэтийг ашиглаж болно. мөөгөнцрийн Saccharomyces cerevisiae. Илэрхийллийн хувьд плазмидын вектор эсвэл фагийн векторыг ихэвчлэн ашигладаг бөгөөд үүнд эзэн эстэй нийцтэй зүйлээс гаргаж авсан репликон ба зохицуулалтын дараалал байдаг. E. coli-ийн векторын жишээ бол жишээлбэл, плазмид pBR322, pUC18, pUC19 гэх мэт, фаг, жишээлбэл, qt, Charon 4A гэх мэт, фаг M13 гэх мэт. pUB110-ийг Bacillus subtilis-ийн вектор болгон ашиглаж болно. , pSA2100 гэх мэт, YRp7, YEp61 гэх мэтийг мөөгөнцрийн вектор болгон ашиглаж болно. Вектор нь хүссэн уургийг илэрхийлэх чадвартай дэмжигчтэй байх ёстой. E. coli ген эсвэл фагийн генийг дэмжигч болгон, жишээлбэл, Lae, trp, tac, trc, pL гэх мэтийг ашиглаж болно. Хүрээлэнгийн хувьд rhesus сармагчны бөөрний эс, шумуулын авгалдай эс, Африкийн ногоон сармагчингийн бөөрний эс, хулганы ургийн фибробласт эс, хятад шишүүхэй өндгөвчний эс, хүний ​​ургийн бөөрний эс, эрвээхэйний өндөгний эд эс, хүний ​​умайн хүзүүний хучуур эдтэй төстэй эс зэрэг өсгөвөрлөсөн амьтны эсүүд. ашиглаж болно.эс, хүний ​​миелома эс, хулганы фибробласт гэх мэт. Векторын хувьд та эукариот генээс (жишээ нь, эстрогенээр өдөөгддөг шувууны овальбумин ген, интерферон ген, глюкокортикоидоор өдөөгддөг тирозин аминотрансферазын ген, эрт киназазын ген, тимидин гэх мэт) эукариот генийн промотер агуулсан SV40 эрт дэмжигч, SV40 хожуу дэмжигч, SV40-ийг ашиглаж болно. ба хожуу аденовирүсийн генүүд, фосфоглицератын киназын ген, хүчин зүйлийн ген гэх мэт), үхрийн папиллома вирус эсвэл тэдгээрээс гаралтай векторууд. Нэмж дурдахад эсээс ялгарч, үйлдвэрлэсэн APT нь хуваагдлын талбайн ялгаанаас хамааран өөр өөр N төгсгөлтэй байдаг нь мэдэгдэж байна. Өсгөвөрлөлийн эсийг хост болгон ашиглаж APT ялгаруулж, үйлдвэрлэх тохиолдолд дохионы пептидаз эсвэл протеазын задралын арга нь эсийн төрлөөс хамаарч өөр өөр байдаг тул өөр N-төгсгөлтэй APT төрлийг олж авах боломжтой. Энэ үзэгдэл нь зөвхөн өсгөвөрлөх эсийг ашиглан шүүрэл, үйлдвэрлэлийн хувьд тохиромжтой биш юм, учир нь үүнтэй төстэй үзэгдэл нь E. coli, Bacillus sublitis, мөөгөнцөр болон тусгай өөрчлөлтөд хамрагдсан бусад эсүүдээр дамжуулан APT олж авах үед ч тохиолдож болно гэж үздэг. Сайжруулсан APT гентэй экспресс векторыг ашиглан хост хувиргалт хийхдээ E. coli-ийн хувьд Hanahan, Hanahan, D.J.Mol нарын аргыг ашиглаж болно. Биол., 166, 557, 1983), амьтны эсийг зохицуулах тохиолдолд кальцийн фосфатын аргыг ашиглаж болно (Вандер Эб, А.Ж. ба Грахам, Ф.Л., Энримолологийн арга, 65, 826, 1980, Академик хэвлэл) болон гэх мэт. Дээр дурдсанчлан сайжруулсан APT нь судасны коагуляци (бүр гүн судал), уушигны эмболи, захын артерийн тромбоз, зүрхний болон захын артерийн эмболи, зүрхний цочмог шигдээс, тромботик дайралт зэрэг янз бүрийн олдмол өвчнийг эмчлэхэд тустай. Хүний байгалийн гаралтай APT-ийн нэгэн адил сайжруулсан APT нь зүрхний цочмог шигдээсийн эмчилгээнд ялангуяа тохиромжтой. Хүний байгалийн гаралтай APT нь 1-3 цагийн турш 30-70 мг тунгаар судсаар тарьж хэрэглэхэд титэм артерийн тромбозыг уусгах, миокардийн цусны урсгалыг сэргээх, зүрхний ишемийн үений ихэнх хэсгийг сэргээхэд үр дүнтэй болох нь саяхан батлагдсан. Сайжруулсан APT нь цусан дахь биологийн хагас задралын хугацааг уртасгадаг тул хүний ​​байгалийн гаралтай APT-тай ижил тохиолдолд үр дүнтэй байдаг. Сайжруулсан APT нь хүний ​​байгалийн гаралтай APT-тай ижил төстэй эмнэлзүйн үр нөлөөг хүний ​​байгалийн гаралтай APT-тай санал болгож буй тунгийн 10 орчим хувьтай тэнцэх тунгаар, тэр ч байтугай нэг тунгаар ч бий болгоно гэж үзэж байна. Нэмж дурдахад, энэхүү шинэ бүтээлийн сайжруулсан APT нь уугуул хүний ​​APT-ийн хувьд өнөөг хүртэл тодорхойгүй байсан, өөрчлөгдсөн APT-ийн хувьд дараах үнэ цэнэтэй шинж чанаруудыг харуулж байна. a) Үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагаа. Тромбус үүссэн газарт зөвхөн тромбус үүсэхээс гадна фибриний задралын бүтээгдэхүүн эсвэл ул мөр кинин үүсдэг. Эдгээр бодисууд нь үрэвслийг өдөөдөг тул тромбусны хэсэгт үрэвслийг үүсгэдэг. Энэ шалтгааны улмаас тромбозыг эмчлэхэд ашигладаг бодис нь зөвхөн тромболитик үйлчилгээтэй төдийгүй үрэвслийн эсрэг үйлчилгээтэй байх нь зүйтэй юм. Судалгааны үр дүнд өргөдөл гаргагч нь хоёр функц дээр үндэслэн сайжруулсан APT-д үрэвслийн эсрэг үйлчилгээ үзүүлэх боломжтой болсон. Үүний нэг нь сайжруулсан APT нь үрэвслийн хариу урвалын зуучлагчдын нэг болох интерлейкин 1 (IL-1)-ийн биологийн идэвхийг саатуулдаг. Макрофагаар үүсгэгдсэн IL-1 нь гипертерми, фибробласт өсөлтийг хурдасгах, синовиал эсийн мембран дахь коллагеназын үйлдвэрлэл гэх мэт, эсвэл судасны эндотелийн эсэд простациклины нийлэгжилтийг хурдасгах замаар үрэвслийн хариу урвалд оролцдог гэж үздэг. Мөн IL-1 нь элэгний эсүүдэд үйлчилж, үрэвслийн үед нэмэгддэг цочмог үе шатанд уураг (сийвэнгийн амилоид уураг, фибриноген гэх мэт) нийлэгжилтийг түргэсгэдэг. Өргөдөл гаргагч нь сайжруулсан APT нь IL-1-ийн биологийн үйл ажиллагааны нэг болох хулганы тимоцитын митоген урвалыг нэмэгдүүлэх идэвхийг (LAF идэвхжил) дарангуйлдаг болохыг олж мэдсэн. Өөр нэг үүрэг бол дэвшилтэт APT нь тромбын голомт дахь үрэвслийн үр дүнд үүссэн денатуржуулсан уураг (денатуражуулсан иммуноглобулин G, денатуратжуулсан альбумин гэх мэт) -тэй ойр дотно байх ба цаашлаад энэхүү денатурат уургаар идэвхжих шинж чанартай байдаг. Энэхүү үйл ажиллагааны ачаар сайжруулсан APT нь үрэвслийн хэсэгт зөвхөн денатурат уургийг задалдаг бөгөөд үрэвслийг түр зуур намдааж болно. Өргөдөл гаргагч натрийн додецил сульфатын гель электрофорезоор сайжруулсан APT нь зөвхөн денатуратжуулсан уургийг задалдаг болохыг баталжээ. Зурагт үзүүлсэн шиг. 26-аас үзэхэд денатурат уургаар сайжруулсан APT-ийн идэвхжил, сонгомол байдал илт харагдаж байна. HCl-тэй эмчилсэн иммуноглобулин G, хэд дахин бага концентрацитай үед BrCN-тэй эмчилсэн фибриногентэй ижил үйл ажиллагаа ажиглагдсан. Нөгөөтэйгүүр, хэвийн иммуноглобулин С нь 500 мкг/мл концентрацитай байсан ч сайжруулсан APT-д идэвхжүүлэх нөлөө үзүүлэхгүй. Битүүмжилсэн судсанд цусны урсгалыг сэргээсний дараа дахин бөглөрөхөөс сэргийлнэ. Тромбозыг байгалийн APT-ээр эмчлэхэд бөглөрсөн судас руу цусны урсгалыг сэргээсний дараа дахин бөглөрөл өндөр давтамжтайгаар ажиглагддаг. Энэ шалтгааны улмаас хавсарсан эмчилгээг тромбоцитын дарангуйлагч эсвэл антикоагулянтаар хийдэг. Гэсэн хэдий ч хосолсон эмчилгээ нь эмийн харилцан үйлчлэл, тунг хянах, ижил төстэй нөлөө гэх мэт асуудлуудыг агуулдаг. APT нь өөрөө дахин бөглөрөхөөс урьдчилан сэргийлэх үйл ажиллагаатай байх нь дээр. Энэхүү шинэ бүтээлийн сайжруулсан APT нь хоёр төрлийн үйл ажиллагаагаар дамжуулан дахин бөглөрөхөөс урьдчилан сэргийлэх чадвартай. Эхний төрөл нь удаан хугацааны үйл ажиллагааны улмаас сайжруулсан APT-ийг нэвтрүүлсний дараа APT-ийн концентраци хурдан буурахаас урьдчилан сэргийлэх бөгөөд энэ нь Стюарт-Холмс шинж тэмдгийг арилгахад хүргэдэг бөгөөд ингэснээр дахин бөглөрөл үүсэхээс сэргийлдэг. Хоёрдахь төрөл нь IL-1-ээс үүдэлтэй судасны эндотелийн эсийг гэмтээхээс сэргийлснээр ялтасын бүлэгнэлтийг шууд бусаар дарангуйлж, улмаар дахин бөглөрөхөөс сэргийлдэг. в) Тогтвортой байдал нэмэгдсэн. Уургийн бэлдмэл нь ихэвчлэн тогтворгүй байдаг тул бэлдмэлийг хөлдөөсөн хуурай эсвэл бага температурт уусмал хэлбэрээр хадгалах нь зүйтэй. Цочмог миокардийн шигдээстэй өвчтөнд плазминоген идэвхжүүлэгч хэрэглэх үед нас баралтыг бууруулахын тулд халдлагаас хойш хэдэн цагийн дотор процедурыг хийх шаардлагатай байдаг. Энэ тохиолдолд өрөөний температурт хадгалах боломжтой тогтвортой бэлдмэлийг хэрэглэх нь зүйтэй. Үүнээс гадна тогтвортой байдал нэмэгдсэн нь дулааны боловсруулалт, хүчиллэг эмчилгээ гэх мэтийг зөвшөөрдөг. эм бэлтгэх явцад. Ялангуяа эсийн өсгөвөрт үйлдвэрлэсэн энэхүү шинэ бүтээлийн сайжруулсан APT-ийн хувьд халуунд мэдрэмтгий гэгддэг эсээс гаралтай ретровирусыг устгах боломжтой болсон. Шинэ бүтээлийг жишээнүүдийн дагуу доор тайлбарласан боловч үүгээр хязгаарлагдахгүй. Өөрөөр заагаагүй бол рекомбинант ДНХ-ийг лабораторийн зааврын дагуу үйлдвэрлэдэг. Maniatis T et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, Cold Spring Harbor, New York (1982). Жишээ 1. APT ДНХ-д клон хийх. Bowes хүний ​​меланома эсийг (АНУ-ын Хавдар судлалын үндэсний хүрээлэнгийн доктор Роблин, Р.-аас худалдаж авсан) Опденаккер нарын аргын дагуу өсгөвөрлөв. (Opdenakker, G., et al., Eur. J. Biochem, 131, 481-487 (1983)). APT мРНХ-ийг өдөөхийн тулд өсгөвөрлөх хольцонд TPA (12-О-тетрадеканойлфорбол-13-ацетат) нэмээд 100 нг/мл-ийн эцсийн концентрацид нэмээд 16 цагийн турш өсгөвөрлөв. Дараа нь Freeman нар өөрчилсөн аргын дагуу нийт эсийн РНХ-ийг өсгөвөрлөсөн эсүүдээс гаргаж авсан. ((Окаяма)Берка ДНХ-ийн гарын авлага, 3-р хуудас, 1985, Эмийн сангийн нарийн химийн бодисууд). Олиго-dT целлюлозын багана (Pharmacia Fine Chemicals үйлдвэрлэсэн) ашиглан поли(A) + РНХ нь эсийн нийт РНХ-ээс тусгаарлагдана. Үүний үр дүнд ойролцоогоор 10 o эсээс 400 мкг поли(А) + РНХ авдаг. Энэхүү поли(А) + РНХ-ийг сахарозын нягтралын градиент центрифугийн аргаар уламжлалт аргаар хуваадаг. Бутархай поли(А) + РНХ-ийн нэг хэсгийг сонгон авч цэгэн толбоны эрлийзжилтийг (Perbal, B., Apractical Gube to Molecular Cloninq, 410, 1984, John Wiley and Sons, Inc) APT mRNA-д зориулагдсан олигонуклеотидын датчик ашиглан гүйцэтгэдэг. . Энд ашигласан датчик (датчик Y) нь 5"-GCNNGGCAAAGATGGCA-3" үндсэн дараалалтай бөгөөд энэ нь Pennicaetal-ийн тодорхойлсон APT дараалалд амин хүчлийн үлдэгдлийг +291-ээс +297 хүртэл кодлодог мРНХ-ийн бүсэд нэмэлт үүрэг гүйцэтгэдэг бөгөөд дараах байдлаар нийлэгждэг. ДНХ синтезатор ашиглан -цианофосфамидатын арга, загвар 380A, (Applied Biosystems үйлдвэрлэсэн). ДНХ олигомерын синтез, хамгаалалтыг арилгах, давирхайг задлах, цэвэршүүлэх ажлыг ДНХ синтезаторын Загвар 380А зааварчилгааны дагуу гүйцэтгэдэг. 5" төгсгөлд байрлах Y датчикийн цацрагийн шошгыг лабораторийн гарын авлагын дагуу T4 полинуклеотид киназа (Така-Ра Шузо ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) ба -(32 P) ATP ашиглан хийдэг. Y датчик нь хүчтэй эрлийзждэг. голчлон 20-30S поли(А) + РНХ (энэ фракцыг M фракц гэж нэрлэдэг) Загварыг ашиглан 10 мкг поли(А) + М фракцаас РНХ, урвуу аргаар 3 мкг давхар судалтай cDNA нийлэгдэнэ. транскриптаза (Биохимийн үйлдвэрлэлийн ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) Гублер-Хоффманы аргын дагуу (Гублер, У. ба Хоффман, Б.Ж., Ген 25, 263, 1983) ба 3"-ын хоёр хэлхээтэй cDNA-д нэмсэн. deoxy C хэлхээний төгсгөлийг Denq-Wu аргын дагуу (Denq, G. R. and Wu, R., Nucleic Acids Res., 9, 4173, 1981). Дараа нь деокси С гинжээр сунгасан хоёр судалтай cDNA-г Sepharose CL 4B (Fine Chemicals үйлдвэрлэсэн) дээр гельээр шүүж, 500-аас бага суурь хос агуулсан бага молекул жинтэй нуклейн хүчлийг зайлуулна. Дараа нь cDNA-г уламжлалт арга техникийг ашиглан P st 1 талбайд деокси G хэлхээ агуулсан pBR322 (Bethesda Research-ийн үйлдвэрлэсэн) -ээр баяжуулсан. Бэлэн болсон хольцыг HB101 E. coli-ийн чадварлаг эс болгон хувиргасан (Такара Шузо Ко. , Ltd). Үр дүн нь ойролцоогоор 4000 бие даасан хувиргагчаас бүрдсэн cDNA банк юм. Энэхүү cDNA-г дээр дурдсан Y датчик ашиглан Вүүдсийн аргын дагуу колонийн эрлийзжүүлэлт хийж (Woods, D., Focus, 6 (3), 1, 1984, Bethesda Research Lab.), Y датчиктай урвалд ордог клонуудыг гаргаж авдаг. Клонуудын дотроос хамгийн урт APT cDNA агуулсан pTPA1 клоныг тодорхойлсон. Дараа нь дидеокси аргыг M13 фагийн вектор ба 7-DEAZA аргыг ашиглан (Карлсон, Ж., нар, Ж. Биотехнологи, 1, 253, 1984) гүйцэтгэнэ (Мизусава С., нар, Nucleis Acids. Res., 14, 1319, 1986). Үүний үр дүнд pTPA1 плазмид нь Pennicaetal-ийн тодорхойлсон APT генийн хувьд T y+441-ээс A y+2544 хүртэлх үндсэн дарааллыг агуулдаг болохыг тогтоожээ. Жишээ 2. Сайжруулсан APT (II) загвар. Жишээ 1-д үзүүлсэн pTPA1 плазмидын N-терминал бүс нь сайжруулсан APT (II) байгуулахад хангалтгүй бөгөөд үүнд kringle 1 домэйн байхгүй. Иймд дутагдалтай ДНХ сегментийг дээр дурдсанчлан 380А ДНХ синтезатор (Applied Biosystems үйлдвэрлэсэн) ашиглан нэгтгэдэг. Синтезжүүлсэн олигомерын үндсэн дараалал ба бүрэн нийлэгжсэн дарааллыг Зураг дээр үзүүлэв. 1-4. Эдгээр олигомеруудыг ашиглан сайжруулсан APT (II) бүтээх тусгай арга техникийг Зураг дээр үзүүлэв. 5-6. 2-1). IV блокийн барилгын ажил (Bql II-Eco R1 фрагмент, ойролцоогоор 480 үндсэн хос). Зураг дээрх IV блокийн хэсэг. 5-ыг дараах байдлаар авна. Нэгдүгээрт, лабораторийн гарын авлагын дагуу синтетик олигонуклеотид 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 тус бүр 40 pmol-ийг Зураг дээр үзүүлэв. 1-2-ыг 10 нэгж T4 полинуклеотид киназаар (Такара Шузо ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) 37°C-т нэг цагийн турш тус бүр 50 мкл-ийн урвалын уусмалд фосфоржуулсан. Урвалын уусмалыг фенолоор эмчилнэ. Этанолоор тунадас оруулсны дараа тунадасыг даралтын дор хатааж, ариутгасан нэрмэл усанд уусгана. 6 мМ Tris-HCl (рН 7.5), 20 мМ NaCl, 7 мМ MgCl 2, 0.1 мм EDTA агуулсан 150 мкл уусмалд олигомер тус бүрээс 40 пмоль тунгасны дараа 80 oС-ийн температурт 5 минут, температурт. 60 хэмд 5 минут, тасалгааны температурт нэг цагийн турш I блок (олигомер 1, 2, 3, 4), II блок (олигомер 5, 6, 7, 8, 9, 10) болон блокийн харгалзах блокуудад. III (олигомерууд 11, 12, 13, 14, 15, 16) нь этанолын тунадасжилт, бууруулсан даралтын дор хатаах ажлыг гүйцэтгэдэг. Үлдэгдлийг 40 мкл ариутгасан нэрмэл усанд уусгана. Урвалыг 400 мкл урвалын уусмалд 4°С-т 15 цагийн турш ДНХ холбогч иж бүрдэл (Такара Шузо ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) ашиглан хийсэн. Этанолоор тунадас оруулж, даралтын дор хатаасны дараа тунадасыг ариутгасан нэрмэл усаар уусгана: блок I (1) тохиолдолд гель электрофорезыг 5% полиакриламид (лабораторийн гарын авлага) -д хийж, уламжлалт аргаар салгаж, цэвэршүүлнэ. (лабораторийн гарын авлага), 100 орчим суурь хос фрагмент, II (2) ба III блок (3) тохиолдолд гель электрофорезыг 3% агароз гель (LMP агароз, BRL үйлдвэрлэсэн) (лабораторийн гарын авлага) -д хийдэг. ) ба 190 орчим хосын хэлтэрхийг цахилгаанаар шүүрүүлэн (лабораторийн гарын авлага) тусгаарлаж цэвэршүүлсэн. Дараа нь 0.1 мкг, 0.2 мкг, 0.2 мкг блок I, II блок, III блокийн хэсгүүдийг дээрх ДНХ холбох хэрэгсэл ашиглан холбосон. 480 орчим суурь хос хэмжээтэй Bgl II-Eco R1 фрагментийг (IV блок) тусгаарлахын тулд гель электрофорезыг агарозын 1.5% -ийн концентрацид хийнэ. Дараа нь ДНХ-ийг агароз гельээс цахилгаан уусмалаар тусгаарлана. Дараа нь энэ ДНХ-г 100 мкл урвалын уусмалд 37°С-т фосфоржуулж, дээр дурдсан T4 полинуклеотидын киназын 10 нэгжийг ашиглан нэг цагийн турш фенолоор эмчилж, этилийн спиртээр тунадасжуулж, даралтын дор хатаана. Энэхүү синтетик генийн фрагмент ба IV блокийн суурийн дарааллыг M13 фагийн векторыг ашиглан дидеокси аргын дагуу үндсэн дарааллыг тодорхойлох замаар баталгаажуулна. Тодорхой техникийг Зураг дээр үзүүлэв. 6. Дээр тайлбарласан IV блокийн Bgl II-Eco R1 фрагментийг M13 mp18 ДНХ (Boehringer Mannheim-Yamanouchi Co., Ltd. үйлдвэрлэсэн) БамН1 (Боehringer Co., Yamanouchi үйлдвэрлэсэн) хязгаарлалтын ферментээр шингээж авсны дараа. .) болон Eco R1 (Boehringer Mannheim-Yamanouchi Co., Ltd. үйлдвэрлэсэн) нь M13 дарааллын иж бүрдэл (Тарака Шузо К., Ltd. үйлдвэрлэсэн) болон 7-DEAZA дарааллын иж бүрдэл (Такара Шузо үйлдвэрлэсэн) ашиглан үндсэн дарааллыг тодорхойлно. Ltd. Co.). Bgl11 хязгаарлалтын ферментийн задралын талбай болон BamH1 хязгаарлалтын ферментийн хуваагдлын талбайг (BamH1-Bgl11 задралын төгсгөлийн хэсэг) дамжуулан изошизомерын зохион байгуулалттайгаар холбодог бөгөөд холбосон фрагментийг байгалийн хязгаарлах ферментийн Xho 11-ээр задалж болно. 11 ба Bamh1-ийн хуваагдал нь тус тусад нь дуусдаг. Үндсэн дарааллыг илүү нарийвчлалтай тодорхойлохын тулд E.cjli омог JM109 нь Messing/Messing J. аргын дагуу, Methods in Enzymology, 101, 20-78 (1983)-ийн дагуу M 13mp18 фагийн (IV блокийн фрагментийг оруулаад) халдварладаг. )), үүний дараа давхар судалтай ДНХ-ийг олж авдаг (репликатив төрөл). Энэхүү ДНХ-г (50 мкг) Xho 11 (Boehringer Mannheim-Yamanouchi Co-ийн үйлдвэрлэсэн) болон Eco R1 хязгаарлалтын ферментүүдээр шингээж авсны дараа гель электрофорезыг 1.5% агароз гель дээр хийж, 480 орчим суурьтай фрагментийг (IV блок) тусгаарласан. хосууд. Энэ ДНХ-г цахилгаанаар шингэлэх замаар гаргаж авдаг. Хандаж авсан ДНХ-г M13mp19 (Boehringer Mannheim-Yamanouchi Co., Ltd-ийн үйлдвэрлэсэн) Eco R1 болон BamH1 хязгаарлалтын ферментээр задалсан ДНХ-г дээр дурдсантай ижил аргаар холбосны дараа үндсэн дарааллыг ДНХ холбогч иж бүрдэл ашиглан тодорхойлсон. Дээр дурдсанчлан энэ дарааллыг M13mP18 ба M13mp19 ашиглан ДНХ-ийн дарааллаар илүү нарийвчлалтай шалгаж болно. Үүнээс гадна тайлбарласан аргаар M13mp19 давхар судалтай репликатив ДНХ (IV блоктой) бэлтгэсэн. Энэхүү ДНХ-г (50 мкг) Eco R1 ба Xho 11 хязгаарлалтын ферментүүдээр шингээж авсны дараа гель электрофорезыг 1.5% агарозд хийж, 480 орчим суурь хос хэмжээтэй фрагментийг (IV блок) тусгаарлана. 2-2). V блокийн тусгаарлалт (Eco R1-Bal1 фрагмент, ойролцоогоор 1250 үндсэн хос). Жишээ 1-д олж авсан pTRA1 клоноос плазмидын ДНХ-ийг лабораторийн гарын авлагад заасан аргын дагуу их хэмжээгээр ялгаж авсан. 5. Энэхүү ДНХ-ийн 70 мкг-г хязгаарлах ферментүүдтэй Bal1 (Такара Шузо ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) болон Нар1 (Nirro Gen Co., Ltd. үйлдвэрлэсэн) шингээж авсны дараа электрофорезыг 0.8% агароз гель, тусгаарлах аргаар хийнэ. Nar1-Bal1 фрагмент (ойролцоогоор 1540 үндсэн хос). ДНХ-ийг цахилгаанаар шингэлэх замаар тусгаарладаг. Энэхүү ДНХ-ийг Эко R1 хязгаарлах ферментээр хэсэгчлэн задруулсны дараа 0.7% агароз гель дээр электрофорез хийж, Eco R1-Bal1 фрагментийг (1250 суурь хос) тусгаарлана. ДНХ-ийг цахилгаанаар шингэлэх замаар тусгаарладаг. 2-3). IV блок ба V блокоос сайжруулсан APT генийг (II) бүтээх. Зураг дээр үзүүлэв. 5, сайжруулсан APT генийг дараах байдлаар авна. Дээр дурдсан ДНХ-ийн допингийн иж бүрдлийг ашиглан жишээ 2-2-т авсан V блоктой (Эко R1-Bal1 фрагмент, 1250 bp орчим) жишээ 2-1-д авсан IV блок (Bgl11-Eco R1 фрагмент, ойролцоогоор 480 bp) допингийн дараа, нэмэлт бодис агуулсан бүтээгдэхүүн нь этанолын тунадасжилтад өртдөг. Бага даралтын дор хатаасны дараа тунадасыг ердийн аргаар хязгаарлах фермент Xho 11-ээр шингээж авдаг. Дараа нь Bgl 11-Xho 11 фрагментийг тусгаарлахын тулд электрофорезыг 0.8% агароз гельд хийнэ (ойролцоогоор 1500 суурь хос, APT сайжруулсан генийг агуулдаг). Дараа нь ДНХ-ийг цахилгаан шингэрүүлэх замаар тусгаарлана. Энэ аргаар олж авсан сайжруулсан APT генийн (II) бүрэн үндсэн дарааллыг Зураг дээр үзүүлэв. 8-13. Үүсгэсэн амин хүчлийн дарааллыг мөн Зураг дээр үзүүлэв. 14-19. Жишээ 3. Сайжруулсан APT V, VI, VIII генийн бүтэц. Сайжруулсан APT генийн V, VI эсвэл VIII-ийн бүтээн байгуулалтыг сайжруулсан APT ген (II) дээр үндэслэн дараах хэвлэлд иш татсан болно. Генетикийн хувиргалт нь тухайн талбайд тусгай мутацийг өдөөх замаар хийгддэг. Хэвлэлүүд: Золлер М.Ж. ба Смит.М., Ферментологийн арга, 100, хуудас 468-500 (1983), Золлер М.Ж. ба Смит. M. DNA, 3, pp. 479-488 (1984), Morinaga Y. et al. Biotechnology, pp. 636-630 (7-р сар 1984), Adelman J. P. et al., DNA, 2, pp. 183-193 (1983) ), 6. Gene Science Room Co., Ltd.-ээс хэвлэсэн M13 дарааллын гарын авлага (puC). 3-1). Сайжруулсан APT генийг бүтээх (V). A) Мутацид M13mp19 (APT/P/) үүсгэсэн. Жишээ 2, 2-3-т дэлгэрэнгүй тайлбарласан сайжруулсан APT генийн фрагментийг (II) BamH1 хязгаарлах фермент болон шүлтлэг фосфатазаар (Такара Шузо ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) боловсруулсан M13mp9 давхар судалтай ДНХ-тэй холбосон. Холбох бүтээгдэхүүнийг E. cjli JM109 эрх бүхий эсүүдэд (Takara Shuzo Co., Ltd. үйлдвэрлэсэн) шилжүүлэв. Өнгөгүй, ариутгасан толбо үүсгэдэг клон бүрийг E. Coli JM109-ийг халдварлахад ашигладаг. Нэг судалтай ДНХ нь өсгөвөрийн супернатантаас, хоёр хэлхээтэй (репликатив) ДНХ-ийг Messing аргын дагуу E. cli эсүүдээс тусгаарладаг (Ж.Мессинг, Methods in Enzymology, 101, pp. 20-78, 1983). ). Эдгээр давхар судалтай ДНХ-ийн мөн чанарыг шинжилснээр агароз гель электрофорезийн аргаар Pst1 хязгаарлах ферментээр задаргаа хийсний дараа mp9 клоныг (сайжруулсан APT(II)) гаргаж авах ба үүнд APT(II) генийг mp9 ДНХ-д оруулна. 21-р зурагт үзүүлсэн шиг хүссэн чиглэл. Эдгээр ДНХ-ийн хэсгийг Pst хязгаарлах ферментээр задласны дараа 0.8%-ийн агароз гель дээр электрофорез хийж, mp9 клон (сайжруулсан APT (II) нь 7300 байрлал дахь энгийн туузыг харуулж байна. bp, 840 bp, 430 bp болон 80 bp, ойролцоогоор. Энэ клоны нэг судалтай ДНХ-ийг дараагийн туршилтанд тухайн талбайд өвөрмөц мутацийг өдөөхөд ашигладаг. B) Тухайн газрын өвөрмөц мутацийг өдөөх чадвартай праймерын нийлэгжилт. Сайжруулсан APT (II) генийн өвөрмөц мутацийг өдөөдөг синтетик олигонуклеотидыг загвар 380 А ДНХ синтезатор (Applied Biosystems үйлдвэрлэдэг) ашиглан α-цианоэтил фосфоамидатын аргаар нийлэгжүүлдэг. ДНХ олигомерын нийлэгжилт, хамгаалалтын бүлгийг зайлуулах, давирхайгаас салгах, цэвэршүүлэх ажлыг ДНХ синтезатор 380 А-ийн ашиглалтын зааврын дагуу гүйцэтгэдэг. Тодорхой газар дээр мутац үүсгэхийн тулд праймер (1) М13 фагийн векторыг ашиглан дидеокси дараалал тогтоохын тулд тухайн талбайн өвөрмөц мутацийг өдөөж, праймер (2) авдаг (J. Carlson et al., Journal of Biotechnology, 1, p. 253, 1984). Сайжруулсан APT (II)-ийн амин хүчил ба нуклеотидын дарааллыг өгсөн болно. Мутаци үүсгэх чадвартай праймер (1) нь сайжруулсан APT (II)-ийн генийн дарааллаас доогуур зураасан суурьтай ялгаатай (Хүснэгт 1-ийг үз). C) Талбайн өвөрмөц мутацийг өдөөх. Мутаци үүсгэх чадвартай праймерын (1) үндсэн дараалал, тухайлбал сайжруулсан APT ген (IV) агуулсан клон үүсгэх аргыг доор харуулав. Жишээ 3.3-1-д тайлбарласан нэг судалтай ДНХ-ийн нөхөн төлжилтийн (ренатураци) дараа, A) клон mp9 (сайжруулсан APT (II) ба праймер (1)) нөхөн сэргээх бүтээгдэхүүн нь хоёр судалтай ДНХ болж хувирдаг. E. coli JM109. Дараа нь дараалал тогтоох праймерыг ашиглан ДНХ-ийн дарааллыг шалгаж, мутацид орсон сайжруулсан APT ген (II), тухайлбал сайжруулсан APT ген (V) агуулсан фагийн клоныг тусгаарлаж, давхар судалтай (репликатив) фагийн ДНХ-ийг гаргаж авдаг. Энэ клон болон сайжруулсан APT ген (V) нь нийлэг олигомерын 5"-терминал фосфоржилтоос тусгаарлагдаж байна. ДНХ-ийн праймер (1)-ийг жишээ 2.2-1-д тайлбарласан аргаар фосфоржуулна. Гетеродуплекс бэлтгэх DHE. 0.5 мкг нэг судалтай ДНХ M13mp9 (сайжруулсан APT (II )) ба 1.5 мкг хоёр судалтай ДНХ M13mp9, хязгаарлалтын фермент BamH1-ийг 2 пмол фосфоржуулсан (праймержуулсан) агуулсан 30 мкг уусмалд халаана. 10 мМ Tris-HCl (рН 7.5), 0.1 мМ EDTA ба 50 мМ NaCl, 90 ° C (2 мин), 50 ° C (5 мин), 37 ° C (5 мин) болон өрөөний температурт (10 мин) . Уусмалд 4 нэгж Кленов фермент, 7 нэгж Т4 фагийн ДНХ-ийн лигаза, 0.1 мМ EDTA, 12 мМ MgCl 2, 10 мМ олм, 10 мМ олм0ТП агуулсан 36 мкл 50 мм Tris-HCl уусмал (рН 8.0) нэмнэ. 0.07 dATP ба 0.2 мМ dGTP, dTTP, dCTP тус бүр нь праймерын суналтыг идэвхжүүлдэг. Хольцыг 20оС-ийн температурт 2 цаг, 4оС-ийн температурт 15 цагийн турш урвалд оруулна. Трансформацийг дээр дурдсан уусмал болон чадварлаг E. coli JM109 эсүүд (Такара Шузо ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) ашиглан задралын толбо үүсэх хүртэл гүйцэтгэдэг. Өнгөгүй толбыг салгасны дараа фаг нь үржихийн тулд E. coli JN109-ээр халдварладаг. Загварын нэг хэлхээтэй ДНХ-ийг дараа нь клон тус бүрийн өсгөвөрийн супернатантаас гаргаж авдаг. Эдгээр нэг судалтай ДНХ-д зөвхөн дидеокси аргын "T" урвалд (Жишээ 3-2-т "А" ба "Т" урвал) ордог бөгөөд дараа нь полиакриламидын гель электрофорез хийдэг. Хатаасны дараа гель нь авторадиографаар шинжлэгддэг. Үр дүнд үндэслэн хүссэн мутант дараалалтай клоныг тодорхойлно. Клоны өсгөвөрийн супернатантыг E. coli JM109 эсийг халдварлахад ашигладаг бөгөөд нэг цэгийг тусгаарлахын тулд хавтан дээр дахин тарьдаг. Үүссэн нэг цэгээс нэг судалтай ДНХ-ийг дээрх аргын дагуу тусгаарлана. Эдгээр ДНХ-г ашиглан эхлээд ДНХ-ийн үндсэн дарааллыг дидеокси аргаар тодорхойлж, дарааллын праймер (2) ашиглан хүссэн суурь дараалалд хувирсан клоныг олж авна. Энэ фагийн клоныг 2-р жишээнд тайлбарласан Мессингийн аргыг ашиглан JM-109 E. coli эсээр халдварлуулсны дараа хоёр хэлхээтэй ДНХ-г авна. Энэхүү хоёр судалтай ДНХ нь хязгаарлах ферментийн тусламжтайгаар задардаг Xho 11, электрофорезыг 0.8% агароз гель дотор хийж, фрагментийг (сайжруулсан APT генийг агуулсан 1500 суурь хосоос бүрдсэн сайжруулсан APT ген (V). Дараа нь ДНХ) Үүнээс гадна дидеокси аргыг ашиглан ДНХ нь сайжруулсан APT(V) ген болох нь тогтоогдсон ДНХ-ийн үндсэн дарааллыг тогтооно. ) генийг (гэхдээ -35-аас -1 дохионы пептид агуулсан) 11 - 13-т үзүүлэв. Үүнээс гаргаж авсан амин хүчлийн дарааллыг мөн 17 - 19-д үзүүлэв. 3-2) Сайжруулсан APT (VI) байгуулах. ) ба (VIII). Техникүүд нь жишээ 3, 3-1) дээр дурдсантай төстэй. Эхлээд M13mp3 (сайжруулсан APT (II)) бүтээгдэж, дараа нь тухайн талбайд тусгай мутац үүсгэхийн тулд праймеруудыг нэгтгэдэг. Эдгээр праймеруудын үндсэн дарааллыг дээр тайлбарласан боловч сайжруулсан APT ген (VI) ба сайжруулсан APT ген (VIII), 5" төгсгөлтэй фосфоржуулсан праймер (3) ба 5" төгсгөлтэй фосфоржуулсан праймер (5) -ийг бүтээхэд зориулагдсан болно. ) тус тус ашигладаг (харна уу ширээ 2). Талбайн өвөрмөц мутацийг үүсгэсний дараа үндсэн дарааллыг дидеокси аргаар тодорхойлно. Тэд хүссэн үндсэн дараалалтай болох нь батлагдсан. Тиймээс сайжруулсан APT (VI) болон сайжруулсан APT (VIII) генийг олж авдаг. Дараа нь эдгээр генүүдийг жишээ 4 ба 5-д тайлбарласан журмын дагуу pVY1 векторт нэгтгэнэ. Жишээ 4. Сайжруулсан APT генийг (II) pVY1 векторт нэгтгэх. 4-1) pVY1 векторыг бүтээх. pVY1 векторыг зурагт үзүүлсэн шиг бэлтгэсэн. 7. A) pAdD26SV (A) N3 (N) барих ба Эко R1 хагарлын талбайг мохоо төгсгөлтэй болгох. Нэгдүгээрт, ДНХ pAdD26SV(A) N3 (Токиогийн Их Сургуулийн доктор Хироши Хандагаас худалдаж авсан, Mo1, Ce 11. Biol, 2 (11, (1982))-ийн хураангуйгаас мэдэгдэж байгаа) Bgl11 (үйлдвэрлэсэн) хязгаарлалтын ферментээр задалдаг. Boehringer Mannheim-Yamanouchi Co., Ltd.) уламжлалт аргаар. Дараа нь ДНХ-ийг уламжлалт аргаар Кленов ферментийг (Boehringer Mannheim-Yamanouchi Co., Ltd. үйлдвэрлэсэн) ашиглан фенолоор боловсруулсны дараа тунадасжуулна. этанол болон бууруулсан даралтын дор хатаах, тунадасыг ариутгасан нэрмэл усанд уусгана.Цахин холбосны дараа чадварлаг HB101 E. coli эсийг (Takra Shuzo Co. Ltd. үйлдвэрлэсэн) урвалын хольцоор хувиргана.Пласмидын ДНХ-г хувиргагчаас бэлддэг. ердийн аргаар тетрациклины эсэргүүцэл Эдгээр ДНХ-ийн зарим хэсгийг хязгаарлах фермент BgL 1-ээр задласны дараа электрофорезыг 0.7% - агарозоор явуулна. Үр дүн нь хязгаарлалтын фермент BgL 11-т хуваагдаагүй ДНХ агуулсан клон юм. Энэхүү клоны ДНХ-г Eco R1 хязгаарлах ферментийн тусламжтайгаар уламжлалт аргаар задлах (pAdD26SV(A) N3 (N)) бол дээр дурдсанчлан ДНХ-ийг Кленов ферментийг ашиглан мохоо төгсгөлтэй болгодог. Фенолоор боловсруулж, этилийн спиртээр тунадасжуулж, бууруулсан даралтын дор хатаасны дараа тунадасыг нэрмэл ариутгасан усанд уусгана. B) pKSV10-аас Kpn 1-BamH1 хэлтэрхий (ойролцоогоор 2900 bp) тусгаарлаж, мохоо төгсгөлүүд үүсэх. pKSV10 ДНХ (Fine Chemicals үйлдвэрлэсэн) уламжлалт аргаар Kpn1 ба BamH1 хязгаарлах ферментүүдээр шингэсний дараа ДНХ нь T4 ДНХ полимераза ашиглан мохоо төгсгөлтэй байна (лабораторийн гарын авлага, хуудас 114 - 121). Дараа нь 2900 суурь хос хэмжээтэй фрагментийг тусгаарлахын тулд электрофорезыг 0.7% агароз гельд хийнэ. Дараа нь фрагментийг цахилгаанаар шүүж, ДНХ-г гаргаж авдаг

C) pVY1-ийн бүтээн байгуулалт. A)-д авсан ДНХ-ийн фрагмент ба В-д авсан ДНХ-ийн фрагментийг холбосны дараа чадварлаг E. coli HB101 эсийг (дээр тайлбарласан) хувиргах ажлыг гүйцэтгэдэг. Плазмид ДНХ-ийг уламжлалт аргаар тетрациклинд тэсвэртэй трансформантуудаас гаргаж авдаг. Эдгээр плазмидын ДНХ-ийн нэг хэсгийг хязгаарлах фермент Pst1 (Boehringer Mannheim-Yamanouchi Co., Ltd үйлдвэрлэсэн) -ээр шингээсний дараа 1.0% агароз гель дээр электрофорез хийсэн. Үүний үр дүнд клон (плазмид pVY1) нь ойролцоогоор 3400 үндсэн хос, 3200 орчим суурь хос, 1400 үндсэн хосоос бүрдсэн туузаар тодорхойлогддог. Энэхүү E/coli клон HB101 (pVY1 нь Японы Аж үйлдвэрийн шинжлэх ухаан, технологийн агентлагийн Исгэх судалгааны хүрээлэнд P-9625 (FEPM BP 2106) бүртгэлийн дугаараар хадгалагдсан. 4-2) Сайжруулсан APT генийг нэгтгэх (II) ) pVY1 вектор руу оруулна. Жишээ 4-1-д олж авсан pVY1 плазмидын ДНХ-ийг BgL 11 хязгаарлах ферментээр ердийн аргаар задруулсны дараа шүлтлэг фосфатазыг (Такара Шузо. Ко. ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) ашиглан фосфоргүйжүүлэх ажлыг гүйцэтгэсэн. Дараа нь фенолын эмчилгээг гурван удаа хийнэ. Этанолоор тунадасжуулж, бага даралтын дор хатаасны дараа тунадасыг ариутгасан нэрмэл усанд уусгана. Энэ ДНХ-г жишээ 3, 3-1-д авсан BgL фрагмент 11-Xho 11 (1500 орчим суурь хос)-тай холбосны дараа HB101 чадвартай E. coli эсийг дээр дурдсан аргын дагуу холбосон бүтээгдэхүүнээр хувиргасан. Плазмид ДНХ-ийг тетрациклинд тэсвэртэй хувиргагчаас уламжлалт аргаар бэлтгэдэг. Эдгээр ДНХ-ийг хязгаарлах ферментээр (BqL 11, Pst 1) задаргаа хийсний дараа шаардлагатай чиглэлд нэгтгэсэн pVY1 вектор дахь сайжруулсан APT ген (II) бүхий клоныг сонгож, шинжилгээнд үндэслэн сонголтоо хийдэг. агароз гель электрофорезийн загвар. Нэгдүгээрт, эдгээр ДНХ-ийн нэг хэсгийг хязгаарлах ферментийн BqL 11-ээр задалж, дараа нь 0.8% агароз гель дээр электрофорез хийж, BqL 11-Xho 11 фрагментийг BqL-тэй холбосноор 1500 орчим bp фрагментийн зурвас бүхий клоныг олж авдаг. фрагмент 11 плазмидын pVY1, Xho 11 ба BqL 11-ийн холбосон хэсгийг BqL 11 хязгаарлалтын ферментээр таслах боломжтой. Эдгээр клонуудын плазмидын ДНХ-ийн нэг хэсэг нь Pst1 хязгаарлалтын ферментээр шингэж, ДНХ-ийг электрофорез хийдэг. 0.8% агароз гель дээр нэг туузны хэмжээ 3400 bp орчим, хоёр зурвас 2300 орчим bp, нэг зурвас ойролцоогоор 1400 bp, нэг тууз 80 орчим bp хэмжээтэй клоныг олж авна. Энэхүү клоныг ашиглан (лабораторийн гарын авлагын дагуу плазмидын pVY1-APT (II) плазмидын ДНХ-ийг авдаг. Жишээ 5. Сайжруулсан APT (V), (VI) ба (VIII) генийг pVY1 векторт нэгтгэх. Хагарсаны дараа. Жишээ 4-1-д олж авсан pVY1 плазмидын ДНХ), хязгаарлах фермент BqL 11-ийн фосфоргүйжүүлэлтийг шүлтлэг фосфатаза (Такара Шузо ХХК-ийн үйлдвэрлэсэн) ашиглан уламжлалт аргаар хийж, дараа нь 3 удаа эмчилсэн. фенол, этилийн спиртээр тунадасжуулах, бууруулсан даралтын дор хатаах. Дараа нь тунадасыг ариутгасан нэрмэл усанд уусгана. Энэ ДНХ-г 2, 2-3-р жишээнд авсан 1500 орчим суурь хос хэмжээтэй BqLII-Xho 11 хэлтэрхийтэй холбосны дараа холбосон бүтээгдэхүүн нь дээр дурдсан HB101 E. coli эсүүд болон хувирна. Плазмид ДНХ-ийг уламжлалт аргын дагуу тетрациклинд тэсвэртэй трансформаторуудаас бэлтгэдэг. Эдгээр ДНХ-ийг BqL11 ба Pstl хязгаарлах ферментүүдээр шингээж авсны дараа агароз гель электрофорез хийдэг. Агароз гель дэх тусгаарлах хэв маягт дүн шинжилгээ хийснээр сайжруулсан APT (V) генийг pVYI векторт хүссэн чиглэлд оруулах клонуудыг сонгоно. Нэгдүгээрт, эдгээр ДНХ-ийн заримыг BqL11 хязгаарлах ферментээр шингээж авсны дараа клоныг авахын тулд 0.8% агароз гель дээр электрофорез хийж, 1500 орчим суурь хосын туузыг олж авдаг. BqL11-Xholl фрагментийг pVYI векторын BqL11 фрагменттэй холбох үед дээр дурдсан изошизомерын тохиргооны улмаас Xholl болон BqL11 хэсгийг BqL11 хязгаарлалтын ферментээр салгаж болно. Эдгээр клонуудын плазмын ДНХ-ийн тодорхой хэсгийг Pstl хязгаарлах ферментээр задруулсны дараа электрофорезыг 0.8% -ийн агароз гелийн концентрацид хийж, 3400 орчим bp, 2300 орчим bp тууз бүхий клоныг гаргаж авдаг. 1400 орчим bp-ийн хоёр зурвас, 800 орчим bp-ийн нэг зурвас, 80 орчим bp-ийн нэг зурвас. Клон (плазмид pVYI-APT (V)) ашиглан плазмидын ДНХ-ийг лабораторийн гарын авлагад үндэслэн их хэмжээгээр авдаг. Үүний нэгэн адил сайжруулсан APT (VI) ба (VIII) генүүд нь pVYI векторт нэгтгэгддэг. Жишээ 6 CHO эсүүд дэх дэвшилтэт APT-ийн илэрхийлэл. Плазмид pVYI - сайжруулсан APT (VI), APT (II), APT (V) эсвэл APT (VIII) нь DHFR-ийн дутагдалтай CHO эсүүдэд шилждэг (Urlaub, et al., Proc. Natl., Acad. Sci. USA, 77). (7 ), 4216-4224, 1980) кальцийн фосфатын аргаар (Graham, et al. , Вирусологи, 52, 456, 1973). Метотрексат (MTX) байлцуулан сонгомол орчин (MEM A LPHA (-), GIBCO) дээр олж авсан хувиргагч клон нь 50-100 нэгж/мл APT-ийн идэвхийг харуулсан (утга нь тодорхойлсон фибрин/агарозын хавтангийн аргаар тодорхойлогддог) доор). Энэ клоныг дараагийн судалгаанд ашигладаг. Үйлдвэрлэлийн орчин нь 20 олон улсын нэгж/мл (SIGMA) апротинин агуулсан GIT орчин (Huaco Pure Chemical Industry Co., Ltd. үйлдвэрлэсэн) юм. Жишээ 7. Сайжруулсан APT-ийг CHO эсийн өсгөвөрийн супернатантаас цэвэршүүлэх. Жишээ 6-д олж авсан өсгөвөрийн супернатантыг APT-ийн эсрэг моноклональ эсрэгбиеийн хамаарлын багана ашиглан хэсэгчлэн цэвэршүүлсэн. Моноклональ эсрэгбие үүсгэдэг эрлийзийг уламжлалт аргаар хүний ​​меланома эсээс гаралтай APT-д зориулж бэлтгэдэг. Эсрэгбие үүсгэгч эрлийзийг хулганад тарьж, асцитын дотор үүссэн моноклональ эсрэгбиемийг (дэд анги: IgGM1) гарган авч, Cellulophin Protein A (Biochemical Industry Co., Ltd. үйлдвэрлэсэн) болон MAPS моноклональ эсрэгбиеийн цэвэршүүлэх системийг ашиглан цэвэршүүлдэг. Биорад лаборатори. Эсрэгбие нь уламжлалт аргаар 1 мл гель тутамд 4 мг-аар CN3r идэвхжсэн Sepharose (Pharmacia Fine Chemicals үйлдвэрлэсэн) -тэй хавсардаг. Эсрэгбиеийн гель (24 мл) дөрвөн литр өсгөвөрт шингэсэн бодистой холилдоно. Шөнийн турш 4 хэмд зөөлөн сэгсэрсний дараа гелийг баганад (диаметр нь 1.5 см х 20 см) хийнэ. Дараа нь гель нь 25 олон улсын нэгж/мл апротин (SIGMA үйлдвэрлэсэн) ба 0.01% (w/v) Tween 80 агуулсан рН 7.4 Tris-HCl буфер (1) рН 7.4 (буфер А) тус бүрээр 125 мл-ээр гельийг дараалан угаана. , (2) 0.5 M NaCl агуулсан буфер А, (3) 4 М мочевин агуулсан буфер А, (4) А буфер. Дэвшилтэт гельтэй APT-ийг 0.2 М глицин-HCl рН 2 буферээр цэвэрлэв. 5 олон улсын 25 агуулсан. нэгж/мл апротинин ба 0.01% (w/v) Tween 80. Идэвхтэй фракцуудыг багасгаж, нэгтгэдэг. 25 олон улсын нэгж/мл апротин ба 0.01% (w/v) Tween 80 агуулсан 10 мМ Tris-HCl буфер, рН 7.4-ийн эсрэг диализ хийсний дараа диализатыг вакуум төвөөс зугтах баяжмалаар 20-30 удаа баяжуулна (Үйлдвэрлэлийн хурд). SAVANT Inc.). Баяжмалыг нэг шөнийн дотор 0.15 М NaCl, 25 олон улсын нэгж/мл апротинин, 0.01% (х/х) Tween 80 агуулсан рН 7.4, 10 мМ Tris-HCl буферийн эсрэг дахин диализ хийж, дараагийн in vitro болон in vivo үнэлгээнд хэрэглэнэ. . Эцэст нь, өвөрмөц үйл ажиллагаа 3700-5000 дахин нэмэгдэж, гарц нь APT-ийн идэвхжилийн 36-42% (фибрин/агарозын хавтангийн аргаар тодорхойлогддог) байна. Энэхүү идэвхтэй фракцыг натрийн додецил сульфатын электрофорез болон мөнгөн будгаар шинжилдэг. Бууруулах нөхцөлд бусад хэд хэдэн хамтлагуудын хамт 54 килодалтонд маш хүчтэй зурвас ажиглагдаж байна. Дараа нь электрофорезийн гелийг 2.5% (w/v) Triton X-100-ээр эмчилж, фибрин/агарозын хавтан дээр байрлуулж, 37°С-т фибринд гарын үсэг зурж, ууссан туузыг 50 килодалтоноор илрүүлнэ. Нэг хавтан дээр байгалийн APT нь ойролцоогоор 60 килодалтонд илэрдэг. Үр дүн нь эсрэгбиеийн наалдамхай баганад шингэж, энэ аргаар ялгаруулсан APT нь байгалийн гаралтай төрлийн молекулын жингээс ойролцоогоор 10,000-аар бага молекул жинтэй сайжруулсан APT-тай тохирч байгааг харуулж байна. Жишээ 8. Сайжруулсан APT-ийн тодорхой үйл ажиллагааны хэмжилт. Хэсэгчилсэн цэвэршүүлсэн дэвшилтэт APT дахь уургийн хэмжээг Брэдфордын аргын дагуу (Bradford, Anal. Bochem., 72, 248 (1976)), үхрийн сийвэнгийн альбуминыг жишиг уураг болгон ашиглан нийт уургийн хэмжээг тодорхойлно. APT эсрэгтөрөгчийн хэмжээг фермент холбоот дархлааны шинжилгээ (ELISA) ашиглан хэмждэг. Фибринолитик идэвхийг фибрин/агарозын хавтангийн арга болон 125 1-тэмдэглэгдсэн фибрин хальсыг уусгах аргаар тодорхойлсон. Фибрин/агарозын хавтанг 95% коагуляцитай фибриноген дээр агар нэмж бэлтгэнэ. 1-тэмдэглэгдсэн фибрин хальс 125-ыг уусгах аргыг Hoyraeerts нар тайлбарласны дагуу гүйцэтгэдэг. (J. Biol. Chem. 257, 2912, 1982), Bioscott Inc-ийн үйлдвэрлэсэн хүний ​​меланома эсүүдээс стандарт APT болгон ашиглах. мөн APT-ийн олон улсын стандартын дагуу стандартчилагдсан (Gaffuey and Curtis, Thromb. Haemostas, 53, 34, 1985). 125 1-фибрин хальсыг уусгах аргаар тодорхойлсон үйл ажиллагааны утга ба ферменттэй холбоотой дархлал сорбентын шинжилгээгээр (ELISA) тодорхойлсон эсрэгтөрөгчийн хэмжээнээс тооцсон тусгай үйл ажиллагааны утга нь 300,000-аас 420,000 нэгж/мг эсрэгтөрөгчийн хооронд хэлбэлзэж байна. Жишээ 9. Сайжруулсан APT-ийн фибриний хамаарал ба фибринээр идэвхжих

Verheijen, et al./EMBOJ, 5, 3525, 1986) хийсэн ажлын дагуу сайжруулсан APT-ийн фибринтэй холбоотой байдлыг судалсан. Сайжруулсан буюу байгалийн гаралтай APT (1000 нэгж/мл) фибриногенд янз бүрийн концентрацид нэмээд дараа нь нэг нэгж тромбон нэмээд өрөөний температурт 3 минутын турш урвалд оруулна. Үүссэн фибриний нөжрөлтийг 8 минутын турш 16000 эрг/мин хурдаар центрифугжуулж тунадасжуулах ба фибрин/агарозын хавтангийн аргын идэвхийг хэмжих замаар фибринтэй холбоогүй APT-ийн хэмжээг тодорхойлно. Үүний үр дүнд сайжруулсан APT (VI) нь фибринтэй ижил төстэй шинж чанартай болохыг тогтоожээ. Фибрин байгаа эсвэл байхгүй үед сайжруулсан APT-ээр плазминогенийг идэвхжүүлэх цар хүрээг судлахын тулд дараах туршилтыг хийсэн. Титрлэлтийн хавтанг ашиглан байгалийн гаралтай эсвэл сайжруулсан APT-ийг 0.3 мМ синтетик субстрат p-нироанилид трипептид S-2251 (H-D-Val-leulys-pNA HCl, Kabi Inc. үйлдвэрлэсэн) агуулсан рН 7.5 0.1 M Tris-HCl буферт нэмнэ. ), Плазмингүй 0.13 мкМ плазминоген, 120 мкг/мл DESAFIB TM (American Diagnostics Inc. үйлдвэрлэсэн), 0.1% Tween 80, нийт эзэлхүүнийг 200 мкл. Системийг 37°С хэмд байлгана. Тодорхой хугацааны дараа шингээлтийг (оптик нягтрал) Titertech Multiscan 310 загвар ашиглан 405 нм долгионы уртад хэмжинэ. Сайжруулсан APT (VI) ба байгалийн гаралтай APT-ийн амидолитик үйл ажиллагааны тунгийн хариу урвалын муруйг Зураг дээр үзүүлэв. 22. Байгалийн гаралтай APT-д DESAFIB TM нэмсэнтэй холбоотойгоор тунгийн хариу урвалын муруйн шилжилт 158 дахин их утгатай тохирч байгаа бол сайжруулсан APT-ийн хувьд 100 дахин их байна. Энэ нь DESAFIB TM эм байхгүй үед сайжруулсан APT (VI)-ийн идэвхжил нь байгалийн APT-ийн үйл ажиллагаанаас бага буюу ойролцоогоор 1/20 байдагтай холбоотой юм. Жишээ 10. Туулайн цусны урсгал дахь фибринолитик идэвхжилийн сайжруулсан APT-ийн шинжилгээ. Байгалийн гаралтай APT (n-APT) болон туулайн дээрх шинэ бүтээлийн сайжруулсан APT-ийн үйл ажиллагааг харьцуулах замаар фармакинетик. Зураг дээрээс харж болно. 23, сайжруулсан APT нь идэвхтэй төлөвт орших биологийн хагас задралын хугацааг мэдэгдэхүйц уртасгаж байгааг харуулж байна (байгалийн APT нь хагас задралын хугацааг 1-2 минут, сайжруулсан APT нь 8-15 минутын турш биологийн идэвхжилтэй байдаг). Нэмж дурдахад, 5% (хэрэглэсний дараа 30 секундын утга нь 100%) нь сайжруулсан APT-д хэрэглэснээс хойш 60 минутын дараа ч хэвээр байгаа нь тодорхой байна (байгалийн APT нь 60 минутын дараа 0.1-тэй тэнцэх идэвхжилийг харуулж байна) Эхнийхээс %). Энэ туршилтыг дараах байдлаар гүйцэтгэнэ

Шинжилгээнд 2.4 кг жинтэй япон цагаан туулайг сонгож авдаг. Пентобарбитал мэдээ алдуулалтын дор APT-ийг захын чихний судсаар хийдэг. Тун нь нэг туулайнд 15400 нэгж (0.8 мл) сайжруулсан APT, туулайнд 5400 нэгж (0.8 мл) n-APT (фибриний хавтангийн аргаар тодорхойлсон утгууд) юм. Дараа нь янз бүрийн хугацааны интервалаар (0.5-аас 60 минутын хооронд) гуяны артериас 2.5 мл цус цуглуулж, натрийн цитратын 1/9 (3.8%) дээр нэмнэ. Цус цуглуулсны дараа 30 минутын дотор центрифуг бага хурдтайгаар плазмыг салгадаг. Тусгаарлагдсан сийвэнгийн тусламжтайгаар цусан дахь APT-ийн идэвхийг хэмждэг. (1) APT-ийн үйл ажиллагааг хэмжих. 0.2 мл сийвэнг 3 мМ мөстлөгийн цууны хүчлээр 16 удаа шингэлсний дараа шингэрүүлсэн бүтээгдэхүүнийг бага эргэлтийн хурдаар центрифуг хийж тунадас үүсгэдэг. Тунадасыг 20 мМ Tris-HCl, рН 7.4, 140 мМ NaCl-тай сийвэнгийн эзэлхүүнтэй дүйцэхүйц хэмжээгээр уусгаж эуглобины фракцыг гаргана. APT-ийн үйл ажиллагааг фибрин/агарозын аяганд энэ евглобины фракц нэмэх замаар тодорхойлно. Хавтанг 370С-т 16 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа APT-ийн үйл ажиллагаа нь товруу хэлбэрээр ажиглагддаг. Фибрин/агарозын хавтангийн аргын стандарт муруйг амьтанд хэрэглэхэд ашигладаг APT-ийг 0.1-10,000 нэгж/мл болгон шингэлэх замаар бэлтгэдэг. Ийм аргаар тодорхойлсон цусны APT-ийн идэвхжилийг хэрэглэснээс хойш 30 секундын дараа цус цуглуулснаар олж авсан APT-ийн үйл ажиллагааг 100% болгон ашиглан хувиар илэрхийлнэ. Жишээ 11. Сайжруулсан APT (VI)-ийн дулаан ба хүчилд тогтвортой байдал. Дулааны эсэргүүцлийг тодорхойлохын тулд сайжруулсан APT (VI) ба байгалийн APT-ийг 100 мМ NaCl, 0.01% Tween 80, рН 7.4 агуулсан 50 мМ Tris буферээр тус тус 100 мкг/мл концентрацид шингэлэв. Уусмал бүрийг буцалж буй усанд (температур 98 ° C) 2-60 минут байлгана. Хөргөлтийн дараа үлдэгдэл үйл ажиллагааг фибриний хавтангийн аргаар тодорхойлно. Зурагт үзүүлсэн шиг. 24, сайжруулсан APT (VI) -ийн үйл ажиллагааны бууралт нь байгалийн APT-ийн идэвхжил буурсантай харьцуулахад ач холбогдолгүй юм. Жишээлбэл, 2 минутын турш дулааны боловсруулалт хийсний дараа байгалийн APT-ийн идэвхжил 25% хүртэл буурдаг бол сайжруулсан APT (VI) нь идэвхийг 71% хэвээр хадгалсаар байна. Хүчилд тэсвэртэй байдлыг судлахын тулд сайжруулсан APT (VI) ба байгалийн APT-ийг 0.5N-д уусгана. HCl-ийн уусмалыг 100 мкг/мл концентрацитай, дараа нь тасалгааны температурт 30 минут байлгана. Саармагжуулсны дараа үйл ажиллагааг фибриний хавтангийн аргаар тодорхойлно. Сайжруулсан APT нь үйл ажиллагааны өөрчлөлтийг харуулдаггүй, харин байгалийн APT-ийн үйл ажиллагаа 50% -иар буурсан байна. Жишээ 12 APT (VI) сайжруулснаар идэвхтэй лимфоцит өдөөгч хүчин зүйлийг дарангуйлах

Сайжруулсан APT (VI) болон байгалийн APT-ийг 7% ургийн тугалын ийлдэс, 58 мкМ 2-меркаптоэтанол агуулсан PPM1 1640 эдийн өсгөвөрт зохих ёсоор шингэлсэн. 100 мкл шингэрүүлэлтийг 96 цооногтой эдийн өсгөвөрийн хавтан руу хийж, дараа нь 4-6 долоо хоногтой эр C3H/He J хулганаас тимоцит (210 7 эс/мл) агуулсан 50 мкл эсийн суспенз, конканавалин А (1.2) хийнэ. мкг/мл), түүнчлэн 50 мкл IL-1 (4 нэгж/мл, Aenzyme Inc), дараа нь 5% нүүрстөрөгчийн давхар исэл агуулсан 37 oС температурт инкубаторт 48 цагийн турш тариална. Дараа нь H 3 - тимидиныг 0.5 μ-ийн концентрацид нэмнэ. шоо инч /20 мкл/худаг. 18 цагийн турш өсгөвөрлөсний дараа эсийг шилэн шилэн шүүлтүүр дээр цуглуулж, эсэд оруулсан 3 H-тимидины хэмжээг шингэн сцинтилляцийн тоолуураар хэмжиж, лимфоцитыг өдөөгч хүчин зүйлийн идэвхийг тодорхойлно. 25-р зурагт үзүүлснээр байгалийн APT нь лимфоцитыг өдөөгч хүчин зүйлийн үйл ажиллагааг дарангуйлдаггүй, харин сайжруулсан APT нь үүнийг мэдэгдэхүйц дарангуйлдаг. Зөвхөн уусгагчаар туршиж үзэхэд ямар ч нөлөө үзүүлээгүй. Жишээ 13 Денатурат уураг дээр үндэслэсэн үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагаа. 1) денатурат уураг авах. Уургийн уусмалыг (5 мг/мл) 0.1 Н-д өсгөвөрлөсний дараа. HCl уусмал буюу 0.1 Н. NaOH уусмалыг 37оС-ийн температурт 2-3 цагийн турш уургийн уусмалыг ижил хэмжээний NaOH эсвэл HCl-ээр саармагжуулна. 2) Сайжруулсан APT (VI)-ийн денатурат уургийн хамаарал. Арга: Доор өгөгдсөн процедурын дагуу денатурат уураг нь нитроцеллюлозын хальсанд "наалддаг". Дараа нь уураг, нитроцеллюлозын хальстай эмчилгээтэй холбоотой сайжруулсан APT-ийн хэмжээг хэмжиж, улмаар сайжруулсан APT-ийн денатурат уургийн хамаарлыг үнэлдэг. Нитроцеллюлозын хальсыг 140 мм NaCl агуулсан рН 7.5, 20 мМ Tris-HCl буфер уусмалд дүрнэ. Хатаах. Денатуратжуулсан уураг (50 мкг/10 мкл) нитроцеллюлозын хальсан дээр дусал дуслаар ялгардаг. Хатаах. 3% желатины уусмалаар блоклох. Улайх. Нитроцеллюлозын хальсыг сайжруулсан APT /1 мкг/мл/ уусмалд дүрнэ. Улайх. Плазминоген ба синтетик субстрат S-2251 нэмж, дараа нь 37 ° C-д өсгөвөрлөнө (шингээсэн дэвшилтэт APT-ийн тоон шинжилгээ). 405 нм-ийн шингээлтийн хэмжилт. Үр дүн: Хүснэгт 3-т үзүүлсэнчлэн сайжруулсан APT нь HCl-тэй эмчилсэн иммуноглобулин G, HCl-тэй эмчилсэн альбумин, NaOH-ээр эмчилсэн альбуминтай холбоотой болохыг харуулсан. Нөгөөтэйгүүр, сайжруулсан APT нь бүрэн бүтэн иммуноглобулин G ба альбуминтай холбоотой байдаггүй. 3) Сайжруулсан APT (VI) -ийг денатуржуулсан уургаар идэвхжүүлэх. Хийх арга: сайжруулсан APT идэвхжүүлэгчийн (денатурат уураг, BrCN - боловсруулсан фибриноген гэх мэт) урвалын уусмалд плазминоген (10 мкл-д 0,0078 нэгж), 100 мкл 3 мМ синтетик субстрат S-2251 болон янз бүрийн хэмжээний TBS буфер нэмнэ. янз бүрийн концентрацид 0.275 мл урвалын уусмал авна. Нарийвчилсан APT (25 мкл-д 2.5 н/г) урвалыг эхлүүлэхийн тулд урвалын уусмалд нэмнэ. Тодорхой хугацааны турш урвалд орсны дараа урвалыг зогсоохын тулд 2% натрийн додецил сульфатыг (тэнцүү хэмжээ) урвалын уусмалд нэмнэ. Оптик нягтыг (OD 405) хэмжих замаар сайжруулсан APT-ийн идэвхийг тодорхойлно. Үр дүн: 26-р зурагт үзүүлснээр NaOH-ээр эмчилсэн альбумин ба HCl-тэй эмчилсэн иммуноглобулин G нь сайжруулсан APT-ийн хүчтэй идэвхжүүлэгч нөлөөг харуулсан. Ялангуяа HCl-тэй эмчилсэн иммуноглобулины G-ийн идэвхжил хүчтэй, HCl-тэй эмчилсэн иммуноглобулины G-ийн идэвхжил нь BrCN-ээр эмчилсэн фибриногений идэвхжилтэй ойролцоогоор тэнцүү бөгөөд түүнээс хэд дахин бага концентрацитай байдаг. Бүрэн бүтэн альбумин ба иммуноглобулин G нь идэвхждэггүй. 4) Сайжруулсан APT (VI) нөлөөн дор денатурат уургийн задрал. Арга: Урвалын системд синтетик субстрат S - 2251 нэмдэггүй, денатурат уургийн хэмжээ 133 мкг/ байхаас бусад тохиолдолд өмнөх дэд зүйлд заасан аргын адил нөхцөлд денатуржуулсан уургийг сайжруулсан APT-тай урвалд оруулсны дараа. мл, электрофорезыг -меркаптоэтанолын оролцоотойгоор натрийн додецил сульфаттай полиакриламидын гель хэлбэрээр явуулдаг. Үр дүн: Зураг 27-д үзүүлснээр NaOH эмчилгээ эсвэл HCL-ийн аргаар денатуратлагдсан уураг нь хэв маягаас ef-уургийн зурвас алга болж, задралын бүтээгдэхүүн үүсэхэд хүргэдэг нь түүний задралыг харуулж байна. Нөгөөтэйгүүр, бүрэн бүтэн альбуминыг хэрэглэх үед сайжруулсан APT-тай харилцан үйлчлэлцсэний дараа ef-загварын өөрчлөлт илрээгүй тул денатурат уургийн задрал илрээгүй.

Нэхэмжлэх

H 2 N - амин төгсгөл;

COOH - карбоксидын төгсгөл;

R - үйл ажиллагааны өөрчлөлттэй холбоогүй орлуулалт ба/эсвэл устгах ба/эсвэл оруулгыг агуулсан шууд холбоос эсвэл ижил төстэй дараалал,

Дараах шинж чанаруудтай: 1 2 5 I-фибрин хальсыг уусгах аргаар тодорхойлогддог фибринолитик идэвхжил, фибриний идэвхжих чадвар, фибрин байхгүй үед tpA-ийн идэвхжил сайжирсан нь түүний идэвхжилээс доогуур байдаг. байгалийн tpA, байгалийн tpA-тай харьцуулахад хагас задралын хугацаа нэмэгдсэн, байгалийн tpA-тай харьцуулахад нэмэгдсэн, хүчил ба халуунд тэсвэртэй, лимфоцит идэвхжүүлэгч хүчин зүйлийг дарангуйлах чадвар, денатурат уургаар идэвхжих чадвартай. 2. tpA-ийн аналогийг кодлодог рекомбинант ДНХ-ээр хувиргасан эзэн эсийг өсгөвөрлөх, дараа нь зорилтот бүтээгдэхүүнийг цэвэршүүлэх зэрэг рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгчийг үйлдвэрлэх арга. 1-р зүйлээр tpA-г кодлох ДНХ-ийн дараалал.

Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч нь ялгарсан протеазын бүлэгт хамаарах уураг юм. Плазминогенийг идэвхтэй хэлбэр болгон хувиргадаг - плазмин.

Alteplase (актилиз)– хүний ​​эд эсийн плазминогенийн рекомбинант идэвхжүүлэгч

Уусмал бэлтгэх зориулалттай лиофилжсэн нунтаг: уусгагч (100 мл) бүхий саванд 50 мг.

Эсрэгтөрөгчийн дутагдалтай тул стрептокиназатай өмнөх эмчилгээ хийлгэсний дараа давтан хэрэглэж болно, тромбус фибрин нь өндөр тропизмтай байдаг.

Стандарт хэрэглээний горим: 15 мг эмийг bolus тарьж, дараа нь 50 мг-аар 30 минутын турш дуслаар, дараагийн цагт 35 мг-аар дуслаар хийнэ.

Дахин хавсаргах- гурав дахь үеийн тромболитик. Мансууруулах бодисын хагас задралын хугацаа нь өмнөх эмүүдтэй харьцуулахад нэлээд урт бөгөөд энэ нь судсаар хоёр тунгаар (30 минутын завсарлагатай 10 IU) хэрэглэх боломжийг олгодог.

Тенэктеплаз (метализаци)- гурав дахь үеийн тромболитик.

Энэ нь өндөр сонгомол, плазминоген антиактиватор-1-д тэсвэртэй, хагас задралын хугацаа урт байдаг. Эдгээр шинж чанаруудын улмаас тенэктеплазыг нэг bolus хэлбэрээр хэрэглэж болно. Тенэктеплазын тун нь жингээс хамаардаг бөгөөд ойролцоогоор 30-50 мг (0.53 мг / кг) байдаг.

Болус хэрэглэх боломжтой тул эмийг эмнэлгийн өмнөх үе шатанд (эмнэлгийн өмнөх тромболизийн алтан стандарт) хэрэглэхийг зөвлөж байна.

Тромболизын заалтууд:

1. ЭКГ-д хоёр ба түүнээс дээш зэргэлдээх хар тугалгад ST интервал 1 мм-ээс ихэссэн (V 1-3-д ST өсөлт 2 мм-ээс их) эсвэл зүүн салаа мөчрийн цочмог бөглөрөл (магадгүй) илэрдэг. титэм артерийн бүрэн бөглөрөл бүхэлдээ урагшлах үед), эсвэл идиовентрикуляр хэмнэл.

2. Зүрхний шигдээсийн эхний 6 цаг.

3. Зүрхний шигдээс бүрэн дуусаагүй, эмнэлзүйн зураг нь “мозайк” илэрвэл зүрхний шигдээсийн эхний 12 цагийн дотор байнгын өвдөлт, ST сегментийн өсөлт, Q долгион байхгүй. 12 цагийн дараа тромболиз хийх шийдвэр гарна. эмнэлзүйн зураг, анамнез, ЭКГ дээр үндэслэн хийсэн.

Тромболизын эсрэг заалтууд:

Үнэмлэхүй:

· Өмнө нь цусархаг цус харвалт.

· Тархины судасны бүтцийн гэмтэл (артерийн судасны гажиг)

· Тархины хорт хавдар (анхдагч эсвэл үсэрхийлсэн).

· Сүүлийн 3 сарын дотор ишемийн харвалт.

· Аортын аневризмыг задлах сэжиг.

· Цочмог цус алдалт эсвэл цусархаг диатез.

· Сүүлийн 3 сарын дотор тархи, нугас, нүүрний хэсэгт тархины гэмтэл, мэдрэлийн мэс засал хийлгэсэн.

· Тромболитик эмчилгээний харшлын урвалын түүх.

Хамаатан садан

Хүнд, хяналт муутай АГ-ийн түүх

· Эмнэлэгт хэвтэх үед хүнд хэлбэрийн хяналтгүй артерийн гипертензи (АД 180/110 ммМУБ-аас их).

· 3-аас дээш сарын өмнө тархины судасны осол, дементиа буюу гавлын дотоод эмгэг нь үнэмлэхүй эсрэг заалтуудын жагсаалтад ороогүй болно.

· Өндөр INR (3-4) бүхий шууд бус антикоагулянтуудыг авах.

· Урт хугацааны (10 минутаас дээш) сэхээн амьдруулах арга хэмжээ өмнөх 3 долоо хоногт.

· Өмнөх 3 долоо хоногийн дотор мэс засал хийлгэсэн.

· 2-4 долоо хоногийн өмнө дотоод цус алдалт.

· Жирэмслэлт.

· Цочмог үе шатанд ходоод, арван хоёр нугасны пепсины шархлаа.

· Элэгний хүнд өвчин.

Титэм судасны нөхөн сэргээлтийн үр дүнтэй байдлын шалгуурууд

Ангиографи:

0-р зэрэг - цусны урсгал байхгүй: тодосгогч бодис нь тромбозын талбайн доор ордоггүй;

I зэрэг - хамгийн бага цусны урсгал: тодосгогч бодис нь бөглөрөлийн талбайн доор хэсэгчлэн нэвтэрдэг боловч титэм судсыг дүүргэдэггүй;

II зэрэг - хэсэгчилсэн цусны урсгал: тодосгогч бодис нь түгжрэлийн газраар дамждаг, титэм артерийг дүүргэдэг, гэхдээ ердийн судаснуудаас илүү удаан байдаг;

III зэрэг - ил тод байдлыг бүрэн сэргээх: тодосгогч бодис нь титэм артерийг бөглөрсөн талбайн дээрхтэй ижил хурдаар дүүргэж, суллана.

Инвазив бус:

ST сегментийн хурдацтай динамик: тромболиз эхэлснээс хойш 1.5 цагийн дараа 50% ба түүнээс дээш өсөлттэй хар тугалга дахь ST сегментийн бууралт.

Реперфузийн хэмнэл алдагдах. Тромболиз эхэлснээс хойш 2-3 цагийн дотор ховдолын экстрасистолын хожуу ховдолын хурдасгасан хэмнэл нь хамгийн мэдээлэл сайтай гэж тооцогддог.

Үхжилтийн биохимийн маркеруудын хурдан динамик. Цусан дахь үхжил маркеруудын түвшин тромболиз эхэлснээс хойш 90-120 минутын дараа ("угаах" үзэгдэл) хэд хэдэн удаа нэмэгдэж, нийт CPK-ийн хамгийн дээд түвшинд 12 цагийн дотор хүрч, нөхөн сэлбэх биохимийн шалгуур гэж үздэг. CPK-MB - 6 цаг хүртэл, миоглобин - тромболизийн эхэн үеэс 3 цаг хүртэл.

Тромболиз эхэлснээс хойш 60 дахь минутад өвдөлтийн эрчмийг хурдан бууруулах эсвэл бүрэн арилгах.

ЭМИЙН ЗАРИМ АСУУДАЛ

Цочмог үе дэх өвчтөнүүдийн эмчилгээ

ЗҮРХНИЙ ШИГДЭЭС

Ишемийн үед тогтоосон эмүүд нь миокардийн хүчилтөрөгчийн хэрэглээг бууруулдаг (зүрхний цохилт, цусны даралт, зүүн ховдлын агшилтыг бууруулдаг) ба/эсвэл судас тэлэх шалтгаан болдог.

β-хориглогч эмчилгээ

β-хориглогчдын үйл ажиллагааны тэргүүлэх механизмууд нь:

АД буулгах нөлөөтэй. Энэ нь рениний шүүрэл ба ангиотензин II үүсэхийг дарангуйлах, симпатик мэдрэлийн төгсгөлөөс норэпинефриний ялгаралтыг нэмэгдүүлдэг пресинаптик β-адренерг рецепторуудыг блоклох, төвийн судасны хөдөлгөөний идэвхжил буурахтай холбоотой. Ренин, түүнчлэн ангиотензин II ба альдостероны үйлдвэрлэл буурах нь бөөрний юкстагломеруляр аппарат дахь β1-адренерг рецепторыг блоклох замаар үүсдэг.

Ишемийн эсрэг үйлчилгээтэй. Бета хориглогч нь зүрхний цохилт, миокардийн агшилт, систолын цусны даралтыг бууруулж зүрхний хүчилтөрөгчийн хэрэгцээг бууруулдаг. Үүнээс гадна зүрхний цохилт буурснаас үүссэн диастолын хугацааг уртасгах нь миокардийн цусны урсгалыг нэмэгдүүлэх боломжийг олгодог.

Антиаритмик нөлөө. Зүрхэнд шууд электрофизиологийн нөлөөллийн үр дүн (зүрхний цохилт буурах, эктопик зүрхний аппаратын аяндаа импульс буурах, дамжуулалтыг удаашруулж, тосгуур ховдолын зангилааны галд тэсвэртэй үе нэмэгдэх) нь симпатик нөлөөлөл, миокардийн ишеми буурах, сайжруулахад хүргэдэг. baroreflex функц ба катехоламинаас үүдэлтэй гипокалиеми үүсэхээс урьдчилан сэргийлэх.

Титэм судасны цусны урсгал сайжирнадиастолын хугацаа уртассантай холбоотой. Миокардийн бодисын солилцоог сайжруулах - өөх тосны эдээс катехоламинаас үүдэлтэй чөлөөт тосны хүчлүүдийн ялгаралтыг дарангуйлснаас болж; β-адренерг рецепторуудын мэдрэмжийг сэргээх; миокардид исэлдэлтийн стрессийг бууруулах.

Бета хориглогч нь ус, липид дэх уусах чадвараараа ялгаатай байдаг. Өөх тосонд уусдаг бүтээгдэхүүн(пропранолол, метопролол, окпренолол, бисопролол) нь ходоод гэдэсний замаас амархан шингэж, элгэнд хурдан метаболизмд ордог, их хэмжээний тархалттай, цус-тархины саад тотгороор сайн нэвтэрдэг. Үүний эсрэгээр усанд уусдаг β-хориглогч (ацебутолол, атенолол, бетаксолол, картеолол, эсмолол, надолол, сотолол) нь шингээлт багатай, метаболизм нь удаан, хагас задралын хугацаа урт байдаг. Тиймээс усанд уусдаг эмийг өдөрт нэг удаа ууж болно.

Хэрэв элэгний үйл ажиллагаа суларсан бол өөхөнд уусдаг β-хориглогчдын хагас задралын хугацаа, бөөрний үйл ажиллагаа суларсан бол усанд уусдаг эмийн хагас задралын хугацаа уртасдаг. Энэ нь элэг, бөөрний дутагдалтай өвчтөнүүдэд энэ бүлгийн эмийг сонгох үндэс суурь юм.

Тогтворгүй гемодинамиктай(цусны даралт муу хяналттай байх эрсдэл өндөр, жишээлбэл, миокардийн шигдээсийн цочмог эсвэл цочмог үед), богино хугацаанд үйлчилдэг β-хориглогчдыг хэрэглэх нь оновчтой бөгөөд энэ нь өвчний эмнэлзүйн илрэлийг хянах боломжийг олгодог.

Таб. Анаприлини 20 мг 1 шахмалаар өдөрт 3-4 удаа.

Сол. Анаприлини 0.25% уусмалыг 1 мл (2.5 мг) 0.9% NaCl уусмалаар 1:10 харьцаагаар судсаар аажмаар 1 мг-аас эхэлж, үр нөлөө, тэсвэрлэх чадвараас хамааран тунг 5-10 мг хүртэл нэмэгдүүлнэ.

Тогтвортой гемодинамиктаймиокардийн шигдээсийн цочмог үед дараах схемийн дагуу урт хугацааны бета-хориглогчдыг томилохыг зөвлөж байна.

Сол. Метопрололи 0.1% 5 мл (5 мг) 0.9% NaCl уусмалаар 1:10 харьцаагаар 2 минутын турш бутархай алхмаар судсаар аажмаар шингэлнэ; 5 минутын дараа 5 мг-ийг давтан хийнэ; дараагийн 5 мг - өөр 5 минутын дараа; Сүүлчийн тунгаас 15 минутын дараа 12 цаг тутамд 25-50 мг ууна.

Миокардийн шигдээсийн цочмог ба цочмог үе шатанд дараах урт хугацааны β-хориглогчдыг хэрэглэдэг.

Таб. Атенололи 25 мг (50 мг) 1 шахмалаар өдөрт 1 удаа.

Таб. Бисопрололи 2.5 мг (5 мг, 10 мг) 1 шахмалаар өдөрт 1 удаа.

Таб. Небивололи 5 мг 1 шахмалаар өдөрт 1 удаа.

β-хориглогчдыг хэрэглэхэд эсрэг заалттай тохиолдолд дигидропиридин бус кальцийн антагонистуудыг зааж өгнө. Миокардийн шигдээстэй өвчтөнд аюулгүй гэж үздэг цорын ганц кальцийн антагонист юм низолдипин.

Таб. Nisoldipini 5 мг (10 мг) 1 шахмалаар өдөрт 2 удаа.

Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч- плазминоген проферментийг идэвхтэй хэлбэрт хувиргадаг нууц протеазын бүлэгт хамаарах уураг - фибринолитик фермент болох плазмин. Энэ нь дисульфидын гүүр ашиглан плазминогентэй холбогддог амин хүчлүүдийн нэг гинж хэлбэрээр нийлэгждэг. Эд эсийг шинэчлэх, эсийн шилжилт хөдөлгөөнд оролцдог. Ферментийн хэт идэвхжил нь цус алдалт ихсэх, үйл ажиллагаа буурах нь фибринолизийн процессыг дарангуйлахад хүргэдэг бөгөөд энэ нь тромбоз, эмболизмд хүргэдэг.

Ашигласан тэмдэглэгээ: PLAT, tPA.

Генетик

Альтернатив холболтын үр дүнд нэг генээс гурван транскриптийн хувилбар үүсч болно.

Өргөдөл

Рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгч нь тромбоз дагалддаг өвчний эмчилгээнд ашиглагддаг: эдгээр нь (миокардийн шигдээс, уушигны эмболи, ишемийн харвалт). Бүрэн үр дүнтэй байхын тулд эмийг эхний 6 цагийн дотор хийх ёстой. Эмнэлгийн практикт alteplase-ийг Actilyse нэрээр ашигладаг бөгөөд Германы Boehringer Ingelheim эмийн компани үйлдвэрлэдэг.

бас үзнэ үү

"Эд плазминоген идэвхжүүлэгч" нийтлэлийн тойм бичнэ үү.

Холбоосууд

• www.americanheart.org/presenter.jhtml?identifier=4751
• www.guideline.gov/summary/summary.aspx?doc_id=3422

Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийг тодорхойлсон ишлэл

Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч. Эктоферментүүд. Антикоагулянт систем дэх эндотелийн үүрэг. Эд эсийн хүчин зүйл. Плазминоген идэвхжүүлэгч дарангуйлагч. фон Виллебранд хүчин зүйл. Антикоагулянтууд.

Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчнь судасны эндотелийн нөхөн үржиж, байнга ялгардаг уураг юм. Үүссэн тромбозын эсрэг шууд орон нутгийн тромболитик үйл ажиллагааг хангана. Цусан дахь энэ хүчин зүйлийн тогтмол түвшинг хадгалдаг бөгөөд энэ нь цусны системийн тромболитик үйл ажиллагааг хангадаг.

Эктоферментүүд- Эдгээр нь эндотелийн гаралтай ADPase, ATPase, аденозин хувиргагч фермент юм. Эндотелийн ADPase нь идэвхжүүлсэн тромбоцитуудаас ялгардаг өдөөн хатгасан ADP-ийг хурдан задалдаг.

Судасны эндотелийн эсүүдсинтез болон протромботик хүчин зүйлүүд: эдийн хүчин зүйл, плазминоген идэвхжүүлэгч дарангуйлагчид, фон Виллебранд хүчин зүйл.

Эд эсийн хүчин зүйлнь 46 кДа жинтэй эсийн мембраны цогц уураг юм. Эс гэмтэх үед түүний молекулын нэг хэсэг нь коагуляцийн хүчин зүйл Вила-тай нягт холбогдож, цусны бүлэгнэлтийн гаднах замд хурдасгагч үүрэг гүйцэтгэдэг.

Плазминоген идэвхжүүлэгч дарангуйлагч-Би бол цусны эргэлтэнд байдаг 52 кДа уураг. Плазминоген идэвхжүүлэгчтэй нягт холбогдож түүнийг идэвхгүй болгож, улмаар бие махбод дахь фибринолизийн зохицуулалтад оролцдог.

фон Виллебранд хүчин зүйлнь 1-20 сая Да жинтэй олон хэмжээст молекул бөгөөд эндотелээр нийлэгжиж, эндотелийн шүүрлийн мөхлөгт хадгалагддаг. Тэднээс ялгарснаар ялтасны наалдамхай молекулын үүрэг гүйцэтгэж, тэдгээрийн нэгтгэлийг дэмждэг. Эндотелиас фон Виллебранд хүчин зүйлийн ялгаралтыг ихэсгэх нь тромбиноор өдөөгддөг.

Судас дахь цусны бүлэгнэлЭндотелийн гөлгөр гадаргуу нь идэвхтэй протромбиназа үүсэх дотоод замд орохоос сэргийлдэг. Эндотелийн гадаргуу дээр шингэсэн мономолекул уургийн давхарга нь цусны бүлэгнэлтийн хүчин зүйл, ялтасыг няцааж, цусны бүлэгнэлтээс сэргийлдэг.

Антикоагулянтуудэмнэлзүйн практикт ашигладаг. Жишээлбэл, зүрхний титэм судасны өвчтэй өвчтөнүүдэд цусны бүлэгнэлтийн өсөлтийг бууруулах, зүрх судасны аппаратыг ашиглах үед цусны эсийг гэмтээж, улмаар цусны бүлэгнэлтийн дотоод зам идэвхждэг.

Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийн эмчилгээнд рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгчийг ашиглах

UDC 616.145.154-065.6 ГРНТИ 76.29.56 VAK 01/14/07

© С.Н.Тулцева

нэрэмжит Санкт-Петербург Улсын Анагаах Ухааны Их Сургуулийн клиниктэй нүдний эмгэг судлалын тэнхим. Академич I. P. Павлов, Санкт-Петербург

Энэхүү тойм нь нүдний торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийг эмчлэхэд рекомбинант эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн гүйцэтгэх үүргийн талаарх уран зохиолын мэдээлэл болон бидний хийсэн судалгааны үр дүнд дүн шинжилгээ хийсэн болно. rtPA бэлдмэлийн шинж чанарыг өгч, үйл ажиллагааны механизм, заалт, нүдний практикт хэрэглэх үед гарч болзошгүй хүндрэлүүдийг тайлбарласан болно.

е Түлхүүр үг: торлог бүрхэвчийн төв венийн бөглөрөл; тромболиз; эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч.

Торлог бүрхэвчийн венийн тромбозын тархалт 40-өөс дээш насны 1000 хүнд 2.14 орчим, 64-өөс дээш насны бүлэгт 1000 хүн тутамд 5.36 тохиолдол байдаг. Үүний зэрэгцээ торлог бүрхэвчийн төв венийн мөчрүүдийн бөглөрлийн тохиолдол (1000 хүнд 4.42) нь торлог бүрхэвчийн төв венийн бөглөрлийн тархалтаас (1000 хүнд 0.8) их байна. Өвчтөнүүдийн нас 14-92 насны хооронд хэлбэлздэг. Торлог бүрхэвчийн венийн тромбоз бүхий өвчтөнүүдийн хамгийн том бүлэг нь 40 ба түүнээс дээш насны өвчтөнүүд (дунджаар 51.4-65.2 жил).

Одоогийн байдлаар өвчнийг "залуужуулах" тодорхой хандлага ажиглагдаж байна. Тиймээс бидний мэдээллээр 2000 онд ОХУ-ын баруун хойд бүс нутагт нүдний торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөл ихэвчлэн өндөр настай хүмүүст ажиглагдсан - тохиолдлын 74%. 40-өөс доош насны бүлэгт өвчин нь зөвхөн 1% -д, 41-60 насныханд 25% -д тохиолддог. 2009 онд эдгээр үзүүлэлтүүд аль хэдийн 59%, 2%, 39% байсан.

Европ, Азийн насанд хүрэгчдийн 16.4 сая орчим нь торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөлтэй байдаг бөгөөд 2.5 сая нь төвийн венийн тромбоз, 13.9 сая нь салбар төвийн венийн тромбозоор өвчилдөг.

Торлог бүрхэвчийн төв венийн бөглөрөл үүсэх гол шалтгаан нь склерагийн ламина криброзын хэсэгт склерозын төв торлог бүрхэвчийн артерийн венийн механик шахалт юм; шахалтын талбайн венийн хананы трофикийг орон нутгийн тасалдуулж, улмаар эндотелийн гажиг, тромбоз. Нэмэлт эрсдэлт хүчин зүйлүүд нь артерийн гипертензи, гиперлипидеми, гипергликеми, тромбофили, нүдний гипертензи гэх мэт.

Торлог бүрхэвчийн төв венийн цусны урсгалыг хэвийн болгохын тулд түүнийг үүсгэсэн хоёр үндсэн шалтгаанаар ажиллах шаардлагатай.

бөглөрөл. Нэгдүгээрт, савыг задлах хэрэгтэй. Хоёрдугаарт, тромболиз хийх. Энэ эмгэгийг эмчлэх эхний чиглэл нь олон туршилтын болон эмнэлзүйн судалгааны сэдэв байсан бөгөөд үүний утга нь декомпрессив нейротоми хийх явдал юм. Манай улсад хоёр дахь чиглэл нь удаан хөгжиж байгаа бөгөөд энэ асуудлыг хөндсөн хэвлэл цөөн. Үүний гол шалтгаан нь орчин үеийн тромболитик эмийн хүрэлцээ муу, түүнчлэн өвчтөнд яаралтай тусламж үзүүлэх анхан шатны эмч, мэргэжилтнүүдийн онолын бэлтгэл хангалтгүй байгаатай холбоотой гэж бидний үзэж байна.

Цус тогтоогч ямар холбоос нь тодорхой тромболитик бодисоор нөлөөлж, өвчний эхэн үеэс эхлэн хэрэглэх ёстойг ойлгохын тулд байгалийн фибринолизийн механизмыг авч үзэх шаардлагатай.

Тромболиз нь идэвхжүүлэгчийн нөлөөн дор түүний урьдал плазминогенийг идэвхжүүлсний үр дүнд үүсдэг плазмины нөлөөн дор үүсдэг.

Плазминогенийг идэвхжүүлэх хоёр зам байдаг - дотоод ба гадаад (Зураг 1). Тэргүүлэх дотоод механизм нь цусны бүлэгнэлтийг өдөөдөг хүчин зүйл болох X11a хүчин зүйлээр өдөөгддөг бөгөөд энэ нь прекал-ликреин ба өндөр молекул жинтэй плазмын кининоген (HMK) -тай харилцан үйлчилж, плазминогенийг идэвхжүүлдэг. Энэхүү фибринолизийн зам нь цусны бүлэгнэлтийн дараа биш, харин плазмины системийг идэвхжүүлдэг үндсэн зам юм. Энэ нь "хаалттай мөчлөг" -д ажилладаг, учир нь үүссэн калликреин ба плазмины эхний хэсэг нь XII хүчин зүйлийн нөлөөгөөр протеолиз болж, хэсгүүдийг салгаж,

Цагаан будаа. 1. Фибринолизийг идэвхжүүлэх дотоод ба гадаад замууд

Pro-u-PA - проурокиназа; u-PA - urokinase плазминоген идэвхжүүлэгч; t-PA - эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч; PAI-1 - плазминоген идэвхжүүлэгч дарангуйлагч; КК - калли-креин; Pre-KK - prekallikrein; HMK - өндөр молекул жинтэй кининоген; Cl-ing - 1-р нэмэлт бүрэлдэхүүн хэсгийн дарангуйлагч; PDF - фибриний задралын бүтээгдэхүүн

түүний нөлөөн дор прекалликреиныг калликреин болгон хувиргах нь нэмэгддэг.

Гадны замын дагуу идэвхжүүлэх нь цусны судсыг бүрхсэн эндотелийн эсүүдэд үүсдэг эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч (TPA) -ын ачаар хийгддэг. Эндотелийн эсүүдээс 1PA-ийн шүүрэл нь тогтмол бөгөөд янз бүрийн өдөөгч хүчин зүйлийн нөлөөн дор нэмэгддэг: тромбин, олон тооны даавар, эм, стресс, эд эсийн гипокси, гэмтэл.

Плазминоген ба 1PA нь фибринтэй тодорхой хамааралтай байдаг. Фибрин гарч ирэх үед плазминоген ба түүний идэвхжүүлэгч нь түүнтэй холбогдож гурвалсан цогцолбор (фибрин + плазминоген + 1PA) үүсгэдэг бөгөөд тэдгээрийн бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь плазминогенийг үр дүнтэй идэвхжүүлэхийн тулд байрладаг. Тиймээс плазмин нь фибриний гадаргуу дээр шууд үүсдэг бөгөөд энэ нь цаашлаад протеолитик задралд ордог. Хоёр дахь байгалийн плазминоген идэвхжүүлэгч нь бөөрний хучуур эд ба макрофагаар нийлэгждэг урокиназа төрлийн идэвхжүүлэгч юм. Плазминогенийг идэвхжүүлэх нь эндотелийн эсүүд болон цусны бүлэгнэл үүсэхэд шууд оролцдог хэд хэдэн цусны эсүүдийн гадаргуу дээрх тусгай рецепторууд дээр явагддаг. Ер нь сийвэн дэх урокиназын түвшин 1PA-ийн түвшнээс хэд дахин их байдаг.

Плазминоген идэвхжүүлэгчийн нөлөөн дор үүссэн плазмин нь идэвхтэй богино хугацааны фермент (цусны урсгал дахь хагас задралын хугацаа 0.1 секунд) бөгөөд зөвхөн фибрин төдийгүй фибриноген, коагуляцийн хүчин зүйл V, VIII болон бусад сийвэнгийн уургийн протеолизийг үүсгэдэг. Плазмины үйл ажиллагааг хэд хэдэн дарангуйлагчид хянадаг бөгөөд тэдгээрийн гол нь хурдан ажилладаг a2-антиплазмин, син-

элгэнд нийлэгждэг, α2-макроглобулин ба С1-эстераза дарангуйлагч.

Фибринолизийг хязгаарлах хоёр дахь механизм нь плазминоген идэвхжүүлэгчийг дарангуйлах явдал юм. Физиологийн хувьд хамгийн чухал нь плазминоген идэвхжүүлэгч дарангуйлагч PAL1 юм. Энэ нь эд эс болон урокиназа төрлийн идэвхжүүлэгчийн аль алиныг нь идэвхгүй болгож, эндотелийн эс, ялтас, моноцитэд нийлэгждэг. Түүний шүүрлийг эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч, тромбин, үрэвслийг зуучлагч цитокин, бактерийн эндотоксины нөлөөгөөр сайжруулдаг.

Тромболитик (Грек хэлнээс thombos - цусны бүлэгнэл, lytikos - уусдаг) эмийг шууд ба шууд бус тромболитик (фибринолитик) гэж хуваадаг. Эхний бүлэгт фибринд шууд нөлөөлдөг бодисууд орно. Энэ фармакологийн бүлгийн төлөөлөгч нь фибринолизин юм. Хоёр дахь бүлэгт плазминоген идэвхжсэний улмаас фибринолизийг өдөөдөг эмүүд орно (Зураг 2). Эдгээрт янз бүрийн плазминоген идэвхжүүлэгчид - стрептокиназа, урокиназа гэх мэт орно.Эдгээр нь тромболитик эмчилгээний түүх эхэлсэн анхны шууд бус тромболитикууд юм.

Стрептокиназыг С бүлгийн β-цус задлагч стрептококкоос, урокиназыг хүний ​​шээснээс гаргаж авдаг. Эерэг чанаруудаас гадна эдгээр бодисууд нь хэд хэдэн сул талуудтай байсан: тэд харшлын урвал үзүүлж, цэвэршүүлэхэд хүндрэлтэй байсан тул вирусын халдвар авах эрсдэлтэй, өндөр өртөгтэй тул үйлдвэрлэл нь ашиггүй байв. Өнгөрсөн зууны 80-аад онд тэдгээрийг хоёр дахь үеийн шууд бус тромболитикуудаар сольсон. Эдгээрт рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгч (rTPA) ба рекомбинант проурокиназа орно. Эдгээр эмүүд нь генетикийн инженерчлэлээр бүтээгдсэн бөгөөд үнэндээ байгалийн серин протеазууд юм.

Цагаан будаа. 2. Шууд бус тромболитик эмийн үйл ажиллагааны зарчим

iTPA - эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч дарангуйлагч;

PDF - фибриний задралын бүтээгдэхүүн

өөрөөр хэлбэл, байгалийн нөхцөлд тромболизийн үйл явцад оролцдог бодисууд. Хоёр дахь үеийн тромболитикуудын төлөөлөгчид нь актилиз, гемаза гэх мэт.

Одоогийн байдлаар уугуул rtPA молекулыг өөрчилснөөр энэ протеазын шинж чанарыг сайжруулах боломжтой болсон. Гурав дахь үеийн шууд бус тромболитикууд ийм байдлаар гарч ирэв - ретеплаза, монтеплаза, ла-нетеплаза, тенэктеплаз.

Нүдний эмчилгээнд хоёр дахь (актилиз, гемаза) ба гурав дахь (тенекттеплаз) үеийн шууд бус тромболитикийг ихэвчлэн ашигладаг.

Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч (tPA) нь ихэвчлэн нүдний алимны бүх бүтцэд байдаг. Зарим эрдэмтдийн үзэж байгаагаар нүдний алим дахь tPA-ийн гол эх үүсвэр нь трабекуляр тор, цилиар бие, торлог бүрхэвчийн пигмент хучуур эд юм. Өрөөнд агуулагдах эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн ердөө 10% нь идэвхтэй төлөвт байгаа бол үлдсэн 90% нь PAI-1 дарангуйлагчтай холбоотой байдаг. Нүдний дотоод бүтцээс ялгардаг эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч ямар үүрэг гүйцэтгэдэг, ямар үйл явцад оролцдог вэ? Одоогоор эдгээр асуултад тодорхой хариулт алга байна.

Нулимсны шингэн, урд танхимын чийг, цусны сийвэн дэх tPA дутагдал нь ихэвчлэн нүдний торлог бүрхэвчийн венийн судасны цусны эргэлтийн эмгэг дагалддаг харааны эрхтний өвчинтэй холбоотой байдаг. Үүнтэй холбогдуулан tPA-ийн үндсэн дээр бий болгосон эмийг хэрэглэх нь энэ эмгэгийг эмчлэх хамгийн байгалийн арга юм. Үнэндээ ийм эмчилгээг орлуулах эмчилгээ гэж нэрлэж болно.

1986 оноос хойш АНУ-ын нүдний эмч нар, дараа нь дэлхийн эрдэмтэд, тэр дундаа Оросын эрдэмтэд рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгч (rTPA) агуулсан Actilyse (Boehringer Ingelheim Pharma) эмийн нүдний янз бүрийн өвчний явц дахь үр нөлөөг судалж байна. Нүдний эмчилгээнд rtPA хэрэглэх гол шинж тэмдэг нь фибриноз эксудат, цусны бүлэгнэл, тромби үүсэх дагалддаг эмгэгүүд юм.

Энэ эмийн тун ба оновчтой аргуудын талаархи асуултууд өнөөг хүртэл идэвхтэй яригдаж байна. Бусад ферментүүдийн нэгэн адил tPA нь өндөр молекул жинтэй байдаг. Үүнтэй холбогдуулан нүдний алимны фиброз мембранаар дамжин нэвтрэх нь хэцүү байж магадгүй гэж таамаглаж байсан. Гэсэн хэдий ч туршилтын судалгаагаар рекомбинант эдэд плазминоген идэвхжүүлэгч сайн нэвтэрдэг болохыг харуулсан

нүдний дотор эвэрлэг ба склерагаар дамжин эпибулбар ба коньюнктивийн доорхи эмчилгээний замууд. Нүдний доорхи зайд 25 мкг rtPA тарьснаас хойш 10 минутын дараа урд камерын шингэн дэх ферментийн концентраци арав дахин нэмэгддэг (0.8 нг / мл-ээс 7.5 нг / мл хүртэл). tPA-ийн идэвхжил нь эмгэгийн субстратыг дор хаяж 6 цагийн турш задлахад хангалттай хэвээр байна.

Нүдний арын сегментийн эмгэгийг эмчлэхдээ тромболитик нөлөөг хурдан авахын тулд intravitreal тарилга хийдэг. Сүүлийн үед нүдний эмч нар интравитреал тромболизийн хувьд rtPA-ийн хамгийн бага тунг хэрэглэх нь зүйтэй гэж үзэх хандлагатай байна. Энэ дүгнэлтийг янз бүрийн тунгаар ферментийн торлог бүрхэвчинд үзүүлэх нөлөөг судалсны дараа хийсэн. Хэрэглэсний дараа гистологийн шинжилгээ хийдэг

Лабораторийн амьтдын (харх, туулай, муур, гахай) шилэн биед 25, 50, 75, 100 мкг rtPA (Actilyse) оруулах нь 50 мкг-аас дээш тунгаар хэрэглэхэд хортой нөлөө үзүүлдэг нь батлагдсан. Бидний судалгаагаар rTPA-ийг туулайн шилэн биед 20 мкг-аас дээш тунгаар нэвтрүүлэх нь торлог бүрхэвчийн пигмент хучуур эд (RPE) давхаргад өөрчлөлт оруулдаг болохыг харуулсан. Эсийн хэлбэр өөрчлөгдөж, RPE эсүүд бусад давхарга руу шилжиж, пигмент ялгарснаар бие даасан эсийн бүрэн бүтэн байдал алдагддаг.

tPA өөрөө эсвэл Actilyse-д агуулагдах туслах бодисууд нь хортой эсэх нь тодорхойгүй хэвээр байна. Амьтны судалгаагаар олж авсан rTPA-ийн хоруу чанарын талаарх мэдээлэл нь хүний ​​эмчилгээнд хэрэглэхэд тохиромжтой, аюулгүй тунг сонгоход шууд бусаар тусалдаг. Нэгдүгээрт, нүдний алимны параметрүүд нь харьцуулшгүй (шиний биеийн эзэлхүүн, торлог бүрхэвчийн архитектур гэх мэт). Хоёрдугаарт, шилэн биед эмгэг субстрат (цусны бүлэгнэл, фибрин) байгаа нь чөлөөт rtPA-ийн хэмжээг бууруулж, улмаар түүний хоруу чанарыг бууруулдаг. Гуравдугаарт, торлог бүрхэвчийн ишемитэй холбоотой өвчний үед (чихрийн шижингийн ретинопати, төв венийн ишемийн бөглөрөл) rtPA-ийн тун нь бүр бага байх ёстой, учир нь 50 мкг эмийг нэвтрүүлсэн ч эсийн апоптоз үүсдэг. нүдний торлог бүрхэвчийн гаднах давхарга үүсдэг. Онцгой тохиолдол бол шилэн хагалгааны дараа болон шилэн хөндийг хийн агаарын хольцоор дүүргэх үед rtPA хэрэглэх явдал юм. Түүнээс гадна эмийг бага тунгаар хэрэглэх нь хортой нөлөө үзүүлдэг.

1986 оноос хойш эмнэлзүйн судалгаанд rTPA бэлдмэлийг нүдний эмч нар эмнэлзүйн янз бүрийн нөхцөлд ашиглаж ирсэн. Хамгийн түгээмэл шинж тэмдэг бол байгаа байдал юм

нүдний урд талын камерт фибрин ба цусны бүлэгнэл

Учир нь шилэн бие дэх фибрин эксудат ба цус, шүүлтүүрийн дэрний хэсэг дэх фибрин ба глаукомын эсрэг мэс заслын дараах фистулууд, нүдний торлог бүрхэвчийн өмнөх болон доорх цус алдалт, торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөл. Мансууруулах бодис хэрэглэх тун, хэрэглэх арга нь өөр өөр байдаг. Эрт үеийн судалгаанууд нь цочмог миокардийн шигдээсийн эмчилгээнд зориулж боловсруулсан дэглэмийн дагуу Actilyse-ийг судсаар тарихад чиглэгддэг. Гэсэн хэдий ч цусархаг хүндрэл үүсэх эрсдэлтэй, түүнчлэн цусан дахь rtPA-ийн хагас задралын хугацаа богино (5 минут орчим) холбоотой асуудлын улмаас энэ аргыг орхисон. Одоогийн байдлаар нүдний практикт rtPA бэлдмэлийг зөвхөн орон нутгийн хэмжээнд явуулдаг.

Коньюнктивийн дор хэрэглэхэд rtPA-ийн санал болгож буй тун нь 25 мкг, камерын дотор тарих - 3-10 мкг, интравитреал тарилга - 50 мкг эм юм. Хэд хэдэн судалгаагаар гол венийн их бие бөглөрсөн тохиолдолд rTPA уусмалыг (20 мкг / мл) төв венийн венийн салаанд оруулснаар сайн тромболитик нөлөөтэй болохыг баталсан. Ихэнх нүдний эмч нар эмийг орон нутагт хэрэглэх үед хурдан тромболиз, харшлын урвал байхгүй, системийн аливаа хүндрэлийг тодорхойлдог. Шилэн хагалгааны дараа 50 мкг тунгаар шилэн хөндий рүү 2 удаа тариулсан rtPA-ийн хоруу чанар, торлог бүрхэвчийн доорх цус алдалтыг мултлах зорилгоор хий-агаарын хольцыг хэрэглэсэн гэсэн ганцхан тайлан байдаг.

Рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгч нь бусад тромболитик эмүүдээс чанарын хувьд мэдэгдэхүйц давуу юм - гемаза, плазминоген, стрептокиназа гэх мэт Энэ нь торлог бүрхэвчийн венийн цочмог бөглөрлийг эмчлэхэд бараг зайлшгүй шаардлагатай хэрэгсэл юм.

CVS бөглөрлийн үед үүсдэг судасны хананы нэвчилт ихсэх нөхцөлд rTPA нь шилэн эсээс венийн цусны урсгал руу нэвтэрч чаддаг. Энэ шинж чанар нь энэ эмгэгийг эмчлэх шинэ аргыг боловсруулах үндэс суурь болсон - rTPA (Actylise - aiertase, Metalyse - Intercept, Monteplase) дээр суурилсан эмийг интравитреаль хэлбэрээр хэрэглэх. Эдгээр эмүүд нь артерийн тромбоз (миокардийн цочмог шигдээс, цус харвалт) дагалддаг өвчнийг эмчлэхэд фибриний бүлэгнэл ("шинэхэн" цусны бүлэгнэлтийн үндэс) дээр тогтсон плазминоген дээр ажилладаг тул эхний 6 цагийн дотор хэрэглэдэг. өвчний. Хожуу үе шатанд тромболитик нөлөө бага байдаг. Венийн судсыг эмчлэх үед

тромбоз, эмчилгээг эхлэх хугацааг хэд хоног хүртэл сунгаж болно.

Гистологийн шинжилгээгээр CVS-ийн бөглөрөл үүссэнээс хойш 7-14 хоногт тромбо үүсэх эхэлдэг. Үүнтэй холбоотойгоор тромболитик эмчилгээний хамгийн сайн үр нөлөөг өвчний эхэн үеэс эхний долоо хоногт хүлээж болно.

Төв венийн тромбоз дахь rtPA-ийн тромболитик нөлөөг судлахад зориулагдсан гадаадын ихэнх судалгаанд энэ баримтыг анхаарч үздэггүй. Тиймээс J. M. Lahey, D. S. Fong, J. Kearney (1999), A. Glacet-Bernard, D. Kuhn, A. K. Vine нар. (2000), M. J. Elman, R. Z. Raden нар. (2001), Ж.С.Вейзер, С.Фекрат (2003), К.Сузума, Т.Мураками, Д.Ватанабе нар. (2009) венийн бөглөрлийн анхны илрэлээс хойш дунджаар 21 хоногийн дараа шилэнд rtPA-г оруулсан. Энэ нь зохиогчдын олж авсан эргэлзээтэй эмчилгээний үр нөлөөг тайлбарлаж магадгүй юм. Тарилга хийснээс хойш 6 сарын дараа өвчтөнүүдийн 36% -д нь хараа сайжирсан. Энэ нь голчлон ишемийн бус хэлбэрийн бөглөрөлтэй өвчтөнүүдэд хамаатай. Энэ нь rtPA-ийн хэрэглээний үр дагавар уу эсвэл өвчний байгалийн явцын илрэл үү гэдэг нь хяналтын бүлэг, статистик дүн шинжилгээ хийгдээгүй тул тодорхойгүй байна.

Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөл үүссэнээс хойшхи эхний 3 хоногт rtPA-ийг intravitreal хэрэглэсэн тухай уран зохиолд зөвхөн нэг тайлан байдаг. N. G. Ghazi, B. Nureddin, R. S. Haddad нар. (2003) CVS-ийн бөглөрөлтэй 12 өвчтөнд rtPA-ийг судсаар тарьж хэрэглэсэн бөгөөд үүнээс 4 нь ишеми өвчтэй байсан. Төв венийн ишемийн бөглөрөлөөс бусад бүх тохиолдолд харааны үйл ажиллагаа мэдэгдэхүйц сайжирсан. Анхны хараа нь 20/200-аас бага байсан өвчтөнүүдийн 55% -д нь ажиглалтын төгсгөлд хараа 20/50 болж сайжирсан.

2009 онд бид ижил төстэй судалгаа хийсэн. Ажлын өвөрмөц шинж чанар нь олж авсан өгөгдлийн найдвартай байдлыг үнэлэхэд хангалттай өвчтөнүүдийн тоо байв; хяналтын бүлэг байгаа эсэх; rTPA-ийн хамгийн бага тунг (50 мкг) хэрэглэх; эмчилгээнд тохирсон эмчилгээг эхлэх цаг. Эмчилгээний өвөрмөц чанар нь rtPA-ийн интравитреал эмчилгээг Wessel Due F (Альфа Вассерманн) системчилсэн хэрэглээтэй хослуулсан явдал байв. Энэ эм нь гепариноидын бүлэгт багтдаг бөгөөд судасны эндотелийн үйл ажиллагааг сэргээх шинж чанартай байдаг. Wessel Due F-ийг хэрэглэх үед олж авсан мэдэгдэж буй нөлөөллийн нэг бол өөрийн идэвхтэй эд эсийн үйлдвэрлэлийг нэмэгдүүлэх явдал юм.

плазминоген торус ба PAI-1 идэвхжил буурсан. Энэ нь торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөлтэй өвчтөнүүдэд ихэнх тохиолдолд тохиолддог гиперкоагуляци ба гипофибринолизийн үзэгдлийг багасгах боломжийг олгодог.

Бидний судалгаагаар rtPA-ийг судсаар тарьсны дараа харааны мэдрэмж жигд бус нэмэгдсэн: хамгийн их үсрэлт нь ферментийг нэвтрүүлснээс хойш нэг өдрийн дараа бараг бүх өвчтөнүүдэд ажиглагдсан (дунджаар 0.08 -).

0.1). Дараа нь ишемийн бус CVS бөглөрөлтэй ихэнх өвчтөнүүд дараагийн 6 сарын хугацаанд алсын хараа аажмаар сайжирсан. Ишемийн CVS бөглөрлийн үед харааны хурц байдал тогтворжсон эсвэл цаг хугацааны явцад улам дорддог.

Нүдний торлог бүрхэвчийн оптик когерент томографийн үр дүн нь rtPA-г интравитреаль тарилга хийснээс хойш дараагийн 24 цагийн дотор алсын хараа сайжирч, толбоны хаван регрессийн хооронд холбоо байгааг харуулсан. Магадгүй энэ нөлөөг шилэн биений арын гиалоид мембраныг салгах өдөөлтөөр тайлбарласан байх.

Торлог бүрхэвчийн венийн тромбозын явц дахь шилэн биед тарьсан rtPA-ийн нөлөөг судалж буй эмнэлзүйн судалгааны бүх өгөгдлийг хураангуй хүснэгтэд үзүүлэв (Хүснэгт 1).

CVS-ийн бөглөрөлийг эмчлэх өөр нэг арга бол судсан дахь тромболитик эмчилгээ юм. Анх удаа 1998 онд Н.Ж.Вейс төвийн венийн ишемийн бөглөрөлтэй өвчтөнд судасны дотуур тромболиз хийжээ. Санал болгож буй хагалгаа нь нүдний торлог бүрхэвчийн венийн аль нэг салбарыг судалдах, 20 мкг/0.1 мл тунгаар rTPA-г болюс өгөх зэрэг стандарт гурван порттой шилэн хагалгааны үндсэн дээр хийгдсэн. Дараа нь J. N. Weiss, L. A. Bynoe нар CVS-ийн бөглөрөлд орсон, ижил төстэй эмчилгээ хийлгэсэн 28 өвчтөний эмчилгээний үр дүнг нийтлэв. Мэс заслын оролцооны туршлага дутмаг, эмчилгээний эцсийн үр дүнг урьдчилан таамаглах боломжгүй байсан тул мэс засал нь зөвхөн харааны функцийг сэргээхэд бараг найдваргүй байсан хүнд тохиолдолд л хийгдсэн. Бүх өвчтөнүүд дунджаар 4.9 сар (0.25-аас 30 сар хүртэл) CVS-ийн бүрэн бөглөрөлтэй байсан. Хагалгааны дараа 12 сарын дараа 22 өвчтөнд харааны мэдрэмж дор хаяж 1 шугамаар сайжирсан. Шилэн цус алдалт хэлбэрийн хүндрэл 7 хүнд ажиглагдсан бол зөвхөн нэг өвчтөнд нэмэлт мэс засал хийлгэх шаардлагатай болсон. Зохиогчид энэ арга нь бусад удирдлагын аргуудаас хэд хэдэн давуу талтай гэж үздэг.

тромболитик: эмийг яг шаардлагатай газарт нь хүргэдэг - цусны бүлэгнэлтийн байршилд; удирдлагын явцад харааны хяналт байдаг; маш бага тунгаар хэрэглэх нь цусны бүлэгнэлтийн ойролцоо хангалттай концентрацийг бий болгодог; Мансууруулах бодисын урсгалын хурдаас хамааран түүний хэрэглээ нь "угалах" нөлөөтэй байж болох бөгөөд энэ нь тромбусыг нүүлгэн шилжүүлж, төвийн судлыг тэлэх боломжийг олгодог.

Эмнэлзүйн судалгаатай зэрэгцэн 2002-2008 онуудад туршилтын ажил үргэлжилж, мэс заслын техникийг хөгжүүлэх, перипапилляр венулийг катетержуулахад ашигладаг тусгай шилэн сувгийг боловсруулах зорилготой. Мөн гистологийн шинжилгээг ашиглан тромболиз хийхэд шаардагдах эмийн тунг сонгож, торлог бүрхэвчийн судаснуудад аюулгүй уусмалын хэрэглээний хурдыг тооцоолсон.

Y. T. Hu, Z. Z. Ma, X. L. Zhang нар. (2003) нь зүрхний судасны бөглөрлийг эмчлэхэд судаснуудын тромболизийн үр нөлөөг туршилтаар нотолсон. J. N. Weiss, L. A. Bynoe нарын санал болгосноор эмчилгээний үр нөлөө нь тарьсан уусмалыг "угаах нөлөө" биш, харин rtPA-ийн тромболитик нөлөө юм. Зохиогчид rTPA уусмалыг хэрэглэх хамгийн оновчтой хурд нь 60 мл / цаг бөгөөд дусаах хугацаа 20 минутаас хэтрэхгүй байх ёстой гэж зохиогчид дүгнэжээ. M. K. Tameesh, R. R. Lakhanpal, G. Y. Fujii нар. (2004) сайн тромболитик нөлөө үзүүлэхийн тулд 200-1000 мкг rTPA-г 0.05 мл / мин хурдтайгаар 25-45 минутын турш өгөх шаардлагатай байв. PVS венулийг катетержуулах гол хүндрэл нь судасны ханыг цоолох явдал юм. Мөн тарьсан уусмалын ил тод байдлаас шалтгаалан цохилтын нарийвчлал, шингэний хөдөлгөөний чиглэлийг үнэлэхэд хүндрэлтэй байдаг. Суваг арилгах үед урвуу урсгалын нөлөө байгаа нь заримдаа шилэн биед цус алдахад хүргэдэг. Манипуляцийг хөнгөвчлөхийн тулд K. Suzuki, Y. Suzuki, S. Mizukochi нар. (2008) rTPA, тэнцвэржүүлсэн давсны уусмал (BSS) болон индоцианин ногоон (ICG) хольцыг 50 мкг/1 мл/0.5 мг харьцаагаар хэрэглэхийг санал болгосон. Хэт улаан туяаны хүрээн дэх флюресценцийн ачаар будаг нь манипуляцийг бүрэн хянах боломжийг олгодог бөгөөд 30-40 микрон диаметр бүхий тусгай шилэн микрокнула ашиглах нь судасны гэмтлийг хамгийн бага хэмжээнд хүртэл бууруулдаг.

Одоогийн байдлаар дэлхий даяар фармакологийн витреолиз дэх рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн үүргийг судлахад ихээхэн анхаарал хандуулж байна. "Фармакологийн витреолиз" гэсэн ойлголт нь

Хүснэгт 1

rtPA-ийн үр нөлөөг судлах клиник судалгаа

rtPA-ийн intravitreal эмчилгээ Битүүмжлэлийн төрөл ба төрөл Өвчтөнүүдийн тоо; ажиглалтын хугацаа; rtPA-ийн тоо Эмчилгээг эхлүүлэх Үр дүн ба хүндрэлүүд

Lahey J. M., Fong D. S., Kearney J. (1999) PCV бөглөрөл - 23; hemiretnal бөглөрөл - 3 Нийт 26 өвчтөн; ажиглалтын хугацаа 6 сар 21 хоног хүртэл өвчтөнүүдийн 69.6% -д нь харааны мэдрэмж сайжирсан эсвэл тогтворжсон; 30.4% -д нь муудсан; 1 өвчтөнд шилэн цус алдалт үүссэн; шинэ судасны хүндрэл гараагүй

Glacet-Bernard A., Kuhn D., Vine A. K. et al. (2000) Төв венийн ишемийн бус бөглөрөл - 10; төв венийн ишемийн бөглөрөл - 3; төв венийн ишемийн бус бөглөрөл ба цилиоретин артерийн бөглөрөл - 2 Нийт 15 өвчтөн; ажиглалтын хугацаа - 6 сар; 75-100 мкг rtPA 1 дэх өдөр - 1 өвчтөн; 2 дахь өдөр - 1 өвчтөн; 4-6 хоног - 7 өвчтөн; 8 дахь өдөр - 2 өвчтөн; 14 дэх өдөр - 2 өвчтөн; 21 дэх өдөр - 2 өвчтөн 2 тохиолдолд ишемийн бус бөглөрөл нь ишеми болж хувирсан; 4 тохиолдолд нүдний торлог бүрхэвчийн эхний ишеми муудсан; 1 тохиолдолд цахилдагны неоваскуляризаци үүссэн; 1 тохиолдолд - торлог бүрхэвчийн судасжилт; Бүх өвчтөнүүд анхны харааны хурц мэдрэмжтэй байсан< 20/40; в конце наблюдения в 36% случаев острота зрения >20/30; 36% -д - өөрчлөгдөөгүй; 28% -д< 20/200; между 1-7 сутками после инъекции произошла отслойка задней гиалоидной мембраны стекловидного тела

Elman M. J., Robert Z. et al. (2001) Төв венийн ишемийн бус бөглөрөл - 5; төв венийн ишемийн бөглөрөл - 4 Нийт 9 өвчтөн; ажиглалтын хугацаа - 6 сар; 100 мкг rTPA Өвчин эхэлснээс хойш дор хаяж 1 сарын дараа Ишемийн бус бөглөрөлтэй бүх өвчтөнүүдийн хараа сайжирч, ишемийн бөглөрөлтэй 2 өвчтөний хараа бага зэрэг сайжирсан; 1 тохиолдолд цахилдагны шинэ судасжилт үүссэн (чихрийн шижин өвчтэй өвчтөнд)

Weizer J. S., Fekrat S. (2003) Төв венийн ишемийн бус бөглөрөл - 1 Нийт 1 өвчтөн; ажиглалтын хугацаа - 14 хоног; 50 мкг rtPA Өвчин эхэлснээс хойш 21 хоног 14 хоногийн дараа харааны мэдрэмж сайжирсан; толбоны хавангийн бүрэн шингээлт; венийн цусны урсгалыг сэргээх

Гази Н.Г., Нуреддин Б., Хаддад Р.С. нар. (2003) Төв венийн ишемийн бус ба ишемийн бөглөрөл Нийт 12 өвчтөн; ажиглалтын хугацаа 6 сар Өвчин эхэлснээс хойш 1-3 хоног 9 өвчтөнд анхны харааны мэдрэмж 20/200; үлдсэн хэсэгт - 20/50-аас бага; хяналтын төгсгөлд 8 (67%) өвчтөн 20/50-тэй тэнцүү буюу түүнээс дээш алсын хараатай байсан; 4 (33%) өвчтөнд хараа өөрчлөгдөөгүй эсвэл муудсан (ишемийн бөглөрөл)

Сузума К., Мураками Т., Ватанабе Д. нар. (2009) Төв мэдрэлийн тогтолцооны бөглөрөл - 37; CVS бөглөрөл ба чихрийн шижингийн ретинопати - 5 Нийт 42 өвчтөн; ажиглалтын хугацаа тодорхойлогдоогүй Эмчилгээний эхлэлийг заагаагүй байна.Чихрийн шижингийн ретинопатигүй өвчтөнүүдэд харааны хамгийн сайн мэдрэмж ажиглагдсан; CVS-ийн бөглөрөлтэй өвчтөнүүдийн 62% нь арын шилний салалт үүссэн; чихрийн шижингийн ретинопати байгаа тохиолдолд эерэг динамик ажиглагдаагүй

Varganova T. S., Astakhov Yu. S., Tultseva S. N. (2009) Төв судасны тогтолцооны ишемийн бус бөглөрөл - 24; төв венийн ишемийн бөглөрөл - 28; хяналтын бүлэг - 52 Нийт 52 өвчтөн; ажиглалтын хугацаа 6 сар; 50 мкг rtPA 1-3 хоног - 17 өвчтөн; 4-7 хоног - 20 өвчтөн; 8-14 хоног - 15 өвчтөн 10 дахь өдөр 0.2-аас 0.4 хүртэл алсын хараа нэмэгдэж, ишемийн бус бөглөрөл тарилга хийснээс хойш 6 сарын дараа 0.6 хүртэл; ишемийн бөглөрөлтэй 10 дахь өдөр 0.04-0.1, 6 сарын дараа 0.3 хүртэл; хүндрэл байхгүй; 2 өвчтөнд нүдний дискний неоваскуляризаци, ишемийн бөглөрөлтэй 1 өвчтөнд торлог бүрхэвч

Энэ нь янз бүрийн фармакологийн эмийг судсаар тарих замаар шилэн биений арын гиалоид мембран (PHM) салалтыг өдөөдөггүй. Төв венийн ишемийн бөглөрөл, шилний бүрэн салалт бүхий нүдэнд торлог бүрхэвч, харааны дискний неоваскуляржилт бараг хөгжөөгүй бөгөөд байнгын толбоны хаван нь бага ажиглагддаг нь батлагдсан. Үүнтэй холбогдуулан умайн хүзүүний хөндийг арилгах буюу өдөөхөд чиглэсэн эмчилгээ нь жагсаасан хүндрэлийг хамгийн бага хэмжээнд хүртэл бууруулах болно.

Туршилтын судалгаагаар rtPA (25 мкг) бага тунгаар ч гэсэн шилэн биед нэвтрүүлэх нь туршилтын амьтдын нүдэн дэх умайн хүзүүний мембраныг 100% -д бүрэн салгахад хүргэдэг болохыг нотолсон. Энэ нөлөө нь vitreous биед плазмины концентраци огцом нэмэгдсэнтэй холбоотой бололтой. Бусад бодисуудын концентраци (гиалуроны хүчил, трансглютаминаза, vitronectin) rTPA-ийг хэрэглэсний дараа өөрчлөгддөггүй. Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч нь шилэн биеийг шингэрүүлж, плазмины хэмжээг ихэсгэж, осмосын мембран ба урд талын хязгаарлагч хавтангийн хооронд био цавуу үүрэг гүйцэтгэдэг бодисуудад нөлөөлдөг. Эдгээр бодисуудад фибронектин, ламинин, IV төрлийн коллаген орно.

Эмнэлзүйн судалгаагаар rtPA-г судсаар тарьсны дараа төвийн судасны тромбозтой өвчтөнүүдэд шилэн эсийн PGM салалт илэрч байгааг нотолсон. Мураками Т., Такаги Х., Охаши Х. нар. (2007), rtPA-г хэрэглэсний дараа 21 нүдний 16-д нь тархины бор гадаргын салалт ажиглагдаж, харааны хурц байдал огцом нэмэгдэж, толбоны хаван буурсан байна. Сузума К., Мураками Т., Ватанабе Д. нар. (2009) энэ төрлийн vitreolysis ашиглан тохиолдлын 64% -д хүлээгдэж буй үр нөлөөг олж авсан. Гэсэн хэдий ч зохиогчид нүдний торлог бүрхэвчийн венийн тромбоз ба чихрийн шижингийн ретинопати хосолсон тохиолдолд rtPA-ийг шилэн биед оруулсны дараа умайн хүзүүний мембран гуужсангүй гэдгийг онцолж байна.

Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийг эмчлэхэд rtPA эмийг хэрэглэх нь маш ирээдүйтэй чиглэл юм. Үзүүлэлт, эсрэг заалт, эмчилгээг эхлэх оновчтой хугацаа, rTPA-ийн хэрэглээний замыг тодорхойлохын тулд олон төвтэй санамсаргүй туршилт хийх шаардлагатай.

НОМ ЗҮЙ

1. Варганова T. S. Торлог бүрхэвчийн төв венийн бөглөрлийн эмгэг төрүүлэгч эмчилгээг оновчтой болгох: Хураангуй. diss. ... Ph.D,

Санкт-Петербург, 2009. - 21 хуудас.

2. Петрачков D.V. Торлог бүрхэвчийн төв судал ба түүний мөчрүүдийн тромбозыг эмчлэх шинэ цогц арга // Сибирийн анагаах ухааны товхимол. - 2008. - No 1. - P. 99-101.

3. Tultseva S. N., Astakhov Yu. S. Залуу өвчтөнүүдэд торлог бүрхэвчийн венийн тромбоз үүсэх шалтгааны хүчин зүйлүүд // Бүс нутгийн цусны эргэлт ба бичил эргэлт. - 2004. - No 4 (12). - хуудас 39-42.

4. Тулцева С.Н., Астахов Ю.С., Умникова Т.С. Торлог бүрхэвчийн венийн тромбозыг эмчлэх орчин үеийн аргууд // Хураангуй цуглуулга. Оросын нүдний эмч нарын VIII их хурал. Москва, 2005 оны 6-р сарын 1-4, Илтгэлүүдийн хураангуй. - М., 2005. - P. 372-373.

5. Тулцева S. N. Торлог бүрхэвчийн венийн тромбоз бүхий өвчтөнүүдийн фибринолизийн эндотелийн зохицуулагчид // Ophthalmological Gazette. - 2009. - T. II, No 1. - P. 4-11.

6. Tultseva S.N., Varganova T.S., Rakhmanov V.V. Торлог бүрхэвчийн венийн тромбозыг эмчлэх тромболитик эмчилгээ // Ophthalmological Gazette. - 2009. - T. II, No 2. - P. 6-14.

7. Тулцева S. N. Нүдний доторх цус алдалт ба фибриний эксудатыг рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгчээр эмчлэх: Зохиогчийн хураангуй. diss. ... Доктор. - Санкт-Петербург, 1995. - 14 х.

8. Berker N., Batman C. Төв торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийн мэс заслын эмчилгээ // Acta Ophthalmol. - 2008. - Боть. 86. - P. 245-252.

9. Chen S. N., Yang T. C., Ho C. L. et al. Intravitreal эдийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн торлог бүрхэвчийн хоруу чанар: тохиолдлын тайлан ба уран зохиолын тойм // Нүдний эмгэг. - 2003. - Боть. 110, N 4. - P. 704-708.

10. Коллен Д., Лижен Х.Р. Эдийн төрлийн плазминоген идэвхжүүлэгч: түүхэн хэтийн төлөв ба хувийн данс // Ж.Тромб. Хэмост. - 2004. - Боть. 2. - P. 541-546.

11. Dabbs C. K., Aaberg T. M., Aguilar H. E. нар. Чихрийн шижин өвчний үед витрэктомийн дараа эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч эмчилгээний хүндрэлүүд // Ам. J. Ophthalmol. - 1990. - Боть. 110. - P. 354-360.

12. Дэвид Р., Зангвилл Л., Бадарна М. нар. Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийн тархвар судлал ба түүний глауком, нүдний дотоод даралт ихсэхтэй холбоотой байдал // Ophthalmologica - 1988. - Боть. 197. - P. 69-74.

13. Diaz-Llopis M, Cervera E. Арын шилний салалт ба фармакологийн vitreolysis: ферментийн витректомийн шинэ эрин үе // Arch. Соц. Esp. Офтальмол. - 2007. - Боть. 82, N 8. - P. 465-466.

14. Elman M. J., Raden R. Z., Carrigan A. Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөлд эд эсийн плазминогений идэвхжүүлэгчийг судсаар тарих // Trans. Ам. Офтальмол. Соц. - 2001. - Боть. 99. - P. 219-221; хэлэлцүүлэг 222-223.

15. Elman M. J. Төв торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөлийн тромболитик эмчилгээ: туршилтын судалгааны үр дүн // Trans. Ам. Офтальмол. Соц. - 1996. - Боть. 94. - P. 471-504.

16. Geanon J. D., Tripathi B. J., Tripathi R. C. et al. Нүдний судасжилтын эдэд эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч: нохой, тугал, сармагчингийн эвэрлэг, линз, усан ба шилэн эсийн үйл ажиллагааны тоон судалгаа // Exp. Нүдний Res. - 1987. - Боть. 44. - P. 55-63.

17. Гази Н.Г., Нуреддин Б., Хаддад Р.С. нар. Торлог бүрхэвчийн төвийн венийн бөглөрлийг эмчлэхэд интравитреал эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч // Торлог бүрхэвч. - 2003. - Боть. 23, N 6. - P. 780-784.

18. Glacet-Bernard A., Kuhn D., Vine A. K. et al. Саяхан үүссэн торлог бүрхэвчийн төвийн венийн бөглөрлийг интравитреал эдийн плазмаар эмчлэх

миноген идэвхжүүлэгч: туршилтын судалгаа // Br. J. Ophthalmol. - 2000. - Боть. 84, N 6. - P. 609-613.

19. Hesse L., Nebeling B., Schroeder B. et al. Криопексийн дараа эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийг судсаар тарих замаар туулайн арын шилний салстыг өдөөх // Exp. Нүдний Res. - 2000. - Боть. 70, N 1. - P. 31-39.

20. Hikichi T., Konno S., Trempe C. L. Нүдний торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөл дэх шилэн эсийн үүрэг // Торлог бүрхэвч. - 1995. - Боть. 15, N 1. - P. 29-33.

21. Hrach C. J., Johnson M. W., Hassan A. S. et al. Муурны нүдэн дэх плазминоген идэвхжүүлэгч уусмалын торлог бүрхэвчийн хоруу чанар // Arch Ophthalmol. - 2000. - Боть. 118, N 5. - P. 659-663.

22. Ху Ю.Т., Ма З.З., Жан X. Л. нар. Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийг эмчлэхийн тулд торлог бүрхэвчийн судсанд tPA дусаах туршилтын судалгаа // Жун-хуа Ян Ке За Жи. - 2003. - Боть. 39, N 11. - P. 645-649.

23. Jaffe G. J., Green G. D., McKay Bs. гэх мэт. Туулай дахь эд эсийн плазминогений идэвхжүүлэгчийн доторх клиренс // Арк Офтальмол. - 1988. - Боть. 106, N 7. - P. 969-972.

24. Johnson M. W., Olsen K. R., Hernandez E. et al. Туулай дахь рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн торлог бүрхэвчийн хоруу чанар // Арк. Офтальмол. - 1990. - Боть. 108. - P. 259-263

25. Kwaan H. C., Samama M. M., Nguyen G. Фибринолитик систем // Клиникийн тромбоз / Kwaan H. C., Samama M. M. eds. - Бока Ратон: CRC Press, 1989. - P. 23-31.

26. Lahey J. M., Fong D. S., Kearney J. Торлог бүрхэвчийн цочмог венийн бөглөрөлд зориулсан интравитреал эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч // Ophthalmic Surg Lasers. - 1999. - Боть. 30, N 6. - P. 427-434.

27. Lam H. D., Blumenkranz M. S. Нүдний торлог бүрхэвчийн төвийн венийн бөглөрөлтийг витрэктоми хийх замаар vitreopapillary and epipapillary adhesions, торлогийн доорх перипапилляр эдэд плазминоген идэвхжүүлэгч тарилга, фотокоагуляци хийх эмчилгээ // Am. J. Ophthalmol. - 2002. - Боть. 134, N 4. - P. 609-611.

28. Lim J. I., Fiscella R., Tessler H. et al. Сэдвийн эдэд плазминоген идэвхжүүлэгчийн нүдний доторх нэвтрэлт // Арк. Офтальмол. - 1991. - Боть. 109. - P. 714-717.

29. Lim J. I., Maguire A. M., John G. et al. Нүдний доорх эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн концентраци // Нүдний эмгэг. - 1993. - Боть. 100. - P. 373-376.

30. Махмуд T. H., Peng Y. W., Proia A. D. et al. Шилэн хөндийд тарьсан рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгч нь судасны бөглөрлийн гахайн загварын торлог бүрхэвчийн судалд нэвтэрч болно // Br. J. Ophthalmol. - 2006. - Боть. 90, N 7. - P. 911-915.

31. Мураками Т., Такаги Х., Кита М. нар. Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөлтэй холбоотой толбоны хаваныг эмчлэхэд зориулагдсан интравитреал эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч // Ам. J. Ophthalmol. - 2006. - Боть. 142, N 2. - P. 318-320.

32. Мураками Т., Такаги Х., Охаши Х. нар. Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөл бүхий толбоны хаван дахь плазминоген идэвхжүүлэгчийн нөлөөгөөр арын шилний салст бүрхүүлийн үүрэг // Торлог бүрхэвч. - 2007. - Боть. 27, N 8. - P. 1031-1037.

33. Мураками Т., Цужикава А., Охта М. нар. Эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчээр эмчилсэн торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөл дэх толбоны хаван арилсны дараа фоторецепторын байдал // Ам. J. Ophthalmol. - 2007. - 143. - P. 171-173.

34. Opremcak E. M., Bruce R. A., Lomeo M. D. нар. Төв торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөлд зориулсан радиаль оптик нейротоми: дараалсан 11 тохиолдлын ретроспектив туршилтын судалгаа // Торлог бүрхэвч. - 2001. - Боть. 21, N 5. - P. 408-415.

35. Osterloh M. D., Чарльз С. Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөлийг мэс заслын аргаар задлах // Arch Ophthalmol. - 1988. - Боть. 106, N 10. - P. 1469-1471.

36. Park J. K., Tripathi R. C., Tripathi B. J. et al. Трабекуляр эндотелийн эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч // Invest. Офтальмол. Вис. Шинжлэх ухаан. - 1987. - Боть. 28. - P. 1341-1345.

37. Rijken D. C., Otter M., Kuiper J. et al. Элэгний эсүүдээр эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч (t-PA) рецептороор дамждаг эндоцитоз // Тромб. Res. - 1990. - Боть. 10, Нэмэлт. - P. 63-71.

38. Rogers S., McIntosh R. L., Cheung N. et al. Торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийн тархалт: АНУ, Европ, Ази, Австралийн популяцийн судалгааны нэгдсэн мэдээлэл // Нүд судлал. - 2010. - Боть. 117, N 2. - P. 313-319.

39. Rowley S. A., Vijayasekaran S., Yu P. K. et al. Туулайн доторх тенэктеплазын торлог бүрхэвчийн хоруу чанар // Br. J. Ophthalmol. - 2004. - Боть. 88, N 4. - P. 573-578.

40. Сузуки К., Сузуки Ю., Мизукоши С. нар. Индоцианин ногоон нь туулайн торлог бүрхэвчийн венийн суваг, эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч тарилгад ашигтай гарын авлага болгон // Тохоку Ж. Мед. - 2008. - Боть. 214. N 4. - P. 351-358.

41. Сузума К., Мураками Т., Ватанабе Д. нар. Чихрийн шижингийн ретинопатитай холбоотой торлог бүрхэвчийн төвийн венийн бөглөрлийг эмчлэхэд зориулагдсан интравитреал эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч // Ниппон Ганка Гаккай Засши. - 2009. - Боть. 113. N 4. - P. 492-497.

42. Tameesh M. K., Lakhanpal R. R., Fujii G. Y., Javaheri M. Нохойн туршилтын торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийг эмчлэхэд зориулсан эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч (t-PA) -ийг удаан хугацаагаар дусаах замаар торлог бүрхэвчийн венийн суваг. // Am. J. Ophthalmol. - 2004. - Боть. 138, N 5. - P. 829-839.

43. Textorius O, Stenkula S. Хоёр фибринолитик эмийн нүдний хорт нөлөө: альбино туулайн дээрх туршилтын электроретинографийн судалгаа // Арк. Офтальмол. - 1983. - Боть. 61. - P. 322-331.

44. Tripathi R. C., Park J. K., Tripathi B. J. et al. Хүний усан хошигнол дахь эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч ба түүний эмчилгээний ач холбогдол // Ам. J. Ophthalmol. - 1988. - Боть. 106. - P. 719-722.

45. Weiss J. N., Bynoe L. A. Торлог бүрхэвчийн төв венийн бөглөрөлтэй нүдний торлог бүрхэвчийн венийн салбар руу эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийг тарих // Нүд судлал. - 2001. - Боть. 108, N 12. - P. 2249-2257.

46. ​​Weiss J. N. Нүдний торлог бүрхэвчийн судалд эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч тарьж төвлөрсөн венийн бөглөрлийг эмчлэх // Ам. J. Ophthalmol. - 1998. - Боть. 126, N 1. - P. 142-144.

47. Weitz J. I., Stewart R. J., Fredenburgh J. C. Плазминоген идэвхжүүлэгчийн үйл ажиллагааны механизм // Тромб. Хэмост. - 1999. - Боть. 82. - P. 974-982.

48. Weizer J. S., Fekrat S. Төв торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийг эмчлэхэд зориулсан интравитреал эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч // Ophthalmic Surg. Лазер дүрслэл. - 2003. - Боть. 34, N 4. - P. 350-352.

49. Yamamoto T., Kamei M., Kunavisaruet P. et al. Торлог бүрхэвчийн төвийн венийн бөглөрлийн загварт интравитреал эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн торлог бүрхэвчийн хоруу чанар нэмэгдсэн // Graefes Arch. Клин. Exp. Офтальмол. - 2008. - Боть. 246. - P. 509-514.

ТОЛОГ БҮЛГИЙН СУДАЛЫН БҮТГЭЛИЙН ЭМЧИЛГЭЭД РЕКБИНАН ЭДИЙН ПЛАЗМИНОГЕН ИДВЭРЛЭГЧИЙГ ХЭРЭГЛЭХ

G хураангуй. Энэхүү тоймд нүдний торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрлийг эмчлэхэд рекомбинант эдийн плазминоген идэвхжүүлэгчийн гүйцэтгэх үүрэг бүхий уран зохиолын мэдээлэл болон өөрийн судалгааны үр дүнг харьцуулсан дүн шинжилгээ хийсэн болно. rTPA бэлдмэлийн тодорхойлолт, тэдгээрийн үйл ажиллагааны механизм, заалт, нүдний практикт хэрэглэхэд гарч болзошгүй хүндрэлүүдийг тайлбарласан болно.

G Түлхүүр үг: нүдний торлог бүрхэвчийн венийн бөглөрөл; тромболиз; эд эсийн плазминоген идэвхжүүлэгч.

Тулцева Светлана Николаевна - Санкт-Петербургийн Улсын Анагаах Ухааны Их Сургуулийн Нүдний тэнхимийн доктор, дэд профессор. acd. Павлова, I. P.

197089, Санкт-Петербург, ст. Л.Толстой, 6-8. барилга 16. И-мэйл: [имэйлээр хамгаалагдсан]

Тулцева Светлана Николаевна - Анагаахын шинжлэх ухааны нэр дэвшигч, туслах профессор, Санкт-Петербург хотын И.П.Павловын нэрэмжит Улсын Анагаах ухааны их сургуулийн нүдний эмгэг судлалын тэнхим, 197089, Санкт-Петербург, Лев Толстойн гудамж, 6-8, байр 16. Цахим шуудан: [имэйлээр хамгаалагдсан]